尿素、荧光假单胞杆菌二级菌种的菌液按100:70:5:1.5:1.0的质量比混合均匀，堆成 长/宽/高分别为2-4m、1.3-1.5m、1.3-1.5m的形状，覆盖塑料薄膜，每7天翻堆1次，堆置28天 即可制备出固体菌剂。
[0029] 2.紫茎泽兰有机肥固体菌剂中所述纤维单胞菌的三级菌种的制备：
[0030] -级菌种菌液:配制固体培养基（取牛肉膏0.3克，粉碎过0.1毫米筛的滤纸粉末 1.0克，氯化钠0.5克，琼脂1.5克，水1000毫升，pH 7.0-7.2制备得到），约取5毫升置于体积 为20毫升试管中，在121°C、1.5个大气压，灭菌30min，摆放斜面，冷却后接种纤维单胞菌，45 °C暗培养4天。无菌水洗涤培养基表面的菌落，稀释至104个细菌/毫升备用；
[0031] 二级菌种菌液：配制液体培养基（取牛肉膏30克，粉碎过0.1毫米筛的滤纸粉末 1000克，氯化钠50克，水100升，pH 7.0-7.2制备得到），至于发酵罐中，在121°C、1.5个大气 压，灭菌30min，冷却后取500毫升一级菌种的菌液，在45°C，每min每升10毫升的通气量，每 min60转搅拌速率的条件下暗培养4天，活菌数达到109个/毫升以上；
[0032]三级固体菌种：取粒径0.3±0.2mm的小麦或玉米秸杆粉、水、尿素、纤维单胞菌二 级菌种的菌液按100:70:1.0:1.0的质量比混合均匀，堆成长/宽/高为1.2m-l. 5m、1.0m-1.5m、3m-4m的形状，覆盖塑料薄膜，每7天翻堆1次，堆置28天即可制备固体菌剂。
[0033] 3.紫茎泽兰有机肥固体菌剂的制备
[0034]按照荧光假单胞杆菌的三级菌种和纤维单胞菌的三级菌种的质量比为2:1混合制 备得到紫茎泽兰有机肥固体菌剂A;
[0035]按照荧光假单胞杆菌的三级菌种和纤维单胞菌的三级菌种的质量比为3:1混合制 备得到紫茎泽兰有机肥固体菌剂B;
[0036]按照荧光假单胞杆菌的三级菌种和纤维单胞菌的三级菌种的质量比为4:1混合制 备得到紫茎泽兰有机肥固体菌剂C。
[0037]实施例2紫茎泽兰有机肥的考察
[0038]在西南大学植物营养与微生物实验室，按照菌剂制备方法制备出处理菌剂，包装 运输至需要处理紫茎泽兰地方。
[0039] 紫茎泽兰处理在四川省凉山州西昌市西溪乡牛郎村进行(海拔1800m)。于2014年6 月收割紫茎泽兰分为三组;选择平坦的地块，将三组鲜品紫茎泽兰平行于地面整齐堆放，每 堆置30-50cm厚，分别撒紫茎泽兰有机肥固体菌剂A、B、C组、尿素及石膏，踩踏紧实，堆至高 度1-1.5!11，覆盖农用塑料薄膜，每堆1000-15001^;所述紫茎泽兰、紫茎泽兰有机肥固体菌 剂、尿素和石膏的质量比为250:1:1:1。堆放60天左右至紫茎泽兰均呈黑褐色，轻轻敲击成 碎肩或粉末状，完全腐熟成为有机肥，得到西昌紫茎泽兰有机肥A、B、C组。
[0040] 在四川省凉山州烟草公司技术中心，按照菌剂制备方法制备出发酵菌剂，包装运 输至需要处理紫茎泽兰地方。
[0041] 紫茎泽兰处理在四川省凉山州冕宁县回坪乡四村进行(海拔1900m)。于2015年7月 收割紫茎泽兰分为三组;选择平坦的地块，将三组鲜品紫茎泽兰平行于地面整齐堆放，每堆 置30-50cm厚，分别撒紫茎泽兰有机肥固体菌剂A、B、C组、尿素及石膏，踩踏紧实，堆至高度 1-1.5m，覆盖农用塑料薄膜，每堆1000-1500kg;所述紫茎泽兰、紫茎泽兰有机肥固体菌剂、 尿素和石膏的质量比为250:1:1:1。堆放60天左右至紫茎泽兰均呈黑褐色，轻轻敲击成碎肩 或粉末状，完全腐熟成为有机肥，得到冕宁紫茎泽兰有机肥A、B、C组。
[0042]根据全国有机肥料品质四要素分级标准和全国有机肥料品质总分分级标准对上 述六组紫茎泽兰有机肥进行有机肥品质评价(参考:全国农业技术推广服务中心.中国有机 肥料资源[M].北京：中国农业出版社，1999:40-41，43.)。具体如表1所示。
[0043]表1紫茎泽兰有机肥中大元素含量
[0044]
[0045] 各组紫茎泽兰有机肥含有丰富的氮、磷、钾等大量元素。根据中国有机肥料品质总 分分级标准，各组均超过符合二级有机肥的标准。
[0046] 其中紫茎泽兰有机肥固体菌剂B组其三大元素含量在有机肥料品质四要素分级中 得分分别为32分、12分和20分，粗有机物得分按绿肥类粗有机物平均含量98.12%计算得25 分，总分为89分，符合一级有机肥的标准。
【主权项】
