一种特利加压素的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及多肤合成技术领域，尤其是特利加压素的制备方法。
【背景技术】
[0002] 特利加压素，英文名为Terlipressin,分子式为；C日2HmNi6〇i品，分子量为1227.4 结构式为，结构式：
特利加压素临床用于治疗严重急性食管静脉曲张破裂出血，严重急性胃、十二指肠溃 瘍出血，急性糜烂性胃炎或出血性胃炎，膜、胆和肠屡的辅助治疗W及糖尿病丽症酸中毒的 辅助治疗，特利加压素，本身无活性，在体内经氨基肤酶作用，脱去N末端的3个甘氨酸残基 后，缓慢地转化为有活性的赖氨酸加压素，用于治疗肝硬化口脉高压引起的急性食道静脉 曲张出血，是一种安全有效的治疗急性静脉曲张出血的药物。
[0003] 关于特利加压素的制备报道很少，主要涉及到固相合成W及部分液相合成方法。
[0004] 在捷克斯洛伐克专利CZP281589中提到的是液相合成法，WBoc-Gly-氯甲基树脂 为起始原料，按特利加压素序列依次接上Boc-Lys(Tos)、Boc-P;ro、Boc-切S度zl)、Boc-Asn、 Boc-Gln、Boc-Phe、Boc-Tyr狂）、Boc-切s度zl)、Boc-Gly、Boc-Gly、Boc-Gly,再经氨解、钢 解、氧化等一系列反应制得特利加压素，此法接肤效率低，仅为75%，工艺时间长，且工艺Η 废严重，不利于大规模生产。
[0005] 在中国专利CN1865282B中提到的是固相合成法，W化nkAmide树脂为起始原 料，按特利加压素肤序依次将Fmoc保护的氨基酸联接到固相载体上，然后加入切肤试剂进 行切肤，加入己離沉淀，获得还原型粗品，在pH为7.5-10.0的条件下通空气氧化，获得氧 化型粗品，最后采用C18(或C8)柱进行分离纯化，获得特利加压素，此法在制备过程中， 易产生des-Glyi特利加压素杂质(缺失一个甘氨酸的特利加压素)，严重影响整个工艺收 率；氧化过程时间长，易发生肤链断裂现象。
[0006] 在中国专利CN102408471A中提到的是片段缩合法，液相合成1-3片段，再将此 片段联接到固相合成的片段4-12-树脂上，得到特利加压素肤树脂，经切割、氧化得到 特利加压素粗肤，最后采用C18柱分离纯化获得目标产品，此法在制备过程中，易产生 des-Glyi，Gly2,Gly3特利加压素杂质（缺失N末端Η个甘氨酸），且1-3片段合成难度大， 成本高，易形成缺失甘氨酸和多甘氨酸的杂质。
【发明内容】
[0007] 本发明针对不足，提出一种特利加压素的制备方法，产品质量和收率高。
[0008]为了实现上述发明目的，本发明提供W下技术方案；一种特利加压素的制备方法， 包括： 步骤1 ;采用固相合成法合成3-12特利加压素片段，获得中间体i'，Fmoc-Gly-切S(Trt) -Tyr UBu) -Phe-Gln (Trt) -Asn (T;rt)-切s (Trt) -Pro-Lys (Boc) 树脂； 步骤2 ;将Boc-Gly-Gl厂OH联接到中间体i;上，获得中间体鎌；Boc-Gly-Gly-Gly-切3灯 ;rt)-TyrUBu) -Phe-Gln(Trt)-Asn(T;rt)-切S(Trt) -Pro-Lys(Boc) 树脂； 步骤3;中间体ii裂解、环化获得特利加压素粗肤：
步骤4 ;粗肤经分离纯化获得特利加压素纯品。
[0009] 按照本发明优选的方案，步骤1和2中，采用固相合成法，首先按照特利加 压素的肤序，由C端到N端，依次将Fmoc-Gly-〇H、Fmoc-Lys度OC)-OH、Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Cys(Trt)-〇H、Fmoc-Asn(Trt)-〇H、Fmoc-Gln(Trt)-〇H、Fmoc-Phe-OH、 Fmoc-Ty;r(tBu)-〇H、Fmoc-切s(T;rt)-〇H、Fmoc-Gly-OH联接到固相树脂上，获得中间伟;再 将Boc-Gly-Gly-OH片段联接到脱去保护基团Xi的中间体iU：，获得中间体祖。其中固相树脂 为化nkAmide树脂、Ri址Amide-MBHA树脂、RinkAmide-BHA树脂、RinkAmide-AM树脂或 Sieber树脂；脱保护试剂为DBU/脈巧/DMF溶液，其中DBU占0. 5%~15%，脈巧占0. 