用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。因此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0039]本发明实施例所涉及的材料均可以通过商业途径或通过申请人获取。
[0040]—方面，本发明实施例提供了一种胶原蛋白的提取方法，如图1所示，包括:
[0041]S1、对预处理后的原料利用酸性溶液进行至少一次抽提，获取抽提混合液；
[0042]S2、将获取的所述抽提混合液进行至少两次盐析纯化，获取胶原蛋白盐析沉淀；
[0043]S3、将所述胶原蛋白盐析沉淀透析、冻干，得到所述胶原蛋白。
[0044]本发明实施例提供一种胶原蛋白的提取方法，对预处理后的原料利用酸性溶液进行至少一次抽提，获取抽提混合液；将获取的所述抽提混合液进行至少两次盐析纯化，获取胶原蛋白盐析沉淀；将所述胶原蛋白盐析沉淀透析、冻干，得到所述胶原蛋白，对预处理后的原料利用酸性溶液进行抽提能够保证预处理后的原料中的胶原蛋白的产率，对抽提混合液采用至少两次盐析纯提取出的胶原蛋白为具有胶原蛋白活性的高纯度I型胶原蛋白，且由于本发明采用抽提而非酶解处理原料，故所获得的胶原蛋白中无胃蛋白酶等蛋白水解酶残留，采用透析，去除了胶原蛋白中杂质及非I型胶原蛋白蛋白质，所得胶原蛋白的纯度不低于95%，采用本发明实施例的胶原蛋白提取方法提取的胶原蛋白由于其具有良好的生物相容性、无毒、弱抗原性、可降解性及安全性等优点，可作为天然生物材料用于生物医学领域。更重要的是可以作为支架材料用于组织工程医学领域，引导组织再生，促进伤口修复愈入口 O
[0045]其中，本发明实施例的原料采用猪、牛或羊的皮或/和腱，优选的本发明实施例采用牛皮作为原料。
[0046]为了去处原料中的皮下组织和腥味，使得最终获得的胶原蛋白产品的纯度较高，无异味。在本发明的一优选实施例中，在SI之前还包括:
[0047]将猪、牛或羊的皮或/和腱清洗灭菌剔除外表皮皮毛和皮下组织后，绞切成颗粒；
[0048]向所述颗粒中加入中性清洗溶液，离心清洗2-5次，收集沉淀，获得所述预处理后的原料。
[0049]其中，对所述中性清洗液的配制不做限定，只要可以在经过中性清洗后使得原料中的皮下组织和腥味减少即可，可选的，在对原料进行清洗时，中性清洗液的重量为所述原料重量的2-3倍，优选的，中性清洗液的重量为所述原料重量的2.5倍。
[0050]为了使得获取的胶原蛋白的纯度较高，生产周期较短，本发明实施例对原料进行离心处理，这样可以避免在提取过程中将杂质引入，且减少了过滤周期，本发明实施例对离心处理的方式不进行限定，只要离心处理后能够获取产量和利用率较高的预处理后的原料即可。
[0051]其中，为了确保获取的胶原蛋白的纯度，在对清洗后的原料进行抽提之前需要严格灭菌处理，本发明实施例对原料清洗后的灭菌处理方式不做限定，只要经过灭菌处理后能够使得原料无菌即可。
[0052]为了提高从预处理后的原料中抽提胶原蛋白的产率并保留胶原蛋白典型的三螺旋结构，且提取的胶原蛋白为具有胶原蛋白活性的高纯度I型胶原蛋白，可以对SI中的预处理后的原料利用酸性溶液进行一次抽提，也可以进行两次或两次以上的抽提，得到抽提混合液，从预处理的原料中进行多次抽提，可以提高后续从预处理后的原料中提取胶原蛋白的产率，本发明实施例对此不进行具体限定。本发明实施例仅以通过两次抽提为例进说明。
[0053]如图2所示，本发明的一优选实施例中，SI可以通过以下方式具体实现:
[0054]S11、所述第一次抽提包括:按照所述预处理后的原料与所述酸性溶液体积比为1:(10-20)将所述预处理后的原料溶解于酸性溶液中，离心收集上清液一和原胶原蛋白沉淀二 ；
[0055]S12、所述第二次抽提包括:将所述原胶原蛋白沉淀二溶解于与第一次抽提等量的酸性溶液中，离心收集上清液二 ；
[0056]S13、将所述上清液一和所述上清液二混合，得到所述抽提混合液。
