%以上，发酵周期192hr。发酵开始后第96hr，第一次补加全脂奶粉至终浓度15g/L，发酵开始后第144hr，第二次补加全脂奶粉至终浓度5g/L。
[0033]发酵192小时后得多杀霉素发酵液，按如下方法提取制备并检测多杀霉素:
[0034]发酵液中多杀菌素含量分析:
[0035]I)取发酵液Iml，加入9ml甲醇溶液，摇匀；
[0036]2)超声波震荡20min，静止lOmin，使固液分层；
[0037]3)取上层有机相，以0.45 μ m有机滤膜进行过滤；
[0038]4)过滤后有机相作为供试液通过高效液相色谱仪进行效价检测；
[0039]5)高效液相色谱条件:150X4.6mm(id)，5ym，不锈钢C18反相色谱柱；柱温35°C，流速1.0mL/min，以甲醇:乙腈:水(体积比为9: 10: I)为流动相进行分离，进样量20 μ 1，利用紫外检测器在246nm波长下进行检测。
[0040]大孔树脂洗脱液中多杀菌素含量分析:
[0041]发酵结束后，离心收集吸附有多杀菌素的大孔树脂，将大孔树脂装柱，用90%甲醇洗脱至多杀菌素未检测出为止，将甲醇洗脱液用0.45 μ m有机滤膜进行过滤，然后采用高效液相色谱仪进行效价检测，检测操作同上述步骤I)?5)。
[0042]使用本实施例中的培养基配方和发酵条件，得到多杀霉素产量为24.47g/L，进行330吨罐发酵时，每罐批原材料成本为28.2435万元(含大孔树脂8万元，可重复使用)。
[0043]实施例2提高多杀菌素产量的发酵方法
[0044]利用刺糖多胞菌Z68发酵生产多杀菌素，使用的发酵培养基为:玉米淀粉20g/L，葡萄糖30g/L，玉米浆15g/L，棉籽饼粉10g/L，酵母浸粉lg/L，大豆粉(过400目筛)5g/L，碳酸钙4g/L，豆油4g/L和大孔树脂5g/L，以水配制。
[0045]应用上述培养基，在330吨发酵罐中按如下条件进行发酵:培养温度26°C，搅拌转速150rpm，通气比1:0.3，罐压0.03MPa，溶氧控制在40%以上，发酵周期168hr。发酵开始后第96hr，第一次补加全脂奶粉至终浓度5g/L，发酵开始后第144hr，第二次补加全脂奶粉至终浓度5g/L。
[0046]发酵168小时后得多杀霉素发酵液，按实施例1的方法提取制备并检测多杀霉素。使用本实施例中的培养基配方和发酵条件，得到多杀霉素产量为22.42g/L，进行330吨罐发酵时，每罐批原材料成本为15.5675万元(含大孔树脂4万元，可重复使用)。
[0047]实施例3提高多杀菌素产量的发酵方法
[0048]利用刺糖多胞菌Z68发酵生产多杀菌素，使用的发酵培养基为:玉米淀粉40g/L，葡萄糖50g/L，玉米浆20g/L，棉籽饼粉20g/L，酵母浸粉5g/L，大豆粉(过400目筛)30g/L,碳酸钙6g/L，豆油6g/L和大孔树脂15g/L，以水配制。
[0049]应用上述培养基，在330吨发酵罐中按如下条件进行发酵:培养温度30°C，搅拌转速220rpm，通气比1: 0.7，罐压0.04MPa，溶氧控制在40%以上，发酵周期216hr。发酵开始后第96hr，第一次补加全脂奶粉至终浓度20g/L，发酵开始后第144hr，第二次补加全脂奶粉至终浓度15g/L。
[0050]发酵216小时后得多杀霉素发酵液，按实施例1的方法提取制备并检测多杀霉素。使用本实施例中的培养基配方和发酵条件，得到多杀霉素产量为24.37g/L，进行330吨罐发酵时，每罐批原材料成本为41.6650万元(含大孔树脂12万元，可重复使用)。
[0051]对比例
[0052]在与实施例1同等的发酵条件下:未添加大孔树脂和未补料全脂奶粉，多杀菌素的产量为13.44-15.10g/L ;添加大孔树脂10g/L且未补料全脂奶粉，产量为17.82-18.94g/L。可见，通过向发酵培养基中添加大孔树脂和后期补料添加全脂奶粉，大大提高了多杀菌素的最终产量。
[0053]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1.一种提高多杀菌素产量的发酵方法，其特征在于，其是向刺糖多胞菌(Saccharopolyspora spinosa)的发酵培养基中添加大孔树脂,并在发酵过程中补加全脂奶粉，从而提闻多杀菌素的广量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述刺糖多胞菌为刺糖多胞菌(Saccharopolyspora spinosa)Z68。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基中含有如下组分:大豆粉5-30g/L、玉米淀粉20-40g/L、葡萄糖30_50g/L、玉米浆15_20g/L、碳酸钙4_6g/L和大孔树脂5-15g/L，以水配制。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基中还包括棉籽饼粉10-20g/L和/或酵母浸粉l_5g/L和/或豆油4-6g/L。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂型号为D1300，比表面积550-600m2/g,平均孔径 6nm。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵的条件为:培养温度26-30°C，转速150-220rpm,通气比1:0.3-0.7，罐压0.03-0.04MPa,溶氧控制在40%以上，发酵周期为168-216hr。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，发酵的条件为:培养温度28°C，转速200rpm，通气比1:0.5，罐压0.03MPa，溶氧控制在40%以上，发酵周期为192hr。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵开始后第120hr内，第一次补加全脂奶粉至终浓度5-20g/L。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵开始后第120-192hr内，第二次补加全脂奶粉至终浓度5-20g/L。10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，发酵开始后第96hr，第一次补加全脂奶粉至终浓度15g/L，发酵开始后第144hr，第二次补加全脂奶粉至终浓度5g/L。
【专利摘要】本发明提供一种提高多杀菌素产量的发酵方法，其是通过向刺糖多胞菌(Saccharopolyspora？spinosa)的发酵培养基中添加大孔树脂，并在发酵过程中补加全脂奶粉，从而提高多杀菌素的产量。在发酵培养基中添加大孔树脂可以有效快速地降低多杀菌素浓度，减弱代谢产物阻遏现象，并且在发酵过程中通过补料全脂奶粉，有利于菌体继续生长和产物合成，可进一步提高多杀菌素的产量。
【IPC分类】C12R1/645, C12P19/62
【公开号】CN105441518
【申请号】CN201410418363
【发明人】王书睿, 周贤龙, 刘静
【申请人】牡丹江佰佳信生物科技有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2014年8月22日