一种球磨制备燕麦多肽的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种球磨制备燕麦多肽的方法，属于燕麦深加工技术领域。
【背景技术】
[0002] 燕麦属于禾本科植物，具有降血脂、降低胆固醇、降血压、降血糖和抗氧化性等多 种生物活性功能。其中，已有的研究表明，燕麦之所以能降血压，是因为燕麦具有降血压活 性多肽，因此燕麦多肽在开发降血压功能食品方面具有良好的发展前景。
[0003] 高血压是一种以动脉血压升高为主要症状，并可引发心、脑、肾、视网膜等靶器官 损伤及代谢改变的临床综合症。高血压之所以对人类健康构成极大的危害，是由于其容易 引起心血管疾病。目前，高血压病主要治疗药物：即利尿剂、p受体阻滞剂、钙拮抗剂、血管 紧张素转化酶抑制剂（Angiotensinconvertingenzymeinhibitor，ACEI)、血管紧张素 11 受体拮抗剂及a受体阻滞剂。其中，血管紧张素转化酶是一种含锌二肽羧酶，广泛分布于哺 乳动物组织中并对其血压调节起着关键性的作用。
[0004] 近年来，由于燕麦具有特有降血压活性肽特点，已成为人们研究降压的热点。中国 专利CN101709321B公开了《一种燕麦多肽及其制备方法与应用》，该燕麦多肽的制备方 法，包括如下步骤：1)预处理；2)酶处理；3)燕麦降压肽的纯化；专利CN101849606B公 开了《一种超声辅助酶解制备燕麦降血压肽的方法》，该燕麦降血压肽的制备方法，包括如 下步骤：1)将原料粉碎；2)按照碱提酸沉法提取蛋白；3)将上述制得的蛋白，进行超声促 进酶解处理；专利CN101805774B公开了《一种提取燕麦多肽、燕麦葡聚糖的综合提取方 法》，该燕麦多肽的制备方法，包括如下步骤：1)将原料粉碎；2)超声提取；3)酶解处理；4) 复溶、酶解、过滤。
[0005] 上述技术方案都采用了酶解法提取得到多肽，而酶解法容易存在反应效率不高， 蛋白酶的利用率低等不足，从而导致反应时间长、酶的消耗量大、产物活性低等问题。近年 来，机械化学在提取中的应用越来越广，这归功于机械化学打破植物细胞壁，提高有效成分 的提取率，但是有关利用机械化学技术制备燕麦多肽的文章还未见报道。
【发明内容】
[0006] 针对上述现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提出了一种球磨制备燕 麦多肽的方法。
[0007] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种球磨制备燕麦多肽的方法， 包括如下步骤：
[0008] (1)预处理：先将燕麦清理筛选，然后粉碎，且过80目筛，得到燕麦粉；
[0009] (2)脱脂处理：将经步骤⑴处理得到的燕麦粉用60~70%乙醇在60~70°C条 件下浸泡1~2h，冷却，倾去上液，得到沉淀燕麦粉；
[0010] (3)微波干燥：将经步骤（2)处理得到的沉淀燕麦粉进行微波干燥：微波功率 40~50kW、微波时间10~15min;
[0011] (4)碱水提取：先将经步骤（3)处理得到的燕麦粉用30~40°C温水浸泡，浸泡4~ 8min，其中料液比为1 :10~15,其次再用转速为200~300转/min的球磨机球磨，球磨 10~20min，然后用碳酸钠溶液调节球磨后混合物pH值至8. 0~11. 0,最后继续用转速为 200~300转/min的球磨机球磨球磨，球磨20~30min，过滤，并收集滤液；
[0012] (5)离心分离滤液：将经步骤⑷处理得到的滤液置于4000~5000转的离心机 上离心15~20分钟，并收集上清液1;
[0013] (6)超声处理：将经步骤（5)处理得到的上清液1置于超声频率为30~40KHz，超 声温度40~50°C下提取，提取20~30min;
