1-(乙基氨基酸苄酯)-β-咔啉-3-羧酸苄酯,纳米结构,制备,活性和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及1-(己基-Val-Glu(OBzI)-OBzI)-目-巧晰-3-駿酸予醋及其制备方 法，涉及它抑制肿瘤细胞增殖的活性，涉及它对荷S180小鼠肿瘤生长的抑制作用，进一步 涉及它逆转肿瘤细胞耐药的作用。因而本发明涉及它在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明 属于生物医药领域。 技术背景
[0002] 近年来，鉴于全球癌症发病率和死亡率急剧上升，癌症已经成为了一个世界问题。 我国的癌症患者人数处于世界前列，癌症患者人数不断增加，对抗肿瘤药的需求也不断增 加。目前临床应用的抗肿瘤药物存在许多局限性，随着科技的进步W及科学的发展，寻找安 全有效的抗肿瘤新药是药物研究的热点之一。
[0003] 癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤 和赏生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而 全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此，开发新的高效，低 毒，毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。
[0004] 随着对肿瘤特性和发病本质的认识，最近几年抗肿瘤药物不断从传统的细胞毒药 物向发展非细胞毒药物过渡。目-巧晰是天然来源的细胞毒性抗肿瘤化合物。发明人认识 至IJ，目-巧晰抗肿瘤的细胞毒性本质是与肿瘤细胞DNA之间的嵌插。送种形式的杆插可造成 细胞毒性。发明人曾经发现，目-巧晰可W插入肿瘤细胞DNA之间的双螺旋碱基之间。在进 一步的研究中，发明人认识到，目-巧晰的抗肿瘤活性来自嵌插。发明人还认识到，在目-巧 晰的1位引入二肤生成目-巧晰-3-駿酸予醋及衍生物可增强目-巧晰与肿瘤细胞的作 用，增强抗肿瘤活性。根据送些认识，发明人提出1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧 晰-3-駿酸予醋。与发明人前期的发明1-(己基-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋相比， 本发明的突出创造性在于，保留了目-巧晰与肿瘤细胞DNA之间的嵌插作用，在低剂量下显 示高抗肿瘤活性。于是，1-(己基-Val-Glu (OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋显示了良 好的抑制肿瘤细胞增殖作用和抗肿瘤活性。
[000引发明的内容
[0006] 本发明的第一个内容是提供下式的1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧 晰-3-駿酸予醋。
[0007]
[0008] 本发明的第二个内容是提供1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋的制备方法，该方法包括：
[0009] (1)将心色氨酸予醋在H氣醋酸的催化下与1，1，3,3-四甲氧基丙焼进行 Pictet-Spengler缩合，得到1- (2, 2-二甲氧己基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋；
[0010] 似将1-化2-二甲氧己基）-1，2,3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋在四氨巧喃 中，用高儘酸钟水溶液氧化得到1- (2，2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋；
[00川做在冰醋酸、浓盐酸、混合液中1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋水解 为1-己醒基-目-巧晰3-駿酸予醋；
[001引 （4)将1-己醒基-0 -巧晰3-駿酸予醋与肥1 ?Val-Glu(OBzl)-OBzl偶联得到 1-(己基-Val-Glu(OBzl) -OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋。
[0013] 本发明的第H个内容是评价1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋抑制肿瘤细胞增殖的作用。
[0014] 本发明的第四个内容是评价1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋抑制S180肿瘤小鼠肿瘤生长的作用。
[0015] 本发明的第五个内容是测定1-(己基-Val-Glu(OBzI)-OBzI)-目-巧晰-3-駿酸 予醋逆转肿瘤细胞耐药的作用。
[0016] 本发明的第六个内容是阐述1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋的纳米结构。
【附图说明】
[0017] 图1 1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋的合成路线.U多 聚磯酸，苯甲醇；ii) H氣醋酸，1，1，3,3-四甲氧基丙焼；iii)高儘酸钟，四氨巧喃，水；iv)溶浓盐酸，冰醋酸，水；V)N-甲基吗晰，无水硫酸镇，氯基测氨化钢，Val-Glu(OBzl)-OBzl。 [001引图2 1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋在抑7. 4环境中，浓 度为6X 10 浓度下的透射电镜照片。
【具体实施方式】
[0019] 为了进一步阐述本发明，下面给出一些列实施例.送些实施例完全是例证性的， 它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0020] 实施例1制备1-化2-二甲氧己基）-1，2,3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋
