激肽释放酶7小分子抑制剂及其制备方法与用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物化学领域，特别是指一种激肽释放酶7小分子抑制剂及其制备方 法与用途。
【背景技术】
[0002] 特应性皮炎（AD)是一种广泛传播的慢性炎症性皮肤病，特点是干燥、鳞状皮肤、 炎症、皮肤渗透性增加，AD病人的皮肤对环境中常见的而对正常人无害的因素也会很敏感 从而易于受到表面感染。在过去的30年间工业化国家的特应性皮炎的发病率增长了 2到 3倍，据估计儿童的特应性皮炎患病率达到了 15-30%，成人的特应性皮炎患病率达到了 2-10%。由于发病机制的复杂性，对AD的发病机制了解得不多，但皮肤屏障功能紊乱已经 被证实是AD发展过程中的关键因素之一。
[0003] 皮肤屏障的稳定依赖于颗粒层的角质形成细胞分化为角质细胞和皮肤表层角质 细胞脱落（即脱肩）之间的平衡，皮肤的脱肩过程包括由KLKs参与的桥粒的降解，由于桥 粒是角质细胞的粘连蛋白，桥粒的降解则会导致角质细胞脱落而致皮肤脱肩。证据显示，局 部或暂时性的KLKs活性控制的失调，是AD病人皮肤屏障稳定缺失的主要原因之一。
[0004] KLKs(Kallikreins，激肽释放酶）是具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶特异性的丝氨 酸蛋白酶，其编码基因定位于19ql3. 4,编码15个分泌型丝氨酸蛋白酶KLK I-KLK 15。已 经证明，KLKs存在于正常人的角质层细胞中，目前发现，至少有8种KLK (KLK 5, KLK 6, KLK 7, KLK 8, KLK 10, KLK 11，KLK13和KLK 14)存在于人的角质层和汗液中，
[0005] 其中，KLK7占总量的40%。KLK7可能是皮肤损伤的一个关键酶，而且在AD病人 中它可能参与一个系统性炎症反应，在AD的角质层KLK7升高最为突出，这提示KLK7在AD 的发病机制上可能是至关重要的，因此，抑制KLK7的活性对于AD的治疗显得最为重要。
[0006] LEKTI (Lympho-epithelial Kazal-type-related inhibitor,淋巴上皮组织 Kazal型相关蛋白抑制剂）是由SPINK5基因编码的丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员，LEKTI 前体包含一个信号肽和彼此隔开的15个丝氨酸蛋白酶抑制域（D1-D15)，表达后迅速被弗 林蛋白酶水解为几个蛋白片段，其中包含D6-D9抑制域的LEKTI能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋 白酶、KLK5和KLK7等酶的活性。LEKTI的内源靶至少包括KLK5、KLK7和KLK14,它们共同 参与皮肤的脱肩过程。在AD病人，LEKTI表达水平严重降低，导致了 KLK7活性的异常升高。
[0007] 尽管LEKTI是表皮内KLK7的天然抑制剂，但作为治疗AD的外用药，其不能透过皮 肤角质层，同时由于其大分子蛋白质的特性也会导致其降解速度过快，因而将LEKTI作为 外用药作用非常有限。并且，到目前为止，还没有一种有效的KLK7小分子抑制剂应用于临 床。因此，如果能得到作为皮肤外用药的KLK7的小分子抑制剂，将有助于AD的治疗。
【发明内容】
[0008] 有鉴于此，本发明的目的在于提出一种激肽释放酶7小分子抑制剂及其制备方法 与用途，其作为小分子抑制剂能有效抑制KLK7,具有应用于制备特应性皮炎的治疗药物的 前景。
[0009] 本发明通过以KLK7作为靶分子，根据KLK7的晶体结构，以及药效团模型进行分析 与筛选，合成出具有KLK7抑制作用的小分子化合物，经实验验证，该化合物具有显著的抑 制KLK7作用。