[0014] (7)淀粉酶处理：先将经步骤（6)处理得到的提取液调节酶解pH值至6.0~ 7. 0、酶解温度为30~40°C，然后加入低温α-淀粉酶进行酶解，淀粉酶添加量为0. 08~ 0. 18%，最后再用转速为200~300转/min的球磨机球磨，球磨20~30min;
[0015] (8)糖化酶、β-葡聚糖酶处理：先将经步骤（7)处理得到的酶解液调整温度至 50~60°C，并调节pH值至4. 0~6. 0,然后依次加入糖化酶和β-葡聚糖酶进行酶解，糖化 酶、β-葡聚糖酶的添加量分别为0.05~0. 12%、0. 06~0. 16%，最后再用转速为200~ 300转/min的球磨机球磨，球磨20~30min;
[0016] (9)离心分离酶解液：将经步骤（8)处理得到的酶解液置于4000~5000转的离 心机上离心20~30分钟，并收集上清液2;
[0017] (10)等电点沉淀：将经步骤（9)处理得到的上清液2调节pH值至3.0~4.0,静 置 40 ~60min;
[0018] (11)离心分离蛋白：将经步骤（10)处理得到的沉淀溶液置于7000~8000转的 离心机上离心10~15分钟，并收集燕麦蛋白固体；
[0019] (12)碱蛋白酶处理：先将经步骤（11)处理得到的燕麦蛋白固体用15~20倍质量 的去离子水复溶，并调整pH值为9~10、温度至45~55°C，然后加入碱蛋白酶进行酶解， 碱蛋白酶的添加量为〇. 04~0. 08%，最后再用转速为200~300转/min的球磨机球磨，球 磨 30 ~40min;
[0020] (13)灭酶后离心分离：将经步骤（12)处理得到的酶解液加热到80~90°C，保温 10~15min后，置于4000~5000转的离心机上离心15~20分钟，并收集上清液3;
[0021] (14)冷冻干燥：将经步骤（13)处理得到的上清液3进行冷冻干燥，得到燕麦多 肽。
[0022] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0023] 本发明采用了机械化学（球磨）结合酶解技术制备燕麦多肽，弥补了机械化学在 制备燕麦多肽提取工艺的空白，球磨的加入，不仅可以缩短了酶解时间，改善了酶解效果， 还可以使燕麦多肽得率高，从而使燕麦多肽的价值得以更好的发挥。
【具体实施方式】
[0024] 实施例1
[0025] -种球磨制备燕麦多肽的方法，包括如下步骤：
[0026] (1)预处理：先将燕麦清理筛选，然后粉碎，且过80目筛，得到燕麦粉；
[0027] (2)脱脂处理：将经步骤（1)处理得到的燕麦粉用65%乙醇在65°C条件下浸泡 1. 5h，冷却，倾去上液，得到沉淀燕麦粉；
[0028] (3)微波干燥：将经步骤（2)处理得到的沉淀燕麦粉进行微波干燥：微波功率 45kW、微波时间12min;
[0029] (4)碱水提取：先将经步骤（3)处理得到的燕麦粉用35°C温水浸泡，浸泡6min，其 中料液比为1 :12,其次再用转速为250转/min的球磨机球磨，球磨15min，然后用碳酸钠溶 液调节球磨后混合物pH值至9. 5,最后继续用转速为250转/min的球磨机球磨球磨，球磨 25min，过滤，并收集滤液；
[0030] (5)离心分离滤液：将经步骤（4)处理得到的滤液置于4500转的离心机上离心18 分钟，并收集上清液1 ;
[0031] (6)超声处理：将经步骤（5)处理得到的上清液1置于超声频率为35KHz，超声温 度45°C下提取，提取25min;
[0032] (7)淀粉酶处理：先将经步骤（6)处理得到的提取液调节酶解pH值至6.5、酶解 温度为35°C，然后加入低温α-淀粉酶进行酶解，淀粉酶添加量为0. 13%，最后再用转速为 250转/min的球磨机球磨，球磨25min;
