一种从马比木中提取分离喜树碱的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及提取分离技术领域，尤其涉及一种从马比木中提取分离喜树碱的方 法。
【背景技术】
[0002] 喜树碱属于喹啉类生物碱，该分子为五环结构，含有一个吡咯[3, 4_b]喹啉环 (环A、B、C)，一个共轭的吡啶酮环（环D)和一个六元a-羟基内酯环（环E)，分子式为 C2(]H1S06，喜树碱中文名：（S)-4-乙基-4-羟基-1H-吡喃（3'，4'，6'，7)氮茚（l，2-b)_哇 琳-3,14- (4H，12H)-二酮，英文名：[(S) -4-ethy-4-hydroxyl-lH-pyran0- (3,，4,，6,，7) indolizino(1，2_b) -quinoline-3，14- (4H，12H) - (4H，12H) -dione]]，具体结构如下：
[0003]
[0004] 1966年美国化学家Wall和Wani首先从琪桐科植物喜树（Camptothecaacuminata Decne)中提取出喜树碱，之后喜树作为我国特有的一种植物一直作为喜树碱提取的重要植 物来源。
[0005] 喜树碱在喜树各器官中的含量分布差异很大，不同学者的研究结果也不一致，这 可能是由于采样部位、采样时间、分析方法等引起的差异。杨磊等研究了不同生长时期的喜 树中不同器官的喜树碱含量，其中十年生喜树中，喜树叶中喜树碱含量最高（〇. 1102% )， 一级侧根次之（〇. 0968% )，二级侧根最低（0. 063% );气候箱中培养20d的喜树幼苗，其 子叶己完全展开，真叶尚未长出，此时喜树碱在子叶中分布最多（0. 2901% )，胚轴中次之 (0. 0951% )，果壳和胚根中分别为0. 04197%和0. 0246%，全株为0. 0814%。但喜树一直 是毁林开田的砍伐对象，喜树的野生种群已相当少见，所以急需寻找新的喜树碱来源。
[0006] 近年来马比木作为新的喜树碱来源，越来越受到人们的重视。该植物含有喜树碱， 其根皮中的喜树碱含量最高，是喜树果的3~4倍，树皮次之，茎、枝、叶、花序、果实和种 子也含有喜树碱，为极具价值的抗肿瘤药物资源。
[0007] 马比木，茶茱萸科假柴龙树属马比木[Nothapodytes pittosporoides (Oliv.) Sleum]的根皮，别名公黄珠子、追风伞，为茶茱萸科假柴龙属植物，灌木或小乔木，分布于 贵州、湖南、湖北、四川等地 [1]。根皮入药能祛风除湿，理气散寒，主治风寒湿痹，浮肿疝气、 关节疼痛等症。
[0008] 喜树碱通过抑制肿瘤细胞内拓扑异构酶I的活性而具抗癌效应。目前，已有多 种药效好、毒副作用小的喜树碱类抗癌新药被筛选出来，其中Irinothecan和Topothecan 已于1996年得到美国FDA的批准用于临床，其他的如9-硝基喜树碱、10-羟基喜树碱、Exatecan、Lurtotecan等处于临床试验的喜树碱类抗肿瘤新药可能在今后几年内陆续上 市，所有的喜树碱类药物均以喜树碱为原料而合成，喜树碱类药物全球年销售额约为10亿 美元。目前，喜树碱唯一可行的市场来源仍然是从野生植物中提取，主要是喜树（中国）中 提取，由于喜树的生长周期很长，要8-15年才能结果，而且其内喜树碱的含量很低，含量只 有万分之四。因此，野生喜树植物资源遭到了严重的破坏，被列为重点保护植物。随着临床 需求量的急剧增加，可持续获取喜树碱及类似物已成当务之急。
[0009] 马比木中其内的喜树碱含量高达千分之一点五，从利用富含喜树碱及类似物的马 比木中生产该类物质，是喜树碱药源开发的主攻方向之一。但关于马比木中喜树碱的提取 分离工艺还没有详细系统的研究。
[0010] 目前生产上关于喜树中喜树碱的提取工艺，其流程为：
[0011] 喜树叶（果）粉碎一乙醇或碱水萃取一萃取液浓缩至浸膏一溶剂萃取一硅胶或大 孔树脂吸附分离一结晶得粗品一重结晶得产品。产品得率低于万分之四，这种方法存在产 品收率低，耗费时间长，成本高等问题。
【发明内容】
