利用工业化生产食用菌废弃菌渣发酵提取黄腐酸的新方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，特别涉及利用工业化生产食用菌的废弃菌渣提取黄腐 酸的新方法。
【背景技术】
[0002] 黄腐酸（化IvicAcids,代号FA)主要是一类含活性官能团的大分子芳香-脂肪 族居基駿酸的复杂混合物。其具有分子量小、活性基因高、改良±壤、提高地温、促使根系发 达，有效地调节±壤酸碱度、解决±壤板结等方面的独特功效。在气候干燥情况下，缩小作 物气孔开张度，抗旱保收。其应用主要如下：
[0003] 黄腐酸与其它无机化肥（如氮、磯、钟等）配合使用，能固氮、解磯、缓释钟，促使有 效成份转化，尽快被作物吸收利用，提高各种有效成份利用率在80%W上。
[0004] 黄腐酸在蔬菜上的应用；主要是防止蔬菜±壤重巷污染，重巷病菌感染；能有效 地破坏±壤病菌繁殖；增强±壤团粒结构，促使作物根系发达，多生根，生新根，提高植株抗 病能力，刺激蔬菜生长，增强作物光合作用，使蔬菜生长旺盛，提高单位面积产量，增加菜农 收入。黄腐酸在果树上的应用：能促使果树根系发达，提高肥料利用率，提高坐果率，增强 鲜果色泽，改善果实品质，收获后耐储存，防止根腐病，对果树的病棵、病枝有很好的调理作 用。
[0005] 国内外关于黄腐酸的研究比较多，前期主要侧重于从泥炭、风化煤、褐煤中进行提 取。主要的提取方法有化学提取法（针对不同的原料选择相应的化学试剂进行提取）、化学 氧化法、高温氧化法等。近些年随着生化黄腐酸的兴起，采用不同微生物对农作物废弃枯杆 W及农产品和经济作物加工废料进行发酵和生物转化，使有机废弃物能够转化成黄腐酸W 及其它能够被植物利用营养物质。
[0006] 总的来说国内外对黄腐酸的提取W及黄腐酸对农作物的作用做了大量的工作，但 是关于食用菌废弃物黄腐酸的提取，国内外还没出现相应的研究。目前国内工业化生产食 用菌产量已经达到每年2000万吨W上，而作为废弃物食用菌菌渣则含有较高的腐殖酸、菌 体多糖、氨基酸等活性物质，大部分企业采用直接丢弃或者W低廉的价格卖给发电厂等，没 有形成对食用菌废弃物的环保、安全和高效的利用。
[0007] 目前，我国工业化生产的食用菌菌渣产量巨大，然而如何对菌渣进行环保有效的 处理，却一直没有得到很好的解决；每年大量的菌渣和废菌棒或就地堆置，或直接施入田 中，不仅造成了农业有机资源的巨大浪费；而且造成杂菌繁殖、觸虫滋生，破坏了周围生态 环境，，，也给附近食用菌产业造成了巨大危胁。
[0008] 因此，迫切需要提供一种简单、高效、处理时间短、适用范围广的食用菌菌渣回收 利用方法。
【发明内容】
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[0009] 针对上述问题，本发明利用工业化生产平茹、杏鲍茹、金针茹、白玉茹的废弃物菌 渣为主要原料，辅助添加适当的碳源，根据食用菌菌渣分解原理、微生态平衡原理选择性能 优良的有益菌种对菌渣进行再发酵，菌种之间互生互利，互不枯抗，发酵周期约1个月，使 微生物能够充分分解菌渣里的纤维素等植物难W直接利用的物质，使其转化为植物能利用 的营养物质。经测定其发酵后黄腐酸含量达到35%W上，经过提取可得到黄腐酸粗品30% (占干物质百分比）左右，使食用菌菌渣得到充分的利化因此本发明对于国内食用菌废弃 物黄腐酸的提取，具有重要经济和环境意义。
[0010] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0011] 一种利用工业化生产食用菌废弃菌渣提取黄腐酸的新方法，采用枯草芽抱杆菌、 热带假丝酵母菌、拟康氏木霉菌、对食用菌废弃菌渣进行混合发酵，从发酵后的菌渣中提取 黄腐酸。
