脱氢表雄酮及其中间体的制备方法
【技术领域】
[0001] 本申请设及制备脱氨表雄酬值HEA)的区域选择性和立体选择性方法和制备其中 间体的方法。
【背景技术】
[0002] 脱氨表雄酬值HEA)也被称作雄締醇酬（an化ostenolone)或普拉睾酬或3β-美圣 基雄酱-5-締-17-酬或5-雄酱締-3β-醇-17-酬，其为重要的内源性类固醇激素，并且 具有式（I)的结构
[0003]
[0004] 脱氨表雄酬值ΗΕΑ)是合成酱体分子的关键中间体，所述酱体分子包括但不限于 醋酸阿比特龙（其为用于去势抗性前列腺癌的治疗的药物）。
[0005] J. B;ryan Jones等人的文章"Steroids and steroidases. V1.0 n the C-17 specificity of the Δ 5-3-ketoisomerase of Psudomonas testosterone and evidence for substrate micelle form曰tion，"C曰ndi曰n Journ曰1 of Chemistry，46， 1459-1465(1968)描述了制备雄酱-5-締-3,17-二酬的方法，雄酱-5-締-3,17-二酬是 用于制备DHEA的中间体。在所述参考文献中公开的方法包括在氮气氛下，于20°C下使雄 酱-4-締-3,17-二酬与叔下醇钟在叔下醇中反应90分钟，随后通过快速加入10%乙酸水 溶液将反应物巧灭，加入过量的碳酸氨钢，用乙酸萃取，在室溫下蒸发，并由丙酬重结晶，W 得到雄酱-5-締-3,17-二酬。
[0006] 然而，上述方法的缺点在于，其设及使用较高量的碱，即10当量的叔下醇钟，导致 雄酱-5-締-3,17-二酬的氧化杂质的形成，并具有可能不适于工业规模的后处理过程，从 而导致低的和令人不满意的收率。
[0007] 因此，仍然需要提供制备雄酱-5-締-3,17-二酬的改进方法，所述方法W方便的 方式消除和减少现有技术的缺陷。
[0008] 第102212099号中国专利申请公布公开了从16-妊娠双締醇酬醋酸醋开始制备脱 氨表雄酬的多步骤方法，并设及如在W下路线1中描述的反应步骤。
[0009]
[0010] 路线1
[0011] 第102603841号中国专利申请公布公开了从4-雄酱締-3,17-二酬制备脱氨表雄 酬的多步骤方法，并设及如在W下路线2中描述的反应步骤。
[0012]
[001引 路线2
[0014] 第102603839号中国专利申请公布记载了从16-妊娠双締醇酬醋酸醋开始制备脱 氨表雄酬的多步骤合成方法，其设及（i)制备醋酸16-妊娠双締醇酬目亏，（ii)醋酸16-妊 娠双締醇酬朽通过Beckmann重排W得到脱氨表雄酬醋酸醋，（iii)水解脱氨表雄酬醋酸醋 W得到脱氨表雄酬。所述方法的反应步骤描述于下面的路线3中。
[0015]
[001引 路线3
[0017] 第CN101362789和101717422号中国专利申请公布、第2004040555号韩国专利 申请公布也公开了制备脱氨表雄酬的合成方法。
[0018] 上述制备脱氨表雄酬的合成方法包括多个步骤，W及一系列保护/脱保护步骤W 实现在C3位置上的立体和区域选择性还原，并且其可能不适于商业规模的合成。
[0019] Mamoli等人在US2186906 中描述了将环戊并kyclopentano)-10,13-二甲基多氨 菲系列的酬化合物（A4'5-雄締二酬）转化为相应的相同系列的径基化合物（Δ4'5-雄酱締 醇（arKlrostenole)-17-酬-3)的生物化学氨化方法，其包括使运样的酬化合物经历包含还 原酵母的发酵溶液的作用。
