用0. 5 倍量的5%NaCl溶液洗涤，石油醚层用无水硫酸钠脱水后，真空旋转蒸发溶剂
[0030] 将规格为20x20cmG型硅胶薄层板，浸入尿素甲醇饱和溶液中lmin，取出于通风 厨瞭干30min。取上述脂肪酸甲酯200mg加入60mg尿素1. 14mL甲醇，于尿素硅胶薄层板上 展开。点样后待出现白色络合物，覆盖一层尿素甲醇饱和溶液，25°C烘箱5min，取出放入展 开缸展开。展开剂为正己烷：无水乙醚：乙酸=80 : 20 : 1。展开完毕，取出碘显色，待 碘挥发后，刮出RF= 0. 63~0. 76处甲酯条带，4mL无水乙醚提取三次，氮气吹干。
[0031] 在双槽展开缸的一侧倒入乙腈，另一侧倒入20%硝酸银的乙腈溶液，在硝酸银侧 放入规格为l〇x20cmG型硅胶薄层板，避光展开。展开完毕，取出避光通风橱瞭干。将尿 素硅胶薄层板分离得到的脂肪酸甲酯溶于300微升氯仿在硝酸银硅胶薄层板上展开，展开 剂为甲苯：正己烷=40 : 60。取出碘显色，待碘挥发后，刮出饱和脂肪酸条带，4mL无水乙 醚提取三次，氮气吹干。如表1所示，从牛乳脂中富集得到79. 4%的支链脂肪酸。
[0032] 表1实施例1中得到的支链脂肪酸富集产品脂肪酸组成
[0035] 实施例2
[0036] 以粗制鍉鱼油为原料，取400mg粗鍉鱼油于试管，加入32mL0. 5mol/LK0H-Na0H溶 液，65°C皂化 30min，加入 32mLBF3-CH30H(1 : 3)，酯化 3 ~5min(70°C)。加入 4ml正己 烷（色谱纯），震荡3~4min。加入适量饱和NaCl，吸取上层于1. 5ml离心管中，加入少量 无水硫酸钠，离心l〇〇〇〇rpm/5min，取上清，氮气吹干。
[0037] 尿素按照1 : 4比例加入到纯甲醇中，于65°C水浴加热，待尿素完全溶解，加入一 定量上述脂肪酸甲酯，搅拌溶解完全，继续加热20min后，冷却到室温，放置于低温下保存 后，过滤分离尿素包合物。滤液用等体积石油醚萃取2次，每次萃取lOmin。石油醚层用0. 5 倍量的5%NaCl溶液洗涤，石油醚层用无水硫酸钠脱水后，真空旋转蒸发溶剂
[0038] 将规格为20x20cmG型硅胶薄层板，浸入尿素甲醇饱和溶液中lmin，取出于通风 厨瞭干30min。取上述脂肪酸甲酯200mg加入60mg尿素1. 14mL甲醇，于尿素硅胶薄层板上 展开。点样后待出现白色络合物，覆盖一层尿素甲醇饱和溶液，25°C烘箱5min，取出放入展 开缸展开。展开剂为正己烷：无水乙醚：乙酸=80 : 20 : 1。展开完毕，取出碘显色，待 碘挥发后，刮出RF= 0. 63~0. 76处甲酯条带，4mL无水乙醚提取三次，氮气吹干。
[0039] 在双槽展开缸的一侧倒入乙腈，另一侧倒入20%硝酸银的乙腈溶液，在硝酸银侧 放入规格为l〇x20cmG型硅胶薄层板，避光展开。展开完毕，取出避光通风橱瞭干。将尿 素硅胶薄层板分离得到的脂肪酸甲酯溶于300微升氯仿在硝酸银硅胶薄层板上展开，展开 剂为甲苯：正己烷=40 : 60。取出碘显色，待碘挥发后，刮出饱和脂肪酸条带，4mL无水乙 醚提取三次，氮气吹干。如表2所示，从粗鍉鱼油中富集得到94%的支链脂肪酸。
[0040] 表2实施例2中得到的支链脂肪酸富集产品脂肪酸组成
[0041]
[0043] 由此可见：
[0044] (1)本发明首次利用在尿素溶液包合的基础上，尿素硅胶薄层分离法结合硝酸银 硅胶薄层分离法从自然界可食用脂质中分离富集支链脂肪酸；
[0045] (2)按照本发明提供的分离方法，用尿素溶液包合预处理以期提高薄层板的初始 支链脂肪酸的上样量，用尿素硅胶薄层分离结合硝酸银硅胶薄层分离法克服尿素溶剂法的 试剂消耗量大、尿素残留及分离效率低的缺点，充分利用两种分离方法的优点同时互相弥 补各自的缺点，能够快速、简便，且在上样量小的情况下，高效去除油脂中的直链脂肪酸，得 到支链脂肪酸含量高的脂肪酸产品。与传统多次连续溶剂提取法比较，该方法具有耗时短， 溶剂消耗低，高效等诸多优点；
[0046] (3)按照本发明提供的尿素溶液包合与尿素薄层板制备分离方法，可以有效分离 去除直链饱和脂肪酸，去除时间短，作用效率高，脂肪酸甲酯展开至超过尿素覆盖的区域之 后才被收集，使得所制得的产品有效的避免了尿素污染。
[0047] (4)本发明首次采用预展开法，在展开双槽中放入不同的试剂，在节省硝酸银用量 的同时，快速地在薄层板上均匀铺上银离子，制备得到均匀度更高的硝酸银薄层板；
[0048] (5)本发明方法首次从天然脂质中采用尿素硅胶薄层色谱方法分离去除直链饱和 脂肪酸，利用硝酸银薄层去除直链不饱和脂肪酸，进而得到富集的支链脂肪酸，对促进我国 有关天然产物中支链脂肪酸分离检测的技术，提升我国在天然产物中支链脂肪酸领域的整 体科研水平具有重要意义。
