一种化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 骨质疏松症是以骨质减少，骨的微观结构退化为特征的，致使骨的脆性增加以及 易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。随着社会老龄化的加快，骨质疏松症的患病人数正 在以每年5. 2 %的速度增加。
[0003] 淫羊藿为小檗科植物淫羊藿属的植物，具有补肝肾、健筋骨、助阳益精等功效，目 前，关于淫羊藿的基础研究报道比较少。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种化合物及其制备方法和应 用。
[0005] 本发明提供了一种化合物，具有式（I)结构，
[0007] 本发明提供了一种式（I)所示化合物的制备方法，包括：
[0008] 1)对淫羊藿属的植物进行提取，得到清膏；
[0009] 2)将得到的清膏进行分离，得到式⑴所示化合物。
[0010] 优选的，所述步骤1)所述的提取为采用水提醇沉法提取或醇提。
[0011] 优选的，所述步骤2)具体为：
[0012] 将得到的清膏依次通过大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和制备液 相色谱分离得到式（I)所示化合物。
[0013] 优选的，所述大孔吸附树脂柱色谱中的大孔吸附树脂为DlOl型大孔吸附树脂、 HPD-100型大孔吸附树脂、HPD-100A型大孔吸附树脂和HPD-300型大孔吸附树脂中的一种 或几种。
[0014] 优选的，所述通过大孔吸附树脂柱色谱中色谱分离所用洗脱液为水和乙醇水溶 液。
[0015] 优选的，所述通过硅胶柱色谱中色谱分离的洗脱液为二氯甲烷和甲醇的混合液。
[0016] 优选的，所述通过凝胶柱色谱中色谱分离的洗脱液为甲醇。
[0017] 优选的，所述通过制备液相色谱分离中色谱分离的洗脱液为乙腈和水的混合溶 液。
[0018] 本发明还提供了一种式（I)所示的化合物在制备治疗骨质疏松症的药物中的应 用，
[0020] 与现有技术相比，本发明提供了一种式（I)所示结构的化合物，该化合物能够治 疗骨质疏松症，且通过细胞实验发现，本发明所述的化合物对成骨细胞的增值有促进作用， 且在样品浓度为10 μΜ时，增值率可高达11. 24%。
【附图说明】
[0021] 图1为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合物的HRESI⑴MS谱图；
[0022] 图2为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合物的1H NMR谱图；
[0023] 图3为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合物的13C NMR谱图；
[0024] 图4为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合物的DEPT135谱图；
[0025] 图5为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合物的HMQC谱图；
[0026] 图6为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合物的HMBC谱图。
【具体实施方式】
[0027] 本发明提供了一种化合物，具有式（I)结构，
[0029] 本发明还提供了一种式（I)所示化合物的制备方法，包括：
[0030] 1)对淫羊藿属的植物进行提取，得到清膏；
[0031] 2)将得到的清膏进行分离，得到式⑴所示化合物。
[0032] 按照本发明，本发明对淫羊藿属的植物进行提取，得到清膏；所述淫羊藿属的植物 优选为淫羊藿，在本发明的提取中，优选采用淫羊藿的叶；本发明对提取的方法没有特殊限 制，本领域公知的用于溶剂提取中草药成分的方法均可，本发明优选采用水体醇沉法或醇 提；
