一种治疗肾癌的克罗烷型二萜化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从绞股蓝的干燥全草中分离得到的一种克罗 烷型二萜类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum(Thunb· )Maki_no，GP)属萌芦科多年生蔓生草 本，又名七叶胆、五叶参等。因其叶有甜味在日本被称为"甘茶蔓"。性凉、苦、微甘，归肺、脾、 肾经。具有益气健脾，化痰止咳，清热解毒的功效，可用于治疗体虚乏力、虚劳失精、白细胞 减少症、高脂血症、病毒性肝炎、慢性胃肠炎、慢性气管炎。该植物主要生长于亚热带，全世 界约有16种和3个变种，我国有15种和3个变种，广泛分布秦岭及长江以南地区。
[0003] 绞股蓝主要化学成分为绞股蓝皂苷，分布于植物营养器官包括同化组织及韧皮部 薄壁细胞，其含量因植物的部位不同而有所差别，一般情况下绞股蓝叶中含量最高。目前从 绞股蓝中共分离得到140多种绞股蓝皂苷，其中绞股蓝皂苷3、4、8、12分别与人参皂苷Rh、 仙 3、1?(1、内结构相同，为同物异名。此外，绞股蓝还含有黄酮类、糖类、萜类等多种化学成分。 现代药理研究表明，绞股蓝是一种化学成分比较明确的植物，具有药效良好、毒副作用小等 特点。绞股蓝皂苷对胃癌、宫颈癌、舌癌等培养癌细胞均具有显著的细胞毒作用。绞股蓝皂 苷具有显著降低胆固醇（TCH)、甘油三脂（TG)、低密度脂蛋白（LDL)、升高高密度脂蛋白 (HDL)、保护血管内壁，阻止脂质在血管壁沉积，抗动脉硬化的作用。绞股蓝可以调节氧在体 内分解后产生的废物一一脂肪酸，达到降血脂的目的。绞股蓝皂苷具有明显降低血粘稠度、 调整血压功能、同时能防止微血栓形成并增加心肌细胞对缺氧的耐力，起到保护心肌的作 用。绞股蓝皂苷可提高衰老成纤维细胞增殖能力，且增殖效应呈时间和浓度依赖性，延缓细 胞衰老。绞股蓝具有免疫调节作用，其活性主要体现为:增强非特异性免疫、体液免疫、细胞 免疫;影响淋巴细胞转化和白细胞介素2分泌;增强自然杀伤细胞(NK)的功能。此外，绞股蓝 还可制成保健茶、饮料、食品添加剂等功能性食品，具有广阔的应用开发前景。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种从绞股蓝的干燥全草中分离得到的一种克罗烷型二萜 类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] 具有下述结构式的化合物(I):
[0007]
[0008] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将绞股蓝的干燥全草粉碎， 用70~80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱体 积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物 用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4 个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分 离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减 压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0009] 进一步地，步骤(a)中，用75 %乙醇热回流提取，合并提取液。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0012] 所述的化合物(I)在制备治疗肾癌的药物中的应用。
[0013] 所述的药物组合物在制备治疗肾癌的药物中的应用。
[0014] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0015] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0016] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0017] 图1为化合物(I)结构式；
[0018] 图2为化合物（I)计算E⑶和实验E⑶图。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0020] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0021] 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0022] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0023] (a)将绞股蓝的干燥全草(8kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取(30L X 3次），合并提 取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水饱和的正丁醇 (6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(375g)和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗 脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物（129g);(c)步骤（b)中 70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、30 :1 (8个柱体 积）、15:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1(10个柱 体积）和2:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(138mg)。
[0024] 结构确证:HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z 429.1212，结合核磁特征可得分子式为 C20H22〇9，不饱和度为 10。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，DMS〇-d6，600MHz):H-1 (2 · 67，m)，H-1 (2.41，m)，H-3(2.72，m)，H-3(2.48，m)，H-4(2.70，dd，J=12.6,3.0)，H-6(4.45，t，J = 8.8)， Η-7(2· 16，dd，J=15.0,8.8)，H-7(1.80，dd，J=15.0,8.8)，H-9(2.27，d，J = 4.0)，H-11 (4.25，d，J=4.0)，H-12(5.25，s)，H-14(6.24，br，s)，H-15(7.39，br，s)，H-16(7.35，br，s)， H-17(l .65,s)，H-19(l. 11，s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz) :54.2(CH2, ΙΟ, 211.1 (C，2-C)，41.0(CH2,3-C)，44.8(CH，4-C)，42.7(C，5-C)，79.0(CH，6-C)，40.2(CH2， 7-C)，69.9(C，8-C)，42.2(CH，9-C)，101.1(C，10-C)，74.7(CH，ll-C)，77.3(CH，12-C)，120.6 (C，13-C)，107.2(CH，14-C)，144.3(CH，15-C)，139.2(CH，16-C)，25.8(CH 3，17-C)，173.9(C， 18-C)，16.5(CH3,19-C)，171.3(C，20-C);碳原子标记参见图1 <JR光谱表明该化合物含有羟 基(3444cm-〇和内酯（1770cm-〇基团。NMR谱表明，该化合物含有两个甲基RH1.65(s，H 3-17) 和1.11(8，出-19)]，三个含氧次甲基[3!14.45(^ = 8.8!^，!1-6)，4.25((1，了 = 4.0!^，!1-11) 和5.25(8，!1-12)4079.0((：-6)，74.7((：-11)和77.3((：-12)]，一个0单取代呋喃环[5(：120.6 (C-13)，107.2(014)，144.3(015)，和139.2(016)]，一个酮羰基[SC211.1(C-2)]以及两 个内酯羰基[SC