[0012] 本发明提供了一种从马比木中提取分离喜树碱的方法。
[0013] 本发明采用如下技术方案：
[0014] 本发明的从马比木中提取分离喜树碱的方法的具体步骤如下：
[0015] (1)首先将马比木粉碎成粉末，然后往马比木粉末中加入乙醇，控制料液比为 1:6-12,然后加热，在60-80°C下回流提取0. 5-3h，提取结束得到提取液；
[0016] (2)将步骤（1)得到的提取液过滤，回收乙醇，然后将提取液经过大孔树脂柱进行 分离，提取液与树脂的重量比为3-7:1，上样速度为2_6BV/h，然后选用乙醇作为解析液进 行解析，解析液流速为l_3BV/h，解析液体积为8-12BV，然后收集得到喜树碱粗品；
[0017] (3)将步骤（2)的到的喜树碱粗品进行工业色谱分离纯化，选择二氯甲烷与丙酮 的混合物为流动相，流速为5-10ml/min，料液比为1 :30-50,纯化完毕得到纯化后的喜树 碱；
[0018] (4)往步骤⑶得到的纯化后的喜树碱中加入结晶溶剂，料液比为1:550,水浴回 流使其溶解，趁热抽滤，滤液浓缩，在〇-l〇°C下静置结晶6_15h，抽滤，得到喜树碱结晶产 物。
[0019] 步骤⑴中，所述的乙醇浓度为70%。
[0020] 步骤⑴中，优选料液比为1:10,然后加热，在70°C下回流提取lh。
[0021] 步骤⑵中，大孔树脂为HZ816树脂。
[0022] 步骤⑵中，优选提取液与树脂的重量比为5. 5:1，上样速度为4BV/h。
[0023] 步骤⑵中，解析液乙醇的浓度为95%。
[0024] 步骤（2)中，优选解析液流速为2BV/h，解析液体积为10BV。
[0025] 步骤（3)中，二氯甲烷与丙酮的混合物中两者的体积比为88 :12。
[0026] 步骤（3)中，优选流动相流速为8ml/min，料液比为1 :40。
[0027] 步骤⑷中，结晶溶剂为乙酸乙酯和丙酮，两者的体积比为1:1，结晶温度4°C，结 晶时间为12h。
[0028] 本发明的技术效果：
[0029] 本发明的从马比木中提取分离喜树碱的方法首次采用了以大孔树脂-工业色谱 为核心的成套提取分离新技术从马比木中分离纯化喜树碱，具有工艺先进、简便、经济、成 熟、收率高、成本低等优点。本发明的方法产品得率高、纯度大、环境污染小等优点，适于马 比木中喜树碱的提取分离。
【具体实施方式】
[0030] 下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
[0031] 实施例1
[0032] 本发明的从马比木中提取分离喜树碱的方法的具体步骤如下：
[0033] (1)首先将马比木粉碎成粉末，然后往马比木粉末中加入乙醇，控制料液比为 1:12,然后加热，在80°C下回流提取0. 5h，提取结束得到提取液；
[0034] (2)将步骤（1)得到的提取液过滤，回收乙醇，然后将提取液经过大孔树脂柱进行 纯化，提取液与树脂的重量比为7:1，上样速度为6BV/h，然后选用乙醇作为解析液进行解 析，解析液流速为3BV/h,解析液体积为12BV,然后收集得到喜树碱粗品；
[0035] (3)将步骤（2)的到的喜树碱粗品进行工业色谱分离纯化，选择二氯甲烷与丙酮 的混合物为流动相，流速为l〇ml/min,料液比为1 :50,纯化完毕得到纯化后的喜树碱；
[0036] (4)往步骤（3)得到的纯化后的喜树碱中加入结晶溶剂，料液比为1:550,水浴回 流使其溶解，趁热过滤，滤液浓缩，在4°C下静置结晶12h，抽滤，得到喜树碱结晶产物。
[0037] 步骤（1)中，所述的乙醇浓度为70%。
[0038] 步骤⑵中，大孔树脂为HZ816树脂。
[0039] 步骤⑵中，解析液乙醇的浓度为95%。
[0040] 步骤（3)中，二氯甲烷与丙酮的混合物中两者的体积比为88 :12。
[0041] 步骤⑷中，结晶溶剂为乙酸乙酯和丙酮，两者的体积比为1:1。
[0042] 实施例2
[0043] 本发明的从马比木中提取分离喜树碱的方法的具体步骤如下：
[0044] (1)首先将马比木粉碎成粉末，