5%~ 20%，溶于DMF中；偶联缩合试剂使用TBTU或HOBt或皿TU，活化试剂使用DIC或DIEA。中 间体II的合成包括W下步骤： (1)中间体i的制备： 树脂活化；将化nk Amide树脂充分溶胀、洗涂、抽干，加入脱保护试剂DBU/六氨化巧/DMF溶液，脱除树脂保护基团，用DMF洗去游离的基团，获得活化的树脂；其中，树脂替代度 为0. 4~1. 2 mmol/邑； Fmoc-Gly-树脂的制备；称取适量Fmoc-Gly-OH、册Bt溶解于DMF中，加入DIC活化， 活化时间为3~15min,将活化后的氨基酸溶液加入树脂中，25~35°C下反应1.5~4.0h，巧 Η丽显色法检测树脂透明，反应终止；DMF洗涂树脂除去游离的基团，加入己酸酢/化巧/ DMF混合溶液，2(T35°C下封闭1h，DMF洗涂除去游离的基团，抽干得到Fmoc-Gly-树脂；其 中，Fmoc-Gly-0H、H0Bt、DIC的投料比为树脂的1. 2~6. 0倍，己酸酢、化巧的投料比是树脂的 2~20倍； 中间体的制备(肤链的延伸）；在Fmoc-Gly-树脂中加入脱保护试剂DBU/六氨化 巧/DMF溶液，脱除FmoC保护基团，DMF充分洗涂除去游离的基团，按照特利加压素的 肤序依次将Fmoc-Lys度OC)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-切S(T;rt) -OH、Fmoc-Asn (T;rt) -OH、 Fmoc-Gln (T;rt) -OH、Fmoc-Phe-〇H、Fmoc-Tyr (tBu) -OH、Fmoc-切s (T;rt) -OH、Fmoc-Gly-〇H联 接到Fmoc-Gly-树脂上，得到中间体t，氨基酸、册Bt、DIC投料比是1. 2节0倍，反应温度为 25^35°C，反应时间为1.5^4.0 h，直到反应完全，巧Η丽检测树脂为透明。
[0010] (2)中间体拉的制备：在中间体?冲加入脱保护试剂DBU/六氨化巧/DMF溶液，脱 除Fmoc保护基团，DMF充分洗涂除去游离的基团，加入Boc-Gly-Gly-OH/HOBt/DIC活化液， 25~35°C下反应1. 5~4. 0h，直到反应完全，氨基酸、HOBt、DIC的投料比为1. 2~6. 0倍。
[0011] (3)中间体Ι?裂解、环化： 裂解试剂使用混合酸试剂，混合酸试剂为TFA、水和其它捕获试剂混合物，捕获试剂选 择邸T、MPS、苯酪中的至少一种，TFA比例为80%~85%，捕获试剂比例为10%~15%，其余为水。 裂解时间为1~4h，裂解温度15~35°C，裂解试剂用量按每克肤树脂需要4~20ml裂解试剂。 裂解液用己離洗涂、沉淀、离必，取沉淀用己離反复洗涂Γ8次后，干燥获得线性特利加压 素粗品。
[0012] 将线性特利加压素粗肤溶解，使用稀氨水调整溶液pH至7. 5^10. 0,用双氧水或贿 等氧化试剂环化，反应广3h，直至环化结束，调整溶液抑至酸性，获得特利加压素粗肤。[001引 （4)分离纯化 将特利加压素粗肤溶液使用微孔滤膜过滤，取滤液上C18柱，梯度洗脱，其中流动相系 统选择0. 1%醋酸水溶液-己腊溶液，检测波长选择21(Γ280nm之间，取纯度为99%W上的 样品为特利加压素精制液。
[0014] 由上述技术方案可见，本方法采用片段缩合法合成特利加压素，固相合成3-12片 段，再将Boc-Gly-Gly-OH联接到固相片段上，每步接肤收率> 99%，肤树脂经裂解、环化获 得特利加压素粗肤，粗肤制备收率为77%，后经纯化获得精肤，纯度为99 %W上，收率为 92%，工艺总收率70%W上。
[0015] 与现有技术相比，本发明固相合成3-12片段，WDBU/六氨化巧/DMF溶液作 为脱保护试剂，降低缺失肤杂质的产生；WBoc-Gly-Gly-OH片段直接联接到3-12片段 上，降低了des-Glyi和des-Glyi,Gly2,Gly3杂质的产生，Boc-Gly-Gly-OH成本远远低于 Boc-Gly-Gly-Gly-OH，且不含对产品合成工艺质量有影响的杂质，总成本和产品质量都有 明显优势。
【具体实施方式】
[0016] 本文所述，术语"氨基保护基团"所指部分是保护氨基部分，防止氨基参与反应，且 对反应本身无不可接受的不利影响。Fmoc，Boc等均为氨基保护基团。术语"駿基保护基团" 所指部分式保护駿基部分，防止駿基参与反应，且对反应本身物不可接受的不利影响。
[0017]本文所述，Fmoc是9-巧甲氧撰基，Boc是叔了氧撰