1. 一种紫茎泽兰有机肥固体菌剂，其特征在于:所述紫茎泽兰有机肥固体菌剂由荧光 假单胞杆菌的三级菌种和纤维单胞菌的三级菌种混合制成。2. 根据权利要求1所述的紫茎泽兰有机肥固体菌剂，其特征在于:所述荧光假单胞杆菌 的三级菌种的制备方法为： 一级菌种菌液:配制固体培养基，约取5毫升置于体积为20毫升的试管中，在121°C、1.5 个大气压，灭菌30min，摆放斜面，冷却后接种荧光假单胞杆菌，35 °C暗培养4天； 无菌水洗涤培养基表面的菌落，稀释至104个细菌/毫升备用； 二级菌种菌液:配制液体培养基，至于发酵罐中，在121°C、1.5个大气压，灭菌30min，冷 却后接入500毫升一级菌种的菌液;在35°C，每min每升10毫升的通气量，每min60转搅拌速 率的条件下暗培养4天，活菌数超过109个/毫升； 三级固体菌种：取粒径〇 . 3±0.2mm的谷糠粉、水、风干的粒径0.3±0.2mm紫莖泽兰粉 末、尿素、荧光假单胞杆菌二级菌种的菌液按100 :70 :5:1.5:1.0的质量比混合均匀，堆成 长/宽/高分别为2-4m、1.3-1.5m、1.3-1.5m的形状，覆盖塑料薄膜，每7天翻堆1次，堆置28 天即可制备出固体菌剂。3. 根据权利要求2所述的紫茎泽兰有机肥固体菌剂，其特征在于:所述一级菌种的固体 培养基的配方为:取牛肉膏〇. 3克，玉米淀粉1.0克，风干磨细过0.1毫米筛的紫茎泽兰粉末 2.0克，氯化钠0.5克，琼脂1.5克，水1000毫升，pH值7.0-7.2制备得到； 所述二级菌种的固体培养基的配方为:取牛肉膏30克，葡萄糖100克，200克风干磨细过 〇. 1毫米筛的紫茎泽兰粉末，氯化钠50克，水100升，pH 7.0-7.2。4. 根据权利要求1所述的紫茎泽兰有机肥固体菌剂，其特征在于:所述纤维单胞菌的三 级菌种的制备方法为： 一级菌种菌液:配制固体培养基，约取5毫升置于体积为20毫升试管中，在121°C、1.5 个大气压，灭菌30min，摆放斜面，冷却后接种纤维单胞菌，45°C暗培养4天； 无菌水洗涤培养基表面的菌落，稀释至104个细菌/毫升备用； 二级菌种菌液:配制液体培养基，至于发酵罐中，在121°C、1.5个大气压，灭菌30min，冷 却后取500毫升一级菌种的菌液，在45 °C，每min每升10毫升的通气量，每min60转搅拌速率 的条件下暗培养4天，活菌数达到109个/毫升以上； 三级固体菌种：取粒径0.3 ± 0.2mm的小麦或玉米秸杆粉、水、尿素、纤维单胞菌二级菌 种的菌液按100:70:1.0:1.0的质量比混合均匀，堆成长/宽/高为1.2m-l. 5m、1. Om-1.5m、 3m-4m的形状，覆盖塑料薄膜，每7天翻堆1次，堆置28天即可制备固体菌剂。5. 根据权利要求4所述的紫茎泽兰有机肥固体菌剂，其特征在于:所述一级菌种的固体 培养基的制备方法为:取牛肉膏〇. 3克，粉碎过0.1毫米筛的滤纸粉末1.0克，氯化钠0.5克， 琼脂1.5克，水1000毫升，pH 7.0-7.2制备得到； 所述二级菌种的固体培养基的制备方法为:取牛肉膏30克，粉碎过0.1毫米筛的滤纸粉 末1000克，氯化钠50克，水100升，pH 7.0-7.2制备得到。6. 根据权利要求1所述的紫茎泽兰有机肥固体菌剂，其特征在于:所述荧光假单胞杆菌 的三级菌种和纤维单胞菌的三级菌种的质量比为3:1。7. 根据权利要求1-6任一项所述的紫茎泽兰有机肥固体菌剂在制备紫茎泽兰有机肥中 的应用。8. 紫茎泽兰有机肥的制备方法，其特征在于:包括以下步骤： 1) 在紫茎泽兰生物量最大的时期，收割植物体； 2) 选择平坦的地块，将鲜品紫茎泽兰平行于地面整齐堆放，每堆置30-50cm厚，分别撒 紫茎泽兰有机肥固体菌剂、尿素及石膏，踩踏紧实，堆至高度1-1.5m，覆盖农用塑料薄膜，每 堆1000-1500kg;堆放60-90天至紫茎泽兰均呈黑褐色，轻轻敲击成碎肩或粉末状得到紫茎 泽兰有机肥。9. 根据权利要求8所述的紫茎泽兰有机肥的制备方法，其特征在于:所述紫茎泽兰、紫 茎泽兰有机肥固体菌剂、尿素和石膏的质量比为250:1:1:1。
【专利摘要】本发明提供了一种紫茎泽兰有机肥固体菌剂，所述紫茎泽兰有机肥固体菌剂由荧光假单胞杆菌的三级菌种和纤维单胞菌的三级菌种混合制成。本发明野外就地直接处理紫茎泽兰整体植株，经济适用，成本低廉，操作简单，节省劳力，适应范围广，容易普及；为解决紫茎泽兰灾害问题提供了新的思路。
【IPC分类】C12R1/01, C05F17/00, C12N1/20, C05G3/00, C12R1/39
【公开号】CN105624062
【申请号】CN201610051346
【发明人】袁玲, 黄建国, 杜如万, 徐明康, 吴叶宽, 王勇, 杨水平
【申请人】西南大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年1月26日