[0010] 基于上述目的本发明提供的激肽释放酶7小分子抑制剂的化合物结构由式⑴表 示：
[0012] 基于相同的发明构思，本发明还提供了激肽释放酶7小分子抑制剂的制备方法， 包括以下步骤：
[0013] 步骤1)化合物（II )溶解于浓H2SOd，滴加浓H 2S04与浓HNO 3形成的混酸，控温 30°C以下，反应4-6小时，得化合物（III)，倒入冰水中，过滤得化合物（III)粗品，过柱分离 得化合物（III);
[0015] 步骤2)向反应瓶中加入水，铁粉，HCl溶液，控温80-100 °C，分批加入化合物 (III )，反应2-3小时，以碳酸钠中和，过柱分离得化合物（IV );
[0016]
[0017] 步骤3)向反应瓶中加入化合物（IV)、乙醚、三乙胺，再滴加丁二酰氯，室温反应 1-3小时，过柱分离得化合物（V );
[0019] 步骤4)向反应瓶中加入化合物（V )，四氢呋喃，在0°C下加入硼氢化钠，加毕，室 温下反应4-5小时，过柱分离得化合物（VI);
[0021] 步骤5)向反应瓶中加入化合物（VI)和磷酸，在140-180°c反应1-3小时，加入氢 氧化钠溶液游离出碱性化合物，过柱分离得化合物（W);
[0022]
[0023] 步骤6)中间体化合物（VDI)的合成：向反应瓶中加入2, 4-二甲基苯胺、乙醚、三 乙胺，再滴加4-氯代丁酰氯，室温反应1-3小时，过柱分离得化合物（VID );
[0025] 步骤7)反应瓶中加入化合物（VE )、化合物（VID )、甲苯、碳酸钾，回流反应3-4小 时，过柱分离得化合物（I)。
[0027] 优选地，在步骤1)中，所述的混酸中浓H2SO4与浓HNO 3的摩尔比为1:1。
[0028] 可选地，在步骤2)中，所述水、铁粉、HCl的摩尔比为20~30:2~5:0. 1~0. 5。
[0029] 可选地，在步骤3)中，所述化合物（IV)、乙醚、三乙胺、丁二酰氯的摩尔比为 0. 5 ~2:3 ~6:1. 5 ~3. 5:0. 5 ~2。
[0030] 可选地，在步骤4)中，所述化合物（V )、硼氢化钠、四氢呋喃的摩尔比为 1: 0· 3:200 (摩尔比），过柱分离得化合物（VI)。
[0031] 可选地，在步骤5)中，所述化合物（VI )、磷酸的摩尔比是0. 5~2:1~3。
[0032] 可选地，在步骤6)中，2, 4-二甲基苯胺、乙醚、三乙胺、4-氯代丁酰氯的摩尔比为 0. 5 ~2:3 ~5:1 ~3:0. 5 ~2。
[0033] 可选地，在步骤7)中，所述化合物（VE )、化合物（VID )、碳酸钾、甲苯的摩尔比为 0. 5 ~2:1 ~1.5:0. 5 ~2:8 ~12。
[0034] 基于相同的发明构思，本发明还提供了上述激肽释放酶7小分子抑制剂的应用， 即将所述激肽释放酶7小分子抑制剂用于抑制激肽释放酶7的活性，制备治疗特应性皮炎 的药物。
[0035] 基于相同的发明构思，本发明还提供了一种治疗特应性皮炎的药物组合物，其中 含有所述的激肽释放酶7小分子抑制剂作为有效成分。
[0036] 优选地，上述药物组合物为外用膏剂或外用喷雾制剂。
[0037] 从上面所述可以看出，本发明提供的激肽释放酶7小分子抑制剂及其制备方法与 用途，该抑制剂为小分子抑制剂，避免了传统KLK7的天然抑制剂作为治疗AD的外用药时由 于分子大而不能透过皮肤角质层、吸收慢降解快等问题，该小分子抑制剂合成方法简单，操 作方便，吸收快，有效抑制KLK7,具有应用于临床特应性皮炎的治疗药物的制备前景。
【附图说明】
[0038] 图1为本发明的实施例所涉及的激肽释放酶7小分子抑制剂的IC5。曲线拟合图；
[0039] 图2本发明的实施例所涉及的激肽释放酶7小分子抑制剂的核磁图。
【具体实施方式】
[0040] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照 附图，对本发明进一步详细说明。
