高血压易感基因SCN7A单核苷酸多态性位点rs7565062的检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及人W型电压口控钢离子通道a 亚基基因 （sodium channel, voltage-gated, type VH , alpha subunit, SCN7A)的单核巧酸 多态性（single nucleotide polymo;rphism, SNP)位点rs7565062及其与原发性高血压相 关性的检测。本发明还涉及检测送个SNP位点的方法和试剂盒。
【背景技术】
[0002] 现有技术公开了原发性高血压（essential hypedension, EH)是一种多因素、多 基因疾病，由环境与遗传因素共同致病的常见而多发的必血管病症，对人类健康造成极大 的影响。随着分子医学的发展，目前已经发现的高血压相关基因已经有150余种，但是邸 的发病机制仍然不完全清楚，高血压的早期诊断和预防问题仍然未能完全解决。研究显示， 邸是遗传因子和环境共同作用的结果，血压的变化30% -60%归因于遗传，由于环境因素 是可W控制和确认的，而对高血压遗传学因素却是固定不变的，因此，对可变因素的控制， 如对高血压危险因素的预防，可W在一定程度上延缓和防止高血压的发病，但是对固定不 变的遗传因素的认识不足却在一定程度上严重影响着对高血压发病、诊断和治疗。因此对 高血压遗传学的研究十分必要（王佐广，温绍君，吴兆苏.高血压、易感基因与单核巧酸多 态性[J].高血压杂志，2001,9:259-264)。
[0003] 近二十余年来，有关高血压治疗的研究更多地集中在对血压的控制和对祀器官的 保护，并已取得突飞猛进的发展。但是，业内研究人员认为，送些手段并不能从根本上控制 血压，目前对人类内源性抗高血压基因的研究还很少，因此，研究内源性抗高血压机制是今 后高血压防治研究的主要方向之一，具有重要的研究价值和应用前景，业内研究人员认为， 通过调节内源性抗高血压机制治疗高血压病，将会促进我国生物医疗技术的发展，并为我 国每年节省巨大的医疗费用。
[0004] 已有研究证实钢盐的过多摄取在高血压的发生发展中发挥着重要作用。研究表 明有一种W前认为是电压口控的钢离子通道，目前被发现为钢离子浓度依赖型钢离子通 道，其能根据钢离子浓度的变化改变钢离子通道开放程度，在脑室周细胞中作为钢离子感 受器，参与中枢对钢盐摄入行为的控制，因此可能参与了原发性高血压的发生发展；而W 型电压口控钢离子通道基因（sodium channel, voltage-gated, type Vn, alpha subunit; SCN7A)编码该钢离子通道的重要功能结构一 a亚基，因此，有理由推断SCN7A基因作为血 压调节环节中的重要部分，其蛋白功能及结构的改变均可能参与了原发性高血压的发生发 展，基于W上研究基础，本申请在大样本人群的关联研究中证实该基因与原发性高血压密 切相关，认为在该基因rs7565062位点上携带A等位基因的人群患高血压的风险更高。
[0005] 综上所述，本申请的发明人拟提供新的原发性高血压易感基因，及其检测方法、试 剂盒，W及相关的治疗药物。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是为克服现有技术的不足，提供一种新的检测（包括早期诊断）高 血压易感基因的方法及检测试剂盒。具体涉及高血压易感基因 SCN7A单核巧酸多态性位点 rs7565062的检测试剂盒
[0007] 本发明提供了与高血压密切相关的SCN7A基因单核巧酸多态性位点 rs7565062(位于SCN7A的5'引导序列中，片段重叠群contig ;NT_005403. 18位置 71981560A/C)；
[0008] 并经实验证实，SCN7A基因单核巧酸多态性位点rs7565062位于SCN7A，5'引导序 列中（片段重叠群contig ;NT_005403. 18位置71981560A/C)基因型的改变将导致高血压 的发病风险升高，其中关联研究结果显示，在SCN7A基因 rs7565062A - C在病例和对照组 中的分布存在显著性差异（P<〇. 05)，该SNP多态性可改变转录因子结合位点。
[0009] 本发明涉及的SCN7A基因的详细序列可参见登录号为rs7565062的核巧酸序列 (可参见网址 ht1:p://www. ncbi. nlm. nih. gov/)。
[0010] 本发明人对SCN7A基因中的5'引导序列中（片段重叠群contig ;NT_005403. 18 位置71981560A/C)区域进行了测序。
[0011] 本发明涉及的SC7A基因 rs7565062位点的多态性可直接用于高血压的个性化治 疗；在使用本发明SCN7A基因 rs7565062位点的多态性时，还可同时使用其他治疗高血压的 药剂。
[0012] 本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效的本发明SCN7A蛋白W及药学 上可接受的载体或赋形剂。送类载体包括（但并不限于）：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、 己醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。
[0013] 本发明的药物组合物可W被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他 辅剂的水溶液通过常规方法进行制备；诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方 法进行制备。
[0014] 本发明的药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊在无菌条件下制造；活性成分的给 药量是治疗有效量，例如每天0.1微克/千克体重-约10毫克/千克体重；此外，本发明的 多肤还可与其他治疗剂一起使用。
[0015] 使用药物组合物时，是将安全有效量的SCN7A蛋白或其枯抗剂、激动剂施用于普 哺乳动物，其中该安全有效剂量通常至少约0. 1微克/千克体重，而且在大多数情况下不超 过约10毫克/千克体重，较佳地该剂量是约0.1微克/千克体重-约100毫克/千克体 重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，送些都是熟练医师技能范围 之内。
[0016] 本发明中还涉及检测SCN7A基因的rs7565062的基因型可用于诊断高血压。检测 可W针对基因组DNA，也可针对SCN7A基因的扩增片段。SCN7A基因的rs7565062的基因型 可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。
[0017] 在本发明中，提供了 SCN7A基因 rs7565062位点的基因型在检测对高血压易感性 制剂或方法中的用途，如提供了一种用于对个体的高血压易感性进行诊断的方法，它包括 步骤：
[0018] 检测该个体的SCN7A基因 rs7565062位点的基因型，W此判断该个体患高血压的 发病风险是否高于普通人群。
[0019] 在另一优选例中，所述的差异是选自下列的单核巧酸多态性：
[0020] RS7565062 位于 SCN7A，5,引导序列中（片段重叠群 contig ;NT_005403. 18 位置 71981560A/C)
[0021] 其中，脱氧核糖核酸值NA)序列编号；rs7565062位置基于沈Q ID NO ;1/6。
[0022] 在本发明的另一方面，提供了一种检测样品是否存在SCN7A基因的单核巧酸多态 性的方法，包括步骤：
[002引 （a)用SCN7A基因5'引导序列特异性引物扩增样品的基因组DNA，得到扩增产物； 和
[0024] 化）检测扩增产物中单核巧酸多态性位点rs7565062的基因型：
[00巧]RS7565062位于SCN7A，5,引导序列中（片段重叠群contig ;NT_005403. 18位置 71981560A/C)
[0026] 其中，脱氧核糖核酸值NA)序列编号；引物1基于SEQ ID NO ;2/6 ;引物2基于SEQ ID NO ; 3/6 ;探针1基于SEQ ID NO ;4/6 ;探针2基于SEQ ID NO ;5/6 ;扩增产物基于SEQ ID NO ; 6/6。
[0027] 在另一优选例中，所述的单核巧酸多态性是rs7565062位于SCN7A，5'引导序列中 (片段重叠群 contig ;NT_005403. 18 位置 7198156