一种具有内皮细胞保护作用的环烯醚萜化合物的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从川西獐牙菜的干燥全草中分离得到的一种 具有内皮细胞保护作用的环烯醚萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 川西猜牙菜Swertiamussotii Franch.为龙胆科猜牙菜属植物，一年生草本，高15 ~60cm，全草入药，产于西藏、云南（德钦）、四川西北部、青海西南部，分布在海拔1900~ 3000m的山坡、河谷、林下、灌丛、水边。川西獐牙菜一直作为"藏茵陈"入药。但是，藏茵陈是 一类治疗肝胆疾病的常用藏药的总称，原植物有川西獐牙菜和印度獐牙菜，还包括龙胆科 獐牙菜属、花锚属、扁蕾属、喉毛花属、肋柱花属、虎耳草科虎耳草属数种植物，植物基源紊 乱。
[0003] 川西獐牙菜作为"藏茵陈"入药，早在《四部医典》、《晶珠本草》等中就有记载，历史 悠久、用途广泛、疗效显著，且该药材在我国分布较广、来源丰富，具有良好的开发利用价 值。近年来，以川西獐牙菜为主要原料、在传统方剂的基础上经现代工艺加工而成的新药制 剂已有晶珠肝泰舒胶囊、急肝宁片、乙肝宁片、止泻灵、藏茵陈片、八味藏茵陈散、二十六味 藏茵陈丸、十三味藏茵陈散、红花七味方等。
[0004] 川西獐牙菜中化学成分主要为咕吨酮类、环烯醚萜苷类、三萜类等，另外还含多 糖、挥发油、矿物质、留体等。环烯醚萜苷类、三萜类成分是该属的主要活性成分。川西獐牙 菜中所含有的环烯醚萜类化合物，包括环烯醚萜和裂环环烯醚萜两类，以裂环环烯醚萜为 主。三萜类成分以齐墩果烷型五环三萜为主，主要有齐墩果酸、熊果酸等。从川西獐牙菜中 分得的环烯醚萜类有川西獐牙菜内酯I、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷。獐牙菜苦苷和獐 牙菜苷是存在于獐牙菜属植物中的主要活性成分。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从川西獐牙菜的干燥全草中分离得到的一种具有内皮 细胞保护作用的环烯醚萜类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将川西獐牙菜的干燥全草 粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用75%乙醇洗脱 10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙 醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85 :1、55:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15: 1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷 键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为85%。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]制备方法：（a)将川西獐牙菜的干燥全草(8kg)粉碎，用85 %乙醇热回流提取(25L X3次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和 水饱和的正丁醇(3L X 3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(345g)和正丁醇 萃取物；（b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体 积，再用75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏 (133g);(c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1(8个柱体 积）、55:1 (8个柱体积）、25:1 (6个柱体积）、10 :1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用 体积比为15:1(8个柱体积）、10:1(10个柱体积)和5:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(13g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯 的化合物（I)(32mg)。
[0024] 结构确证:无色油状物;册43頂3显示[1+似]+为111/2 337.1306，结合核磁特征可 得分子式为C15H22〇7，不饱和度为5。核磁共振氢谱数据δ Η(ΡΡπι，DMS〇-d6，600MHz): H-1 (6 · 39， d，J = 3.0)，H-3(6.11，s)，H-5(3.32，d，J = 4.2)，H-6(3.85，d，J = 3.0)，H-7(2.27，d，J = 3.0)，H-9(2.18，t，J=4.2)，H-10(3.48，m)，H-10(3.82，m)，H-ll(5.01，s)，H-ll(5.07，s)， H-2'（2.06，m，2H)，H-3'（1.95，m)，H-4'（0.89，d，J = 7.2)，H-5'（0.91，d，J = 6.6);核磁共振 碳谱数据Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz) :89.3(CH，1-C)，98.8(CH，3-C)，139.9(C，4-C)，38.7(CH， 5-C)，77.1(CH，6-C)，64.2(CH，7-C)，69.6(C，8-C)，33.9(CH，9-C)，63.4(CH2，10-C)，111.6 (CH2，ll-C)，171.3(C，r-C)，42.8(CH2,2'-C)，25.2(CH，3'-C)，21.7(CH3,4'-C)，21.8(CH 3， 5'_〇;碳原子标记参见图1。11?光谱表明该化合物含有羟基，羰基和烯烃结构（3457(31^ 1， 1745cm-1和 1666cm-1)。hNMR谱显示一个异戊酰基结构[δΗΟ · 89 (d，J = 7 · 2Hz，H-4 '），0 · 91 (d， 了 = 6.6抱，!1-5'）丄95(111，!1-3'），2.06(111，2!1，!1-2'）]，一个烯属亚甲基质子信号[5!15.01(8， !1-11)和5.07(8，!1-11)]，一个含氧亚甲基信号[5!13.48(111，!1-10)和3.82(111，!1-10)]，四个含 氧次甲基质子信号[SH2.27(d，J = 3.0Hz，H-7)，3.85(d，J = 3.0Hz，H-6)，6.11(s，H-3)，6.39 ((1，1 = 3.0他，!1-1)]。13(：匪R谱显示了 15个碳信号，包括两个甲基信号WC21.7(C-4'）和 21.8(C-5'）]，三个亚甲基[一个含氧亚甲基SC63.4(C-