一种鳄鱼血多肽粉的制备方法及其产品与应用
【技术领域】
[0001]本申请涉及食品、保健品或药品等领域，具体涉及一种鳄鱼血多肽粉的制备方法及其产品和应用。
【背景技术】
[0002]鳄鱼是爬行纲、鳄目、鳄科的一类动物，具有很高的经济和医用价值。鳄鱼在捕食猎物时可长时间潜伏于水中，其血中可携带大量的氧供应机体使用，使得鳄鱼具有强大的爆发力和咬合力。有研究表明，鳄鱼血中血红蛋白氨基酸链有着非常奇特的构造，使鳄鱼的血红蛋白携氧量超过其他动物100倍以上。对鳄鱼血的开发，有助于研究对人体有益的产品，通过补充相应产品，可提高体质虚弱人群的机体免疫力，或提高运动机能和抵抗疲劳的效果，对提高人们生活和工作水平具有很好的促进效果。
[0003]因此对鳄鱼血的开发和应用将成为焦点和热点，同时也会产生巨大的经济效益和社会效益。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种鳄鱼血多肽粉的制备方法，其特征在于包含以下步骤:A:取鳄鱼血，匀浆使细胞破碎;B:将得到的匀浆液在模拟人体胃肠消化系统的酶解反应体系中酶解，所述模拟人体胃肠消化系统的酶解反应体系包括在合适的酶解条件下先后用胃蛋白酶、胰蛋白酶在混匀转速下进行水解;C:酶解后，热变性，离心取上清液，干燥，收集所得的鳄鱼血多肽粉。在一些实施方案中，所述鳄鱼血可以是新鲜采集后，保存在-80摄氏度待用。在进一步的实施方案中，所述酶解反应体系中的体系总质量:底物质量:酶质量=1000: (20?100): (5?0.1)。在另一些实施方案中，其中所述胃蛋白酶的酶解的时间可为I?5小时，且所述胰蛋白酶的酶解时间为I?5小时。在优选的实施方案中，所述合适的酶解条件可包括:对于胃蛋白酶，PH 2.0-3.0，温度37摄氏度;对于胰蛋白酶，pH 7.0-7.4，温度37摄氏度；混匀转速为50-300转/秒，优选100转/秒。在进一步的实施方案中，所述酶解反应体系中的PH调节可采用酸和碱调节，其中，所述酸优选为盐酸，所述碱优选为NaOH或Κ0Η。在更进一步的实施方案中，所述干燥的方式可为冷冻干燥或喷雾干燥。
[0005]本发明还提供了一种鳄鱼血多肽粉，所述鳄鱼血多肽粉由根据本发明所述的方法制备。
[0006]本发明还提供了根据本发明所述的鳄鱼血多肽粉在制备具有提高体质虚弱人群的机体免疫力，或提高运动机能和抵抗疲劳效果的食品、保健品以及药品中的用途。
[0007]本发明所述的酶解反应体系为模拟人体胃肠消化系统构建，具有对鳄鱼血大分子蛋白酶解彻底、可重复性好等优点。所得的鳄鱼血多肽粉是由混合酶解法制备的，分子量小，易消化吸收，生物活性较高。
[0008]本发明所述的鳄鱼血多肽粉具有可提高体质虚弱人群的机体免疫力，或提高运动机能和抵抗疲劳的效果。
[0009]本发明所涉及使用的原料及生产加工环境符合相关国家法规对食品、保健品或药品原料和生产环境的卫生要求。
【附图说明】
[0010]图1为小鼠力竭游泳时间。阴性对照组为以0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。低、中和高剂量组分别为将0.15g、0.3g和0.45g的本申请鳄鱼血多肽粉溶解于0.3mL0.5%羧甲基纤维素钠溶液，混合后灌胃。阳性对照组为0.3g红参粉与0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液混合后灌胃。
[0011]图2为小鼠血液中SOD活力水平，反映小鼠游泳后血清中SOD水平情况。阴性对照组为以0.3mL 0.5 %羧甲基纤维素钠溶液灌胃。低、中和高剂量组分别为将0.15g、0.3g和0.45g的本申请鳄鱼血多肽粉溶解于0.3 mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液，混合后灌胃。阳性对照组为0.3g红参粉与0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液混合后灌胃。
[0012]图3为小鼠血液中TG、GLU、BUN水平，反映小鼠力竭游泳后血清中TG、GLU和BUN水平情况。阴性对照组为以0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。低、中和高剂量组分别为将
0.15g、0.3g和0.45g的本申请鳄鱼血多肽粉溶解于0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液，混合后灌胃，阳性对照组为0.3g红参粉与0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液混合后灌胃。