[0049] 应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳 实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术 方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发 明的权利要求范围当中。
【主权项】
1. 一种支链脂肪酸微量分离富集方法，其特征在于：原料经过衍生化、尿素溶液包合、 尿素硅胶薄层板制备、尿素硅胶薄层展开与提取、硝酸银薄层板制备、硝酸银薄层展开与提 取步骤，从天然可食用脂质中富集得到支链脂肪酸，其包括， 将油脂原料衍生化为脂肪酸甲酯：取一定量油脂于试管，加入KOH-NaOH溶液，65°C皂 化30min，加入BF3-CH30H，70°C条件下酯化3~5min，加入正己烷后，再加入饱和NaCl后取 上层液体，加入无水硫酸钠，离心l〇〇〇〇rpm/5min，取上清，氮气吹干得到脂肪酸甲酯； 尿素溶液包合：尿素按照体积比1 : 4比例加入到纯甲醇中，于65°C加热，待尿素完全 溶解，加入所述脂肪酸甲酯，搅拌溶解完全，继续加热20min后，冷却到室温，放置于低温下 保存后，过滤分离尿素包合物，滤液用等体积石油醚萃取2次，每次萃取lOmin，石油醚层用 〇. 5倍量的5%NaCl溶液洗涤，石油醚层用无水硫酸钠脱水后，真空旋转蒸发溶剂； 尿素硅胶薄层板制备：将硅胶薄层板，浸入尿素甲醇饱和溶液中，取出于通风厨晾干 30min，制备得尿素硅胶薄层板，立即使用； 尿素硅胶薄层展开与提取：取所述尿素溶液包合中分离得到的脂肪酸甲酯在尿素硅胶 薄层板上展开，点样后待出现白色络合物，覆盖一层尿素甲醇饱和溶液，25°C烘干5min，取 出用第一展开剂展开，展开完毕，取出碘显色，待碘挥发后，刮出RF= 0. 63~0. 76处甲酯 条带，4mL无水乙醚提取，氮气吹干； 硝酸银薄层板制备：在展开装置的一侧倒入乙腈，另一侧倒入20%硝酸银的乙腈溶 液，在所述20 %硝酸银的乙腈溶液的一侧放入硅胶薄层板，避光展开，展开完毕，取出避光 通风橱晾干，制备得硝酸银硅胶薄层板； 硝酸银薄层展开与提取：将尿素硅胶薄层板分离得到的脂肪酸甲酯溶于氯仿在硝酸银 硅胶薄层板上用第二展开剂展开，取出碘显色，待碘挥发后，刮出饱和脂肪酸条带，无水乙 醚提取三次，氮气吹干，富含支链脂肪酸的脂肪酸产品。2. 如权利要求1所述的支链脂肪酸微量分离富集方法，其特征在于：所述第一展开剂 为正己烷、无水乙醚和乙酸，且满足体积比正己烷：无水乙醚：乙酸=80 : 20 : 1。3. 如权利要求1所述的支链脂肪酸微量分离富集方法，其特征在于：所述第二展开剂 为甲苯和正己烷，且满足体积比甲苯：正己烷=40 : 60。4. 如权利要求1~3任一所述的支链脂肪酸微量分离富集方法，其特征在于：所述尿 素溶液包合中，其中，加入所述脂肪酸甲酯，尿素与脂肪酸甲酯体积比例为4 : 1，包合温度 为4°C，包合时间2h。5. 如权利要求1所述的支链脂肪酸微量分离富集方法，其特征在于：所述尿素硅胶薄 层板制备中，尿素硅胶薄层板的浸泡时间为lmin，浸泡高度为8cm。6. 如权利要求1所述的支链脂肪酸微量分离富集方法，其特征在于：所述尿素硅胶薄 层展开与提取中点样，其点样方式为脂肪酸甲酯中加入按质量体积比为3 : 57的尿素和甲 醇。7. 如权利要求1所述的支链脂肪酸微量分离富集方法，其特征在于：所述硝酸银薄层 展开与提取中，饱和脂肪酸条带的相对位移为RF= 0. 714~0. 857。
【专利摘要】本发明公开了一种支链脂肪酸微量分离富集方法，其包括：采用衍生化、尿素溶液包合、尿素硅胶薄层板制备、尿素硅胶薄层展开与提取、硝酸银薄层板制备、硝酸银薄层展开与提取步骤从天然可食用脂质中富集得到相对含量很高的支链脂肪酸，其中采用尿素硅胶薄层法去除直链饱和脂肪酸，采用硝酸银薄层法去除直链不饱和脂肪酸。本发明能够快速、简便，且在上样量小的情况下，高效去除油脂中的直链脂肪酸，得到支链脂肪酸含量高的脂肪酸产品，且得到的支链脂肪酸避免了尿素和硝酸银的污染。
【IPC分类】C11C3/00, C11C3/04
【公开号】CN105419949
【申请号】CN201510749606
【发明人】王兴国, 闫媛媛, 金青哲, 姚云平, 王小三, 常明, 黄健花, 刘睿杰, 邹孝强, 刘元法
【申请人】江南大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月4日