[0033] 具体的，本发明将淫羊藿属的植物粉碎过筛后与水混合，提取，将提取液浓缩得 到清膏，向得到的清膏中加入乙醇，静置，浓缩，得到醇沉清膏；其中，淫羊藿属的植物与水 的质量比为1:20,所述提取的次数为2~4次，优选为3次；所述提取的时间优选为1~ 3小时，更优选为1. 5~2小时；所述加入乙醇优选为使醇沉清膏中醇的含量为60wt%~ 90wt %，更优选为70wt %。
[0034] 按照本发明，本发明将得到的清膏进行分离，得到式（I)所示化合物；所述分离步 骤优选为：将得到的清膏依次通过大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和制备液 相色谱分离得到式（I)所示化合物；即：
[0035] 2-1)将得到的清膏通过大孔吸附树脂柱色谱分离，得到大孔树脂分离后的粗品；
[0036] 2-2)将大孔树脂分离后的粗品通过硅胶柱色谱分离，得到硅胶分离后的粗品；
[0037] 2-3)将硅胶分离后的粗品通过凝胶柱色谱分离，得到凝胶分离后的粗品；
[0038] 2-4)将凝胶分离后的粗品通过制备液相色谱分离，得到式（I)所示化合物。
[0039] 具体的，本发明中，将得到的清膏通过大孔吸附树脂柱色谱分离，得到大孔树脂分 离后的粗品；其中，所述大孔吸附树脂优选为DlOl型大孔吸附树脂、HPD-100型大孔吸附树 月旨、HPD-100A型大孔吸附树脂和HPD-300型大孔吸附树脂中的一种或几种，更优选为DlOl 型大孔吸附树脂、HPD-100型大孔吸附树脂、HPD-100A型大孔吸附树脂或HPD-300型大孔吸 附树脂；所述洗脱液优选为水和乙醇水溶液；且为了充分的分离杂质与所需化合物，本发 明优选依次采用水和乙醇与水的体积比为（65~90) : (35~10)的溶液洗脱，更优选为依 次采用水和乙醇与水的体积比为（70~85) : (30~15)的溶液洗脱；其中，水的用量优选 为3~6倍柱体积的用量，更优选为4~5倍柱体积的用量；所述乙醇水溶液的用量优选为 3~6倍柱体积的用量，更优选为4~5倍柱体积的用量；
[0040] 且为了使大孔树脂分离后的粗品纯度更高，本发明优选将依次用水和乙醇水溶液 分离后得到的粗品再次用大孔吸附树脂柱色谱分离，其中，所述大孔吸附树脂优选为DlOl 型大孔吸附树脂、HPD-100型大孔吸附树脂、HPD-100A型大孔吸附树脂和HPD-300型大 孔吸附树脂中的一种或几种，更优选为DlOl型大孔吸附树脂、HPD-100型大孔吸附树脂、 HPD-100A型大孔吸附树脂或HPD-300型大孔吸附树脂；所述分离过程采用梯度洗脱，所述 梯度洗脱的洗脱液优选为乙醇与水的体积比为（X) : (100-x)的溶液，其中，〇<χ<95,更 优选为依次采用水，（5~10) %的乙醇水溶液，（15~20) %的乙醇水溶液、（25~30) %的 乙醇水溶液、（35~40) %的乙醇水溶液、（45~50) %的乙醇水溶液、（55~60) %的乙醇 水溶液、（65~70) %的乙醇水溶液、（75~80) %的乙醇水溶液和（90~95) %的乙醇水溶 液溶液洗脱，得到大孔树脂分离后的粗品；其中，每种洗脱液的用量均为1. 5~4倍柱体积， 更优选为2~3倍柱体积。另外需要指出的是，5%的乙醇水溶液是指，乙醇水溶液中乙醇 与水的体积比为5:95,其它百分含量的乙醇水溶液表示的含义与该解释相同。
[0041] 本发明中，将硅胶分离后的粗品通过硅胶柱色谱分离，得到硅胶分离后的粗品；其 中，所述硅胶优选为100~200目的硅胶；所述洗脱剂优选二氯甲烷甲醇溶液，其中，二氯 甲烷与甲醇的体积比优选为（0~30) :1;且为了能够更好分离杂质和所需化合物，本发明 优选依次采用二氯甲烷与甲醇的体积比为（30~20) :1、（15~10) :1、（10~5) :1、（3~ 2) :1以及0:1洗脱。
[0042] 本发明中，将大孔树脂分离后的粗品通过凝胶柱色谱分离，得到凝胶分离后的粗 品；所述凝胶柱色谱分离用凝胶优选为Sephadex LH-20 ;所述洗脱液优选为甲醇。