[0020] Misaki等人在US4791057中描述了对要测定的样品中的组分（其为3β-径基酱 族化合物或3-酬酱族化合物）的高度敏感的定量测定方法，其设及使样品中的该组分参与 3 0 -径基酱族化合物&3-酬酱族化合物的循环反应，并测量在包含3β-径基酱族化合物 氧化酶和/或3β-径基酱族化合物脱氨酶的反应体系中可检测的变化。在所述循环反应 中，3β-径基酱族化合物氧化酶消耗〇2并将3-径基酱族化合物转化为3-酬酱族化合物， 3 0 -径基酱族化合物脱氨酶在还原型NAD任Γ存在下将3-酬酱族化合物转化为3-径基酱 族化合物并生成NAD(P)。在所述专利中描述的3β-径基酱族化合物&3-酬酱族化合物的 循环反应示意性地表示在W下路线4中：
[0021]
[0022] 路线 4
[0023] 虽然上述参考文献公开了 3-径基酱族化合物与3-酬酱族化合物相互之间的酶促 转化，但是它们并没有公开制备脱氨表雄酬的方法，并且在研发在还原酱族化合物的3-氧 代基而保持17-氧代基不变中表现所需的区域选择性W及在生成相应的3β-径基化合物 中表现立体选择性的改进方法中仍然存在复杂的挑战。
[0024] 本申请的方法设及制备脱氨表雄酬的酶促方法。本申请的酶促还原方法是环境友 好的、成本经济的和商业上可行的。
[00幼发明概述
[0026] 在一个方面中，本申请提供制备式（I)的30-径基雄酱-5-締-17-酬的方法，
[0027]
[002引其包括使用酬还原酶将式（II)的Δ5-雄酱締-3,17-二酬中的3-氧代基区域选 择性地和立体选择性地还原
[0029]
〇
[0030] 在另一个方面中，本申请提供制备式（I)的30-径基雄酱-5-締-17-酬的方法，
[0031]
[0032] 其包括使用具有序列（Sequence)IDNo:1的酬还原酶还原式（II)的Δ5-雄酱 締-3,17-二酬中的3-氧代基
[0033]
[0034] 在一个方面中，本申请提供制备式（II)的Δ5-雄酱締-3,17-二酬的方法，
[0035]
[003引其包括W下步骤：
[0037]a)使用叔下醇钟和叔下醇将式（IV)的Δ4-雄酱締-3,17-二酬异构化
[0038]
[0039]W提供式（II)的AS-雄酱締-3,17-二酬；
[0040]
[0041]b)由面代控将所述式（II)的化合物重结晶。
[0042] 在另一方面中，本申请提供制备式（II)的Δ5-雄酱締-3,17-二酬的方法，
[0043]
[0044] 其包括W下步骤：
[0045]a)使用叔下醇钟和叔下醇将式（IV)的Δ4-雄酱締-3,17-二酬异构化
[0046]
[0047]W提供式（II)的A5-雄酱締-3,17-二酬；
[0048]
[0049]b)在抗氧化剂的存在下分离所述式（II)的化合物。
[0050] 发明详述
[0051] 在一个方面中，本申请提供制备式（I)的30-径基雄酱-5-締-17-酬的方法，
[0052]
[0053] 其包括使用酬还原酶将式（II)的Δ5-雄酱締-3,17-二酬中的3-氧代基区域选 择性地和立体选择性地还原
[0054]
0
[0055] 所述式（II)的化合物可W通过本领域已知的方法或者通过本申请中公开的方法 获得。
[0056] 所述式（II)的化合物的区域选择性和立体选择性还原是在酬还原酶的存在下进 行，并且反应体系还包含辅因子、辅因子再生系统、底物和脱氨酶、缓冲液W及有机溶剂。
[0057] 如本文中所使用的"立体选择性地或立体选择性"是指在化学或酶促反应中一种 立体异构体相对于另一种的优先形成。立体选择性可W是部分的，其中一种立体异构体的 形成比另一种有利，或者其也可W是完全的，其中只有一种立体异构体形成。当所述立体异 构体是对映体时，所述立体选择性被称为对映选择性（一种对映体占两者总和的分数（通 常W百分比的形式报告））。在本领域中，通常将其报告为对映体过量（通常为百分比的形 式），将其根据下式[主要对映体-次要对映体]/ [主要对映体+次要对映体]计算。当所 述立体异构体是非对映体时，所述立体选择性被称为非对映选择性（一种非对映体占其与 其他异构体的总和的分数（通常W百分比的形式报告））。在本公开的上下文中，立体选择 性是指