[0041 ] 实施例1 :激肽释放酶7小分子抑制剂的制备
[0042] 1.0 mol 化合物（II )溶解于 2. Omol 浓 H2SO4*，滴加 1.0 mol 浓 H #04与 1.0 mol 浓HNO3形成的混酸，控温30°C以下，反应4小时，得化合物（III )，倒入冰水中，过滤得化合 物（III)粗品，过柱分离得化合物（III)。
[0043] 向反应瓶中加入25mol水，3. Omol铁粉，0· 3molHCl (氯化氢折100%，浓度37% )， 控温90°C，分批加入化合物（III )，反应3小时，以碳酸钠中和，过柱分离得化合物（IV )。
[0044] 向反应瓶中加入化合物（IV)，乙醚，三乙胺，再滴加丁二酰氯，室温反应2小时，化 合物（IV ):乙醚：三乙胺：丁二酰氯=1:5:2. 5:1 (摩尔比），过柱分离得化合物（V )。
[0045] 向反应瓶中加入化合物（V )，四氢呋喃，在0°C下加入硼氢化钠，加毕，室温下反 应4小时，化合物（V):硼氢化钠：：四氢呋喃=1:0.3:200(摩尔比），过柱分离得化合物 (VI)〇
[0046] 向反应瓶中加入化合物（VI )，磷酸（含量85% )，化合物（6):磷酸（折100% )= I :2. 5(摩尔比），加毕，在160°C反应2小时，加入氢氧化钠溶液游离出碱性化合物（VE )， 过柱分离得化合物（VE )。
[0047] 向反应瓶中加入2, 4-二甲基苯胺，乙醚，三乙胺，再滴加4-氯代丁酰氯，室温反应 2小时，2, 4-二甲基苯胺：乙醚：三乙胺：4_氯代丁酰氯=1:5:1. 5:1 (摩尔比），过柱分离 得化合物（VID )。
[0048] 向反应瓶中加入化合物（W )，化合物（VDI)，甲苯，碳酸钾，回流反应3小时，化合 物（W):化合物（W):碳酸钾：甲苯=1.0:1.2:1.0:10.0(摩尔比），过柱分离得化合物 ⑴。
[0049] 图2本发明的实施例所涉及的激肽释放酶7小分子抑制剂的核磁图。
[0050] 1H NMR[(CD3)2S0,500MHz]，δ (ppm) :7. 15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，C0CH2N)， 0· 82 (t，3H，NCH2CH2CH3)，2· 29 (s，3H，Ph-CH3)，I. 15-4. 74 (m，16H，RCH2R，1H，C3CH)。
[0051 ] 实施例2 :激肽释放酶7小分子抑制剂的制备
[0052] 1.0 mol 化合物（II )溶解于 2. Omol 浓 H2SO4*，滴加 1.0 mol 浓 H #04与 1.0 mol 浓HNO3形成的混酸，控温30°C以下，反应6小时，得化合物（III )，倒入冰水中，过滤得化合 物（III)粗品，过柱分离得化合物（III)。
[0053] 向反应瓶中加入20mol水，2. Omol铁粉，0· ImolHCl (氯化氢折100 %，浓度37 % )， 控温90°C，分批加入化合物（III )，反应2小时，以碳酸钠中和，过柱分离得化合物（IV )。
[0054] 向反应瓶中加入化合物（IV)，乙醚，三乙胺，再滴加丁二酰氯，室温反应2小时，化 合物（IV):乙醚：三乙胺：丁二酰氯=0· 5:3: L 5: 0· 5 (摩尔比），过柱分离得化合物（V )。
[0055] 向反应瓶中加入化合物（V )，四氢呋喃，在0°C下加入硼氢化钠，加毕，室温下反 应5小时，化合物（V):硼氢化钠：：四氢呋喃=1:0.3:200(摩尔比），过柱分离得化合物 (VI)〇
[0056] 向反应瓶中加入化合物（VI )，磷酸（含量85% )，化合物（6):磷酸（折100% ) =0. 5:1 (摩尔比），加毕，在160°C反应2小时，加入氢氧化钠溶液游离出