[0043] 本发明中，将凝胶分离后的粗品通过制备液相色谱分离，得到式（I)所示化合 物；其中，分离的流动相优选为乙腈水溶液；所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比优选为 (10~30) : (70~90)，更优选为（15~20) : (80~85)，最优选为18:82 ;所述流速优选为 10~30mL/min，更优选为15~25mL/min，最优选为17~20mL/min ;检测的波长优选为210 和280nm，得到化合物。
[0044] 本发明对得到的化合物进行了结构鉴定，其检测结果见图1~图6,其中，图1为 本发明实施例1制得的式（I)结构的化合物的HRESI (+)MS谱图；图2为本发明实施例1制 得的式⑴结构的化合物的1H NMR谱图；图3为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合 物的13C NMR谱图；图4为本发明实施例1制得的式⑴结构的化合物的DEPT135谱图；图 5为本发明实施例1制得的式（I)结构的化合物的HMQC谱图；图6为本发明实施例1制得 的式（I)结构的化合物的HMBC谱图；从图可以看出，由图1可知，得到的化合物的高分辨质 谱 HR-ESI-MS m/z 为 68L 2384 [M+H]+，（计算值 68L 2389, C32H41O1/)，提示化合物分子量为 680;且通过图2~图6的核磁数据分析，结合 1H NMR和13C NMR谱可判断该化合物为黄酮 类化合物，具体的：
[0045] 1H NMR(400MHz，CD3OD)中，δ 8. 01 (2H，d，J = 7. 6Hz)和 7. 07(2H，d，J = 7. 6Hz) 处的信号表明存在苯环上有2个对称的位点，故C环为4'取代；δ 6. 67 (1H，s)处出现I个 单峰，故可知在A、B环上有一个未取代的氢；δ 3. 89 (3H，s)、1. 27 (6H，s)有3个甲基信号； δ 5. 47 (1Η，s)和5. 00 (1Η，d，J = 6. 4Hz)为两个糖的端基氢信号。
[0046] 13C NMR(100MHz，CD3OD)中给出30个碳信号，共32个碳。δ 60. 96可能为葡萄糖 的六位碳信号，S 16. 15可能为鼠李糖的六位碳信号，除去两个六碳糖还余20个碳。其中 δ 178. 69有1个共辄的羰基，δ 154. 21~162. 05有5个与氧相连的不饱和碳信号，δ 54. 60 有1个-OMe的碳信号，DEPT135谱中给出δ 60. 96和24. 83两个012的信号，δ 72. 93为季 碳信号。结合文献（Fangjiang, Xin-Luan Wang, Nai-Li Wang, et al. 2009)，发现本化合物 比icarisid B在8位取代基上少了一个CH2。
[0047] HMQC 谱中，直接相关的信号有：δ Η〇· 82-δ c 16.15，δ H 1.27-δ c 22.64，δ H I. 27-Sc 25.37，δ η 3.89-Sc 54.60，δ η 5.00-Sc 100.99，δ η 5.47-Sc 101.74，δ η 6·67_δε 98.04(06)，δΗ 7·07_δε 113. 68(03'，5'），δΗ 8·01_δε 130.93(02'，6'）， 5" 2.92,3.08-5。24.83 和5" 3.76,3.94-5。60.96。结合1!1匪1?可知，5"0.82-5。 16. 15, δ η L 27- δ c 22. 64 和 δ η L 27- δ c 25. 37 为 3 个甲基的直接相关信号；δ η 2· 92， 3. 08- δ c 24. 83和δ η 3. 76, 3. 94- δ c 60. 96为2个CH2的直接相关信号；其余均为CH的 直接相关信号。
[0048] HMBC 谱中，δΗ 8. 01，7.07 和 122