康定鼠尾草中三种酚酸类单体化合物的制备方法
【专利说明】
一、技术领域
[0001]本发明属于中药植物化学领域，具体涉及康定鼠尾草中三种酚酸类单体化合物的制备方法。
二、【背景技术】
[0002]康定鼠尾草(Salivaprattii Hemsl.)属唇形科(Labiatae)鼠尾草属(SalviaLinn.)植物。鼠尾草属(Salvia L.)是一个重要的药用植物类群，早在几千年前该属多种植物就成为重要的药用植物。现有资料表明:鼠尾草属植物含有多种有用的次生代谢产物，如:酚酸类、萜类、黄酮类等化学成分。这些成分具有广泛的生理及药理活性，包括扩张冠脉、增加冠脉流量、改善微循环、保护心脏、抗血小板聚集、提高免疫力、提高机体耐缺氧能力、抗肝炎、抗寄生虫、抗肿瘤、抗菌和抗病毒等。
[0003]高速逆流色谱(high-speedcountercurrent chromatography, HSCCC)是 20 世纪80年代发展起来的一种连续高效的液一液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体。它利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。
[0004]国内外文献报道咖啡酸、迷迭香酸和异迷迭香酸苷三种酚酸类单体化合物具有多种生物活性，包括极强的清除体内自由基的活性和抗氧化作用；抗血栓治疗心脑血管疾病作用；抗菌消炎的作用等。鉴于其广泛的药理活性，急需大量纯化合物为进一步药理活性研究积累足够的量。许多传统方法，包括硅胶和凝胶过滤层析制备分离纯化酚酸类成分需要耗费很长时间，且需要大量的有机溶剂和需要多步分离，回收率较低，成本较高。因此，寻找更有效的方法从植物中分离纯化酚酸类成分是非常必要的。
三、
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种简便、快速的康定鼠尾草中三种酚酸类单体化合物的分离制备方法。
[0006]为解决上述问题，本发明所述的康定鼠尾草中三种酚酸类单体化合物的制备方法，包括以下步骤:
[0007](I)选取康定鼠尾草的根部将其粉碎，采用质量浓度为40%-70%的酒精在50-80 °C下进行热回流提取，提取2_4次、每次2_4h，合并得到提取液；
[0008](2)将所述提取液在温度为50_70°C、压力为0.05-0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得康定鼠尾草提取物；
[0009](3)将所述康定鼠尾草提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3-5次，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液和残余水液四部分；四份萃取液在温度为50-70°C、压力为0.06-0.0SMPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得四份萃取物；
[0010](4)将所述正丁醇萃取物溶于其质量20-30倍的水中，并上DlOl大孔树脂柱，用2-4倍柱床体积、质量浓度为20-50%乙醇水溶液洗脱，得到含有三种酚酸类类物质的洗脱液；
[0011](5)所述含有三种酚酸类物质的洗脱液在温度为55-65°C、压力为0.06-0.08MPa的条件下蒸干至恒重，即得酚酸粗提物；
[0012](6)所述酚酸粗提物采用高速逆流色谱设备，在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系中以转速为800-1000r/min、流速为1.0-2.0mL/min、温度为25_35°C的条件对其进行分离，即可分别得到纯度彡97.3%的咖啡酸、纯度为彡95.9%的异迷迭香酸苷、纯度为彡97.8%的迷迭香酸。
[0013](7)所述步骤(6)中正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系的比例为:2-4:7:2-7:1-6。
[0014]本发明与现有技术相比具有以下优点:
[0015]1、本发明采用高速逆流色谱(HSCCC)分离技术分离纯化康定鼠尾草中的酚酸类成分，与传统柱色谱分离技术相比，不但有效地缩短了分离时间，而且减少了工艺过程中的有机溶剂消耗和能耗。
[0016]2、本发明一次分离可以同时得到的三种高纯度酚酸类单体化合物、性质稳定，纯度高(可达到94%以上)，可应用于医药、标准物质、保健食品等领域。
[0017]3、本发明重现性好、有机试剂消耗量小、成本低廉，适合工业化生产。
四、【具体实施方式】
[0018]实施例1康定鼠尾草中三种酚酸类单体化合物的制备方法，包括以下步骤:
[0019](I)将粉碎的康定鼠尾草的根部粉碎，采用质量浓度为70%的酒精在80°C下进行热回流提取，提取3次、每次2h，合并得到提取液；
[0020](2)将所述提取液在温度为70°C、压力为0.07MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得康定鼠尾草提取物；
[0021](3)将所述康定鼠尾草提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液和残余水液四部分；四份萃取液在温度为70°C、压力为0.06MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得四份萃取物；
[0022](4)将所述正丁醇萃取物溶于其质量20倍的水中，并上DlOl大孔树脂柱，用3倍柱床体积、质量浓度为40%乙醇水溶液洗脱，得到含有三种酚酸类类物质的洗脱液；
[0023](5)所述含有三种酚酸类物质的洗脱液在温度为60V、压力为0.07MPa的条件下蒸干至恒重，即得酚酸粗提物；
[0024](6)所述酚酸粗提物采用高速逆流色谱设备，在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水比例为3:7:3:6体系中以转速为800r/min、流速为2.0mL/min、温度为30°C的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为97.3%的咖啡酸、纯度为96.5%的异迷迭香酸苷、纯度为99.1%的迷迭香酸。
[0025]实施例2康定鼠尾草中三种酚酸类单体化合物的制备方法，包括以下步骤:
[0026](I)将粉碎的康定鼠尾草的根部粉碎，采用质量浓度为50%的酒精在70°C下进行热回流提取，提取4次、每次3h，合并得到提取液；
[0027](2)将所述提取液在温度为60°C、压力为0.0SMPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得康定鼠尾草提取物；
[0028](3)将所述康定鼠尾草提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取5次，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液和残余水液四部分；四份萃取液在温度为70°C、压力为0.07MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得四份萃取物；
[0029](4)将所述正丁醇萃取物溶于其质量30倍的水中，并上DlOl大孔树脂柱，用3倍柱床体积、质量浓度为30%乙醇水溶液洗脱，得到含有三种酚酸类类物质的洗脱液；
[0030](5)所述含有三种酚酸类物质的洗脱液在温度为65°C、压力为0.06MPa的条件下蒸干至恒重，即得酚酸粗提物；
[0031 ] (6)所述酚酸粗提物采用高速逆流色谱设备，在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水比例为4:7:2:5体系中以转速为850r/min、流速为1.5mL/min、温度为35°C的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为98.2%的咖啡酸、纯度为95.9%的异迷迭香酸苷、纯度为98.3%的迷迭香酸。
[0032]实施例3康定鼠尾草中三种酚酸类单体化合物的制备方法，包括以下步骤:
[0033](I)选取康定鼠尾草的根部将其粉碎，采用质量浓度为60%的酒精在60°C下进行热回流提取，提取4次、每次2h，合并得到提取液；
[0034](2)将所述提取液在温度为65°C、压力为0.06MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得康定鼠尾草提取物；
[0035](3)将所述康定鼠尾草提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液和残余水液四部分；四份萃取液在温度为60°C、压力为0.07MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得四份萃取物；
[0036](4)将所述正丁醇萃取物溶于其