发酵类中药优势菌群选择性培养基及其制备方法和发酵类中药优势菌的筛选方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种优势菌群选择性培养基及其制备方法和优势菌的筛选方法。
【背景技术】
[0002]发酵类中药是利用传统的中药炮制学发酵法在自然条件利用环境中的微生物发酵中药或豆类、面粉等而成，为多菌种混合自然发酵，用以达到提高药效、消除毒副作用、改变药性的目的。
[0003]传统的中药发酵采用天然微生物多菌种混合发酵，菌种不纯，代谢理论、药效成分理念模糊不清，生产可控性差;加之不同地域、不同生产环境、不同原料、不同生产季节的微生物有差异，从而导致发酵中药的产品质量波动性大、不稳定。
[0004]为了获得固定发酵菌群，以提高和保障发酵类中药的生产质量，目前已选用营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、麦芽汁琼脂培养基分离培养发酵中药中的微生物菌群，这三种培养基分别适用于细菌、霉菌和酵母菌的培养，只能单独的培养分离不同种类的菌群；而对于多菌种混合自然发酵的中药不能单独采用一种培养基而获得全部优势菌群，需多种培养基分离不同菌群，不仅费时费力，优势菌种分离效果也不理想。
【发明内容】
[0005]本发明是为了解决传统的中药发酵产品质量波动性大、不稳定，以及目前分离获得的发酵中药中的微生物种类、菌种的数量差异性较大;且还需多次分离纯化、费时费力，菌种筛选效果也不理想的问题，而提供的一种发酵类中药优势菌群选择性培养基及其制备方法和发酵类中药优势菌的筛选方法。
[0006]本发明发酵类中药优势菌群选择性培养基包括中药煎煮浓缩液、葡萄糖和琼脂。
[0007]上述发酵类中药优势菌群选择性培养基按以下步骤制备:将葡萄糖和琼脂加入中药煎煮浓缩液中摇匀，再灭菌，即得到发酵类中药优势菌群选择性培养基。
[0008]用上述发酵类中药优势菌群选择性培养基筛选发酵类中药优势菌的方法按以下步骤进行:
[0009]一、将发酵类中药优势菌群选择性培养基铺平板，然后自然冷却凝固；
[0010]二、将发酵类中药在无菌条件下用浓度为0.9%的无菌生理盐水研磨，然后再稀释涂于步骤一发酵类中药优势菌群选择性培养基上，置于20°C?40°C培养2?7天，即得到该发酵类中药优势菌群。
[0011]本发明发酵类中药优势菌群选择性培养基具有针对性强，可完全满足发酵中药中所有优势菌群的生长繁殖需要，不会造成发酵优势菌群的缺失;而且本发明培养基的选择性好，优势菌群可在发酵过程中生长旺盛，中药煎煮浓缩液可有效抑制杂菌的生长，从而避免杂菌的干扰和影响。
[0012]采用本发明发酵类中药优势菌群选择性培养基对发酵类中药的优势菌群进行筛选具有快速、准确的优点，特别适合含有多种未知微生物的发酵中药的优势菌种筛选。
[0013]按本发明方法选取的发酵类中药的优势菌群的菌种结构合理、比例适当，可直接用于产业化生产，具有发酵速度快、周期短、质量稳定等优势。
【具体实施方式】
[0014]本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的任意组合。
[0015]【具体实施方式】一:本实施方式发酵类中药优势菌群选择性培养基包括中药煎煮浓缩液、葡萄糖和琼脂。
[0016]六神曲、淡豆豉为传统中药中典型的发酵类中药。本实施方式发酵类中药优势菌群选择性培养基可适用于不同发酵类中药。
[0017]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点是:每升发酵类中药优势菌群选择性培养基中含葡萄糖10?30g、琼脂15?25g。其它步骤及参数与实施方式一相同。