[0033] (8)糖化酶、β-葡聚糖酶处理：先将经步骤（7)处理得到的酶解液调整温度至 55°C，并调节pH值至5.0,然后依次加入糖化酶和β-葡聚糖酶进行酶解，糖化酶、β-葡 聚糖酶的添加量分别为〇. 09 %、0. 12%，最后再用转速为250转/min的球磨机球磨，球磨 25min；
[0034] (9)离心分离酶解液：将经步骤（8)处理得到的酶解液置于4500转的离心机上离 心25分钟，并收集上清液2 ;
[0035] (10)等电点沉淀：将经步骤（9)处理得到的上清液2调节pH值至3. 5,静置 50min；
[0036] (11)离心分离蛋白：将经步骤（10)处理得到的沉淀溶液置于7500转的离心机上 离心12分钟，并收集燕麦蛋白固体；
[0037] (12)碱蛋白酶处理：先将经步骤（11)处理得到的燕麦蛋白固体用18倍质量的去 离子水复溶，并调整pH值为9. 5、温度至50°C，然后加入碱蛋白酶进行酶解，碱蛋白酶的添 加量为〇. 06%，最后再用转速为250转/min的球磨机球磨，球磨35min;
[0038] (13)灭酶后离心分离：将经步骤（12)处理得到的酶解液加热到85°C，保温12min 后，置于4500转的离心机上离心18分钟，并收集上清液3 ;
[0039] (14)冷冻干燥：将经步骤（13)处理得到的上清液3进行冷冻干燥，得到燕麦多 肽。
[0040] 实施例2
[0041] -种球磨制备燕麦多肽的方法，包括如下步骤：
[0042] (1)预处理：先将燕麦清理筛选，然后粉碎，且过80目筛，得到燕麦粉；
[0043] (2)脱脂处理：将经步骤（1)处理得到的燕麦粉用60%乙醇在60°C条件下浸泡 lh，冷却，倾去上液，得到沉淀燕麦粉；
[0044] (3)微波干燥：将经步骤（2)处理得到的沉淀燕麦粉进行微波干燥：微波功率 40kW、微波时间lOmin;
[0045] (4)碱水提取：先将经步骤（3)处理得到的燕麦粉用30°C温水浸泡，浸泡4min，其 中料液比为1 :10,其次再用转速为200转/min的球磨机球磨，球磨lOmin，然后用碳酸钠溶 液调节球磨后混合物pH值至8. 0,最后继续用转速为200转/min的球磨机球磨球磨，球磨 20min，过滤，并收集滤液；
[0046] (5)离心分离滤液：将经步骤（4)处理得到的滤液置于4000转的离心机上离心15 分钟，并收集上清液1 ;
[0047] (6)超声处理：将经步骤（5)处理得到的上清液1置于超声频率为30KHz，超声温 度40°C下提取，提取20min;
[0048] (7)淀粉酶处理：先将经步骤（6)处理得到的提取液调节酶解pH值至6.0、酶解 温度为30°C，然后加入低温α-淀粉酶进行酶解，淀粉酶添加量为0. 08%，最后再用转速为 200转/min的球磨机球磨，球磨20min;
[0049] (8)糖化酶、β-葡聚糖酶处理：先将经步骤（7)处理得到的酶解液调整温度至 50°C，并调节pH值至4.0,然后依次加入糖化酶和β-葡聚糖酶进行酶解，糖化酶、β-葡 聚糖酶的添加量分别为〇. 05 %、0. 06%，最后再用转速为200转/min的球磨机球磨，球磨 20min；
[0050] (9)离心分离酶解液：将经步骤（8)处理得到的酶解液置于4000转的离心机上离 心20分钟，并收集上清液2;
[0051] (10)等电点沉淀：将经步骤（9)处理得到的上清液2调节pH值至3.0,静置 40min；
[0052] (11)离心分离蛋白：将经步骤（10)处理得到的沉淀溶液置于7000转的离心机上 离心10分钟，并收集燕麦蛋白固体；
[0053] (12)碱蛋白酶处理：先将经步骤（11)处理得到的燕麦蛋白固体用15倍质量的去 离子水复溶，并调整pH值为9、温度至45°C，然后加入碱蛋白酶进行酶解，碱蛋白酶的添加 量为0. 04%，最后再用转速为200转/min的球磨机球磨，球磨30min;
[0054] (13)灭酶后离心分离：将经步骤（12)处理得到的酶解液加热到