一种植物乳杆菌及其在天然牧草青贮中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于牧草饲料加工贮藏技术领域，特别涉及一种植物乳杆菌及其在天然牧 草青贮中的应用。
【背景技术】
[0002] 我国天然草地面积广阔、资源丰富，天然牧草的传统生产方式主要是调制干草，而 干草调制过程由于雨淋等各种原因造成牧草霉烂变质，质量下降，浪费极为严重。大量实践 资料表明，青贮饲料不仅可以延长饲料的保存时间，还可以有效地保持牧草的营养成分。通 常牧草在成熟和晒干之后，其营养价值会降低约30%-50%，但青贮后牧草的营养价值仅降 低青贮不仅会使牧草中的维生素和蛋白质得到有效的保护，还可以很好地改善 饲草的适口性，提高饲草的消化利用率。
[0003] 然而，天然牧草本身草群构成复杂，干物质含量较高，可溶性糖含量低，茎干中空， 加上缺乏相关机械等问题导致青贮填装过程难以压实，残留空气较多，发酵底物不足，直接 青贮难以获得优质青贮饲料。乳酸菌制剂的使用可增加青贮初期发酵时的乳酸菌数量，对 保证青贮饲料尽快进入乳酸发酵阶段非常有效，可以使pH值迅速下降，蛋白水解作用减弱， 青贮饲料中氨态氮含量减少，青贮发酵品质改善。
【发明内容】
[0004] 本发明针对现有技术的不足，其目的在于提供一种植物乳杆菌及其在天然牧草青 贮中的应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
[0006] -种植物乳杆菌，所述的植物乳杆菌菌株为LP3，分类命名为Lactobacillus plantarum，在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为CGMCC No. 10474。
[0007] 所述的植物乳杆菌的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.l所示。
[0008] 所述的植物乳杆菌的生物学特性为：菌株在MRS固体培养基上30°C培养48h，生长 良好，可形成边缘整齐的乳白色菌落;菌株革兰氏染色呈阳性，显微镜下的细胞形态为短杆 状、无芽孢;氧化酶阴性，具有较强的生长及产酸性能;在起始pH值为3.5-8.0的培养基上能 生长，在10°C条件下呈现微弱生长，在15°C_40°C条件下生长状况良好，在不大于6.5 %NaCl 的条件下生长状况良好。
[0009] 所述的植物乳杆菌在制备天然牧草青贮饲料中应用。
[0010] 所述天然牧草青贮饲料的制备方法为:在天然牧草中接种植物乳杆菌LP3后，将其 在15_25°C下固体厌氧发酵3〇-60d即可。
[0011] 所述的植物乳杆菌LP3的接种量为:每克天然牧草中接种105-106cfu植物乳杆菌 LP3〇
[0012] 所述的天然牧草为羊草、赖草和披碱草中的一种或一种以上。
[0013] 所述的植物乳杆菌在制备天然牧草青贮饲料添加剂中的应用。
[0014] 所述的天然牧草青贮饲料添加剂为制备天然牧草青贮饲料中添加的菌剂。
[0015] 所述天然牧草青贮饲料添加剂的制备方法为:将植物乳杆菌接种到MRS液体培养 基中，在温度为30_37°C的条件下，厌氧培养18-24h;
[0016] 所述的MRS液体培养基的成分为：10.0 g/L蛋白胨、10.0 g/L牛肉膏、5. Og/L酵母膏、 2. Og/L柠檬酸氢二铵、20.0 g/L葡萄糖、1. Og/L吐温-80、5. Og/L乙酸钠、2. Og/L磷酸氢二钾、 0.58g/L硫酸镁和0.25g/L硫酸锰；
[0017] 所述MRS液体培养基的初始pH值为6-7。
[0018] 本发明的有益效果为：与自然的青贮饲料相比，每克天然牧草中接种106cfu的植 物乳杆菌LP3后，天然青贮饲料的pH明显降低，达到4.0以下，乳酸含量提高93.5%，氨态氮 降低56.9%，丁酸含量和大肠菌数量均低于检测限，明显提高了野生牧草青贮的发酵品质； 同时植物乳杆菌LP3具有发酵效率高、成本低廉等优点，可应用于绿色环保生物饲料的生产 中。
[0019]生物材料保藏说明
[0020] 分类命名:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);菌株编号:LP3。
[0021]保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0022] 保藏机构简称:CGMCC
[0023]地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0024]保藏日期：2015年1月30日
[0025] 保藏中心登记入册编号：CGMCC No .10474。
【附图说明】
[0026] 图1:植物乳杆菌LP3在MRS液体培养基中生长时MRS液体培养基pH值的变化曲线 图。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明，以下的实施例便于更好地理解本 发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法;所用的 材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028] 实施例1:植物如杆菌(Lactobacillus plantarum)LP3的分离与鉴定
[0029]取河北地区天然野生牧草青贮20g，加入180mL蒸馏水，用震荡器震荡30min，10 一 I ΠΓ6梯度稀释。分别从各梯度稀释液中取lmL至培养皿中，加入10-15mL灭菌后的MRS固体培 养基上，摇匀，待其冷却凝固，静置厌氧培养48h，挑取菌落形态、大小、颜色和光泽度有明显 差别的单菌落，重复划线，直至得到纯菌落。
[0030] 对分离筛选得到的菌株进行鉴定，根据菌株的细胞形态、生理生化特征和16S rDNA基因序列进行综合分析，鉴定菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，命名为 LP3，是一株新的植物乳杆菌。
[0031] 菌株LP3的生物学特性为:LP3菌株在MRS固体培养基上培养24h，菌株生长良好，可 形成边缘整齐的乳白色菌落;菌株革兰氏染色呈阳性，显微镜下的细胞形态为短杆状、无芽 孢;氧化酶阴性，具有较强的生长及产酸性能。
[0032]将菌株LP3接种于MRS液体培养基中37°C培养48h后，按1.5%的比例接种到灭菌后 的200mL MRS液体培养基中，置于37°C培养箱中培养，每3h取样测定MRS培养基的pH值，并在 600nm下测定其吸光度，结果如图1所示。从图中可知，菌株LP3在MRS液体培养基中培养24h 后，MRS液体培养基的pH值低于4.0。
[0033] 根据GB4789.35-2010对菌株不同碳源的同化能力进行检测，其对碳源发酵的实验 结果如表1所示；16S rDNA基因序列如SEQ ID N0.1所示。
[0034]表1:LP3菌株的碳源发酵实验结果
[0037] 注:ATCC 14917τ为植物乳杆菌模式菌株，"+"为阳性；为阴性。
[0038] 实施例2:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)LP3在不同pH、温度及盐浓度环 境条件下的生长测定
[0039]用lmol/L的盐酸和lmol/L的氢氧化钠将MRS培养基的起始pH值分别调