[0021] 先将5gk色氨酸予醋用饱和胞肥〇3水溶液洗，用70血己酸己醋萃取，共萃取 3次，醋相用饱和氯化钢溶液洗至中性，无水硫酸钢干燥，过滤至250mL的圆底烧瓶中，滤 液减压浓缩至干得4g无色固体.在100血的圆底烧瓶中，先将4mLl，1，3, 3-四甲氧基丙 焼溶于40mL二氯甲焼溶剂中，再加入4mLH氣醋酸，活化45min，在冰浴下，将刚刚得到的 4g无色固体加入到反应瓶中.反应52小时，化C(石油離/丙丽=4/1)显示反应完成，用 饱和NaHC〇3水溶液中和反应液中的酸，然后用70mL二氯甲焼萃取，共萃取3次.二氯甲 焼层用饱和氯化钢水溶液洗至中性，二氯甲焼相用无水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩， 残留物用硅胶湿法柱层析纯化，得到3. 5g(51 % )标题化合物，为黄色油状物.ESI-MS(m/ 6)395[]\1+田+。
[002引实施例2制备1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋
[0023] 将Sg(12.7mmol)1- (2, 2-二甲氧己基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋， 与150mL四氨巧喃加入到250mL的茄瓶中，冰浴揽拌，分批加入5g(31.6mmol)高儘酸钟的 水溶液，室温反应5小时，TLC(石油離/丙丽=4/1)显示反应完成，过滤，并加入四氨巧喃 冲洗滤饼，滤液减压浓缩，再将残余水相用70mL二氯甲焼提取，共提取3次，合并的二氯甲 焼相，用饱和食盐水洗涂3次，无水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶湿法柱 层析纯化，再用石油離-丙丽重结晶得到3g(60% )标题化合物，为无色固体.ESI/MS(m/ 6)391[]?+田+。
[0024] 实施例3制备1-己醒基-目-巧晰3-駿酸予醋
[002引先加入72血冰醋酸使344mg(ImmoU1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋 完全溶解，再依次加入9mL浓盐酸和9mL水.揽拌地，TLC显示原料斑点消失，反应化合物 加入大量冰水混合物，揽拌使大量固体析出，过滤并用90mL冰水冲洗滤饼.收集滤饼，充分 干燥，备下一步反应使用。
[0026] 实施例4制备1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋巧）
[0027]冰浴下，往 550mg(l. 2mmol)肥1 ?Val-Glu(OBzl)-OBzl与 20ml无水四氨巧喃的 溶液中滴加N-甲基吗晰调节溶液抑值至8,往溶液中加344mg(Immol) 1-己醒基-目-巧 晰-3-駿酸予醋与20mL二氯甲焼的悬浮液，揽拌10分钟后加入200mg无水硫酸镇揽拌 15分钟.往反应混合物中加63mg(lmmol)氯基测氨化钢，室温揽拌1比.化C(C肥Is/MeOH =27/1)显示反应完成.反应混合物过滤，滤液减压浓缩，剩余物加入饱和NaHC〇3水溶液 溶解，得到的溶液用50ml己酸己醋液萃取，共萃取3次.己酸己醋层用饱和氯化钢溶液 洗至中性，收集的己酸己醋相用无水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到的糖浆状物先 后经硅胶柱层析（二氯甲焼/甲醇=50/1)及制备薄层层析（二氯甲焼/甲醇=22/1) 纯化，得到94mg(12. 5% )标题化合物，为淡黄色油状物.651-18〇11/6)755.9[1±田+; [CC巧4.2 =-14.769(C= 0.33,CH3OH);IR化Br) :3346. 50,3078. 39,3039. 81,2960. 73， 2872.01,1865. 17,1826. 59,1718. 58,1701. 22,1680.00,1653.00,1624.06,1560.41, 1458. 18, 1425. 40,1375. 25,1340. 53,1282. 66,1253. 73,1213.23,1155.36,1136.07, 1001. 06,985. 62,831. 32,785. 03,746. 45,742. 59,731. 02,719. 45,698. 23cm'；'H NMR(300MHz，CDCI3) 5/ppm;10. 43(s，lH)，8. 7^s，lH)，8. 16(d，J= 9. 0Hz，lH)，7. 92(d，J =9.OHz，IH)，7. 59 ~7. 48 (m，4H)，7. 56 ~7. 25 (m，13H)，5. 52(s，2H)，5. 30 (d，J= 12.OHz, 1H)，5. 21(d，J= 12. 0Hz，lH)，5. 10(m，2H)，4. 83(m，lH)，3. 52(m，lH)，3. 36(m，lH)，3. 13(d， J= 9.0Hz，1H) ,3.10 (d，J= 6.0Hz，1H) ,2.98 (m，lH) ,2.46 (m，2H) ,2.26 (m，2H) ,2.08 (m, 3H)，1.01(d，J= 9. 0Hz，3H)，0. 97(d，J=6. 0Hz，3H)。
[0028] 实验例I测定化合物5对肿瘤细胞增殖的抑制作用
[0029] 1)本发明的化合物5用含0. 1 %DMSO的培养基配巧喊所需浓度。
[0030] 2)实验用的肿瘤细胞为化-60(人早幼粒细胞白血病细胞）、A549(肺癌细胞）、 Bel7402 (肝癌细胞）、SH-sy5y(人神经母细胞瘤）、S180 (小鼠腹水瘤细胞）、MCF-7 (人乳 腺癌细胞）。
[0031] 3)实验方法HL-60,MCF-7,Bel-7402,A549 和S180 细胞选用RPMI-1640 培养基； SH-sy5y细胞选用DMEM培养基.培养基中均含10 %经灭活的胎牛血清和1XIO5IVL青霉 素和lOOmg/L链霉素。
[0032] 贴壁细胞MCF-7,Bel-7402,A549,SH-sy5y和半贴壁细胞S180的培养：分别将生 长状态良好，