[0057]其中，抽提又称萃取，是指用酸性溶液浸泡预处理后的原料使预处理后的原料中的胶原蛋白溶于酸性溶液中；优选的，本发明实施例的抽提所采用的酸性溶液为体积浓度为0.5-5%的乙酸溶液，通过乙酸溶液进行抽提预处理后的原料中的胶原蛋白，与现有技术中采用酶解处理原料相比，可以使所获得的胶原蛋白中无胃蛋白酶等蛋白水解酶残留。
[0058]需要说明的是，对预处理后的原料进行一次抽提和两次以上的抽提方式与上述进行两次抽提的方式相同，本发明再次不再赘述。
[0059]为了确保所述预处理后的原料可以完全溶解于所述酸性溶液中，且酸性溶液不会破坏预处理后的原料中的胶原蛋白，优选的，按照所述预处理后的原料与所述酸性溶液体积比为1:15将所述预处理后的原料溶解于酸性溶液中。
[0060]为了保证所提取的胶原蛋白中I型胶原蛋白纯度不低于95%，可以对S2中的抽提混合液进行两次及两次以上的盐析纯化，得到胶原蛋白盐析沉淀，其中，盐析纯化是指利用胶原蛋白在不同浓度的无机盐溶液中形成沉淀的原理，分别采用不同浓度无机盐溶液处理去除I型胶原蛋白中的杂质及除I型胶原蛋白以外的其他蛋白质，优选的，本发明实施例无机盐为氯化钠。
[0061]将获取的抽提混合液中进行多次盐析纯化，可保证所提取的胶原蛋白中I型胶原蛋白纯度不低于95%，本发明实施例对此不进行具体限定。本发明实施例仅以通过三次盐析纯化为例进说明。
[0062]如图3所示，本发明的一优选实施例中，S2可以具体通过以下方式实现:
[0063]S21、所述第一次盐析包括:向所述抽提混合液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为4-6%，静置，离心收集胶原沉淀一；
[0064]通过第一次盐析，可以对所述抽提混合液中的I型胶原蛋白进行初步纯化，将所述抽提混合液中的非胶原物质分离出来，得到胶原物质(胶原沉淀一)。
[0065]优选的，本发明实施例第一次盐析时，向所述抽提混合液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为4-6%。这样，可以防止所述抽提混合液中的非胶原析出，提高最终获得的I型胶原蛋白的产率纯度，又可以使得所述抽提混合液中的胶原尽可能多的析出，提高最终获得的I型胶原蛋白的产率，并且可以减少最终获得的胶原蛋白中由于盐析纯化所带入的无机盐杂质。进一步优选的，向所述抽提混合液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为5%。
[0066]S22、按照胶原沉淀一与缓冲液的体积比为1:20-1:30将所述胶原沉淀一溶解于所述缓冲液中，获取原胶原蛋白溶液。
[0067]为了使得胶原沉淀一可以完全溶解于所述缓冲液中，优选的，胶原沉淀一与缓冲液的体积比为1:25。
[0068]S23、所述第二次盐析包括:向所述原胶原蛋白溶液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为1.5-1.8mol/L，静置，离心收集上清液。
[0069]通过第二次盐析，可以对所述抽提混合液中的I型胶原蛋白进行进一步纯化，将所述胶原沉淀一中的除I型胶原和ΠΙ型胶原之外的胶原分离出来，得到I型胶原和III型胶原(胶原沉淀二)。
[0070]优选的，本发明实施例第二次盐析时，向所述原胶原蛋白溶液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为1.5-1.8mol/Lo这样，可以防止所述原胶原蛋白溶液中除I型胶原和ΠΙ型胶原之外的胶原析出，提高最终获得的I型胶原蛋白的纯度，又可以使得所述原胶原蛋白溶液中I型胶原和ΠΙ型胶原尽可能多的析出，提高最终获得的I型胶原蛋白的产率，并且可以减少最终获得的胶原蛋白中由于盐析纯化所带入的无机盐杂质。进一步优选的，向所述原胶原蛋白溶液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为1.7mol/L0