[0012] 优选的是，所述食用菌为平茹、杏鲍茹、金针茹或白玉茹中的一种或多种。
[0013] 上述方法包括如下步骤，
[0014] (1)取枯草芽抱杆菌、热带假丝酵母菌、拟康氏木霉菌、分别进行二级培养，得相应 的二级种子液；
[0015] (2)将枯草芽抱杆菌、热带假丝酵母、拟康氏木霉、的二级种子液分别接种到 10化-100化的发酵罐中，发酵28--4她，得相应的发酵种子液；
[001引 做菌渣的培养：称取菌渣、水、款皮、糖，发酵种子液加入菌渣中，充分揽拌置于 通风发酵池，于20~4(TC下通风发酵4-5天，得菌渣培养物；
[0017] (4)黄腐酸的提取：取发酵好的菌渣加入摩尔浓度为0.Imol/L的化0H溶液，于提 取池中60~65°C处理6~7个小时，过滤，将滤液泉入沉淀池，然后用浓硫酸调至抑值为 2,静置1-化，过滤，分离，上清液即为黄腐酸溶液，沉淀为踪黑腐殖酸；
[0018] (5)将上清液抑调至中性，喷雾干燥，即得淡黄色的黄腐酸粉末。
[0019]优选的是，步骤（2)中，所述枯草芽抱杆菌、热带假丝酵母菌、拟康氏木霉菌的接 种量之比为5~6;5~6;8~9;
[0020] 优选的是，步骤（3)中，所述湿菌渣、款皮和糖的质量比为30-40 ;1-5 ;0. 5-1 ;所 述枯草芽抱杆菌：热带假丝酵母菌：拟康氏木霉菌的接种量之比为1~2:1~3:1~2; [002。 优选的是，步骤（6)中，所述发酵好的菌渣和化0H溶液的质量比为1~5:5~30。
[0022] 优选的是，步骤（1)中，所述的种子培养基为LB液体培养基或±豆汁液体培养基。
[0023] 进一步地，所述的LB液体培养基的配制方法为；称取化化lOg，蛋白腺lOg，酵母 提取物5g，分别加入1000ml水中，调节抑值为7. 0,121~125°C灭菌20~25min;
[0024] 所述的化化、蛋白腺、酵母提取物的质量比为；2~5 ;2~5 ;1。
[0025] 优选的是，步骤（4)中，所述的待接种菌渣的水分含量为50% -70%。
[0026] 本发明有益的效果是：
[0027] 1.本发明主要利用微生物对菌渣进行发酵转化生产生化黄腐酸，使食用菌生产中 的废料得到了很好的利用，并且进行了工业扩大，创造了相应的经济价值并且使资源得到 了循环利用。
[0028] 2.本发明的黄腐酸产量高达30%W上。最佳发酵时间为4-5天。喷雾干燥后黄 腐酸粉经容量滴定法测定其含量达到85% -90%。
【附图说明】
[0029] 图1本发明生产黄腐酸红外光谱图
[0030] 图2市售生化黄腐酸红外光谱扫描图
【具体实施方式】
[0031] 下面结合附图对本发明进行进一步的阐述。应该说明的是，下述说明仅是为了解 释本发明，并不对其内容进行限定。
[0032] 实施例1:
[0033] 1菌种
[0034] 枯草芽抱杆菌度acillussubtilis)为中国微生物菌种保藏管理中必的编号为 CGMCC1. 210的菌株；枯草芽抱杆菌CGMCC1. 210产α-淀粉酶活力很强。
[0035] 拟康氏木霉（Trichodermapseudokoningii)为中国工业微生物菌种保藏管理中 必的编号为CMCC3. 6612的菌株；产纤维素酶活力很高
[0036] 热带假丝酵母（Candidatropicalis)为中国工业微生物菌种保藏管理中必的编 号为CMCC2. 402的菌株；可同化五碳糖。
[0037] 2具体方法
[0038](1)培养基：枯草芽抱杆菌种子培养基：LB培养基；热带假丝酵母、拟康氏木霉种 子培养基；PDA培养基；
[0039](2)-级种子液的制备；将枯草芽抱杆菌、接种于LB培养基中32°C培养1她，热带 假丝酵母和拟康氏木霉菌菌种分别接种于PDA中，3(TC分别培养摇瓶培养32-4化作为种 子液；