[0018]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点是:淡豆豉优势菌群选择性培养基由桑叶和青蒿的水煎煮浓缩液1000ml、大豆粉30?50g、葡萄糖10?30g和琼脂15?25g组成;桑叶和青蒿的水煎煮浓缩液由70?10g的桑叶和70?10g的青蒿煎煮而成。其它步骤及参数与实施方式一相同。
[0019]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点是:六神曲优势菌群选择性培养基由辣寥、青蒿和苍耳草的水煎煮浓缩液1000ml、苦杏仁粉15?25g、赤小豆粉15?25g、葡萄糖10?30g和琼脂15?25g组成；辣寥、青蒿和苍耳草的水煎煮浓缩液由50?10g的辣寥、50?10g青蒿和50?10g的苍耳草煎煮而成。其它步骤及参数与实施方式一相同。
[0020]【具体实施方式】五:本实施方式发酵类中药优势菌群选择性培养基按以下步骤制备:
[0021]将葡萄糖和琼脂加入中药煎煮浓缩液中摇匀，再灭菌，即得到发酵类中药优势菌群选择性培养基。
[0022]【具体实施方式】六:本实施方式与【具体实施方式】五的不同点是:六神曲优势菌群选择性培养基制备方法:
[0023]将苦杏仁粉15?25g、赤小豆粉15?25g、葡萄糖10?30g和琼脂15?25g加入由辣寥、青蒿和苍耳草的水煎煮浓缩液100ml中摇匀，再121°C、高压蒸汽灭菌15?20min，即得到发酵类中药优势菌群选择性培养基;辣寥、青蒿和苍耳草的水煎煮浓缩液由50?10g的辣寥、50?10g青蒿和50?10g的苍耳草煎煮而成。其它步骤及参数与实施方式五相同。
[0024]【具体实施方式】七:本实施方式与【具体实施方式】五的不同点是:淡豆豉优势菌群选择性培养基制备方法:
[0025]将大豆粉30?50g、葡萄糖10?30g和琼脂15?25g加入由桑叶和青蒿的水煎煮浓缩液100ml中摇匀，再121°C、高压蒸汽灭菌15?20min，即得到发酵类中药优势菌群选择性培养基;桑叶和青蒿的水煎煮浓缩液由70?10g的桑叶和70?10g的青蒿煎煮而成。其它步骤及参数与实施方式五相同。
[0026]【具体实施方式】八:本实施方式按以下步骤选取发酵类中药优势菌群:
[0027]—、将发酵类中药优势菌群选择性培养基铺平板，然后自然冷却凝固；
[0028]二、将发酵类中药在无菌条件下用浓度为0.9%的无菌生理盐水研磨，然后再稀释涂于步骤一发酵类中药优势菌群选择性培养基上，置于20°C?40°C培养2?7天，即得到该发酵类中药优势菌群。
[0029]本实施方式中步骤一中每个培养皿中倒入发酵类中药优势菌群选择性培养基15?20ml。步骤二发酵类中药优势菌群选择性培养基上涂覆发酵类中药研磨稀释液50?200μ
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[0030]实施例1
[0031]淡豆豉优势菌群选择性培养基制备方法:将大豆粉30g、葡萄糖20g和琼脂20g加入由桑叶和青蒿的水煎煮浓缩液100ml中摇匀，再121°C、高压蒸汽灭菌15?20min，即得到发酵类中药优势菌群选择性培养基;桑叶和青蒿的水煎煮浓缩液由70g的桑叶和10g的青蒿煎煮而成。
[0032]筛选发酵类中药优势菌群:
[0033]—、将淡豆豉优势菌群选择性培养基铺平板，然后自然冷却凝固；
[0034]二、将淡豆豉在无菌条件下用浓度为0.9%的无菌生理盐水研磨，然后再稀释涂于步骤一淡豆豉优势菌群选择性培养基上，置于25°C?30°C培养5天，即得到淡豆豉优势菌群；
[0035]步骤一中每个培养皿中倒入淡豆豉优势菌群选择性培养基15?20ml。
[0036]步骤二淡豆豉优势菌群选择性培养基上涂覆淡豆豉研磨稀释液ΙΟΟμΙ。
[0037]实施例2
[0038]六神曲优势菌群选择性培养基制备方法:将苦杏仁粉15g、赤小豆粉15g、葡萄糖30g和琼脂25g加入由辣寥、青蒿