[0013]图4为小鼠血液中LDH和CK水平，反映小鼠力竭游泳后LDH及CK的变化情况(**，与阴性对照组相比，P〈0.01;*，与阴性对照组相比，P〈0.05)。阴性对照组为以0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。低、中和高剂量组分别为将0.15g、0.3g和0.45g的本申请鳄鱼血多肽粉溶解于0.3mL 0.5 %羧甲基纤维素钠溶液，混合后灌胃。阳性对照组为0.3g红参粉与
0.3mL 0.5%羧甲基纤维素钠溶液混合后灌胃。
【具体实施方式】
[0014]下面将以实施例的方式对本申请作进一步的详细描述，以使本领域技术人员能够实践本申请。应当理解，可以采用其他实施方式，并且可以做出适当的改变而不偏离本申请的精神或范围。为了避免对于使本领域技术人员能够实践本申请来说不必要的细节，说明书可能省略了对于本领域技术人员来说已知的某些信息。因此，以下详细描述不应以限制性的意义来理解，且本发明的范围仅由所附权利要求界定。
[0015]以下的实施例便于更好地理解本申请，但并不用来限制本申请的范围。
[0016]下述实施例中所使用的各原料，除特别指出的以外，均可由市售获得。
[0017]下述实施例1-4中所使用的鳄鱼血是新鲜采集后在-80摄氏度冷冻保存待用的血液。
[0018]实施例1
[0019]I)取冷冻保存的鳄鱼血，室温下化冻。匀浆使细胞破碎，然后以匀浆液与磷酸盐缓冲液1:25的体积比加入pH 7的磷酸盐(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)缓冲液；
[0020]2)用浓盐酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)将第I)步所得的溶液的pH调节至2.0，加入质量分数1%。的胃蛋白酶(Pepsin 1:3000 from Porcine Stomach，生工生物)，37摄氏度水解5小时，水解过程中设定以混匀转速100转/秒进行混匀搅拌，之后用NaOH调节pH至7.0，加入质量分数1%。的胰蛋白酶(Trypsin 1:3000 from Porcine Stomach，生工生物)，37摄氏度水解5小时，水解过程中设定以混匀转速100转/秒进行混匀搅拌；
[0021]3)酶解后，90摄氏度热变性10分钟，7000转/秒离心10分钟以去除蛋白酶以及未酶解的大分子蛋白。取上清液，冷冻干燥后得到鳄鱼血多肽粉。将所得粉末配制为lmg/mL，用BCA蛋白检测试剂盒(Applygen，北京)测得鳄鱼血多肽浓度为925-973ug/mL。
[0022]实施例2
[0023]I)取冷冻保存的鳄鱼血，室温下化冻。匀浆使细胞破碎，然后以匀浆液与磷酸盐缓冲液1:50的体积比加入pH 7的磷酸盐(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)缓冲液；
[0024]2)用浓盐酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)将第I)步所得的溶液的pH调节至3.0，加入质量分数5%。的胃蛋白酶(Pepsin 1:3000 from Porcine Stomach，生工生物)，37摄氏度水解I小时，水解过程中设定以混匀转速300转/秒进行混匀搅拌，之后用NaOH调节pH至7.0，加入质量分数5%。的胰蛋白酶(Trypsin 1:3000 from Porcine Stomach，生工生物)，37摄氏度水解I小时，水解过程中设定以混匀转速300转/秒进行混匀搅拌；
[0025]3)酶解后，90摄氏度热变性10分钟，7000转/秒离心10分钟，取上清液，冷冻干燥得到鳄鱼血多肽粉。
[0026]实施例3
[0027]I)取冷冻保存的鳄鱼血，室温下化冻。匀浆使细胞破碎，然后以匀浆液与磷酸盐缓冲液1:20的体积比加入pH 7的磷酸盐(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)缓冲液；
[0028]2)用浓盐酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)将第I)步所得的溶液pH调节至2.5，加入质量分数3%。的胃蛋白酶(Pepsin 1:3000 from Porcine Stomach，生工生物)，37摄氏度水解3小时，水解过程中设定以混匀转速200转/秒进行混匀搅拌，之后用NaOH调节pH至7.0，加入质量分数3%。的胰蛋白酶(Trypsin 1: 3000 from Porcine Stomach，生工生物)，37摄氏度水解3小时，水解过程中设定以混匀转速200转/秒进行混匀搅拌；
[0029]3)酶解后，90摄氏度热变性10分钟，7000转/秒