一种花生粕醒酒肽的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及花生多肽制备技术，特别涉及花生柏制备活性多肽的方法，具体是一 种利用花生柏制备具有防醉与醒酒作用多肽的方法。
【背景技术】
[0002] 花生柏作为花生油生产的副产物，其蛋白质含量达40 %~50%，此外还富含黄酮 类、鞣质、糖类、三萜或留体类化合物等活性物质。目前关于花生柏的利用主要集中在分离 蛋白的提取和研究，用花生柏制备醒酒多肽的研究较少。医学证明，长期过量饮酒或一次性 大量饮酒会对人体十分不利，损害肝、胃、脾等内脏器官，造成胃溃疡、肝硬化等疾病。人们 已经开始认识到了解酒保健的重要性。目前市场上的解酒保健品多以中草药提取物主，关 于蛋白水解醒酒多肽的报道多见于玉米肽。
[0003] 关于玉米醒酒肽的研究文献主要有：《酶膜耦合连续法制备玉米肽解酒及防醉研 究》（食品科学2012, 33(17) : 241~245)，通过Alcalase碱性蛋白酶耦合膜分离制备出分 子量小于5000Da玉米醒酒多肽。CN201010540622的专利《一种醒酒肽的提取方法》，研究以 玉米黄粉为原料，经过配水、加酒精和亚硫酸钠升温蒸煮，加碱性蛋白酶风味蛋白酶酶解， 过滤后滤液经干燥后即获醒酒肽。CN200910073036的专利《玉米醒酒肽的制备方法》，通过 Alcalase碱性蛋白酶和Protamex复合蛋白酶复合水解玉米粉或玉米蛋白制备出一种具有 醒酒作用的多肽。以上文献所述中的醒酒肽所用原料均为玉米粉或玉米蛋白。
[0004] 在《花生柏蛋白醒酒肽饮料的研制》（食品工业，2008, 2:45~47)中，采用碱溶酸 沉法从花生柏中提取分离蛋白，然后用枯草杆菌碱性蛋白酶酶解花生分离蛋白，制成具有 醒酒作用的蛋白饮料。该文献采用碱溶酸沉法提取分离蛋白，如实现工业化生产可能会带 来环境污染问题；所得酶解多肽未进一步分级纯化，醒酒效果不理想，同时也未对醒酒肽的 醒酒作用做详细研究。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种花生柏醒酒肽的制备方法，该方法原料处理与多肽制 备过程简单，不需碱溶酸沉步骤，纯化的活性多肽醒酒效果良好。
[0006] 本发明提供的一种花生柏醒酒肽的制备方法，是以脱脂后的花生柏为原料，经浸 提和水洗后，除去水溶性蛋白，所得沉淀按一定料液比加水后，先添加AmanoSD-AY10蛋白 酶酶解，灭酶后再加入AlcalaseAF蛋白酶，在其最适宜条件下进行酶解，然后灭酶、离心、 微滤和超滤，制得具有醒酒作用的花生柏多肽。具体步骤如下：
[0007] 将脱脂后的花生柏粉末，按料液比1 :10加入清水浸泡提取4h，4000r/min离心 lOmin除去水溶性蛋白，取沉淀再加3倍体积的水，水洗2~3次，得到花生柏沉淀；将所得 花生柏沉淀，按料液比1 :1〇~15加入清水和AmanoSD-AY10蛋白酶，加酶质量为花生柏 沉淀质量的1/50 ;在50~60°C，pH9. 0~10. 0条件下酶解25~40min，升温到95°C灭酶 lOmin，灭酶后冷却至40~50°C，再加入AlcalaseAF蛋白酶，加酶的质量为花生柏沉淀质 量的1/30~1/50,在pH7. 5~9. 0条件下酶解2~4h，酶解结束后升温到85°C灭酶；
[0008] 将酶解液在5000r/min离心得到上清液，然后用孔径为0. 22um的微滤膜进行微 滤，所得滤出液用截留分子量为3000Da的超滤膜进行超滤，滤出液再用lOOODa超滤膜超 滤，收集1000~3000Da的截留液做为醒酒肽溶液。
[0009] 该醒酒肽溶液可进一步浓缩成浓缩液冷藏，或喷雾干燥成粉末保存。
[0010] 本发明的有益效果和优点：
[0011] 体外和动物试验表明，花生柏多肽溶液浓度达到1. 2~1. 6%时，对于乙醇脱氢酶 激活作用显著；动物摄入剂量为200_400mg/kg*bw时，能促进乙醇代谢为乙醛或乙酸，降低 血液中乙醇的浓度，从而达到醒酒的作用。本发明方法制备的花生柏醒酒肽可在制备醒酒 保健品中应用。
[0012] 该多肽的原料来源广泛和成本低廉；该醒酒肽的加工工艺简单，酸碱废液排放少； 所得的1〇〇〇~3000Da多肽的乙醇脱氢酶激活率比未分级处理的酶解多肽混合液提高了 20%，激活乙醇脱氢酶的作用显著。经分级处理，使该醒酒肽中1000~3000Da活性多肽的 含量达到60%以上。
【附图说明】
[0013] 图1本发明花生柏醒酒肽不同剂量随时间变化对小鼠体内乙醇变化的影响
【具体实施方式】
[0014] 实施例1
[0015] 取100g花生柏粉末，按料液比1 :10加入清水浸泡提取4h，4000r/min离心lOmin， 取沉淀再加3倍体积的水，水洗2次，得到沉淀花生柏。取50g处理好的花生柏，加入500ml 水和lgAmanoSD-AY10蛋白酶，在60°C，pH9. 0条件下酶解30min，95°C灭酶10min后冷却 至50°C，调节ph至8. 0,加入1. 5gAlcalaseAF蛋白酶酶解2h，85°C灭酶后酶解液离心得 到上清液，上清液用孔径为0. 22um的微滤膜微滤，滤液选用截留分子量为3000、lOOODa的 超滤膜超滤，得到3组分子量的滤液：分别为Mw>3 000Da、1000~3000Da和Mw〈l000Da。 将所得的3种多肽滤液和原酶解液分别真空浓缩到相同多肽含量后，取样进行分子量分析 和乙醇脱氢酶（ADH)激活率分析。
[0016] 同时采用碱溶酸沉法提取花生柏蛋白（参照文献《花生柏蛋白醒酒肽饮料的研 制》，食品工业，2008, 2:45~47)，所得分离蛋白加入枯草杆菌碱性蛋白酶进行酶解制备多 肽，浓缩到与前述酶解液相近浓度后测定ADH激活率。
[0017] 结果表明，在相近的多肽含量下，本发明的未分级酶解原液的ADH激活率比碱溶 酸沉法制备的多肽高；本发明的1000~3000Da多肽的ADH激活率不仅比未分级酶解原液 高，也远高于碱溶酸沉法制备的多肽；本多肽在浓度1. 36%时，对ADH激活率为30. 47%，其 多肽的质量百分率为总肽的77. 12%。
[0018] 表1不同花生柏多肽ADH的对比
[0019]
[0020] 实施例2
[0021] 取200g花生柏粉末，按料液比1 :10加入清水浸泡提取4h，4000r/