酿酒酵母环形染色体的构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及合成生物学领域，特别涉及酿酒酵母环形染色体的构建方法。
【背景技术】
[0002] 染色体DNA序列携带着生物的遗传信息，而染色体空间结构是除了 DNA序列外又一 个影响生物遗传的重要因素。绝大多数真核生物的染色体呈线性结构，存在着两个端粒;而 原核生物染色体则基本为环形。相关研究发现，诸如癫痫、智力发育缓慢、白血病、头小畸形 等遗传疾病与真核生物染色体排列错乱或染色体环化有关。相关学者针对上述环形染色体 相关疾病提出了治疗模型，但是由于人类环形染色体遗传的复杂性和基因的多效性，简化 的治疗模型的提出将有助于环形染色体遗传疾病治疗的研究。
[0003] 酿酒酵母中的存在大量与人类基因具有同源性的基因，因此广泛用于人类疾病的 研究当中。对携带环形染色体的酿酒酵母的相关研究，有可能为人类环形染色体遗传疾病 的研究和治疗提供重要研究经验。构建酵母环形染色体的传统方法是通过对染色体的端粒 酶基因进行调控来诱导染色体进行环化，环化位置不可精确控制；或者是利用染色体自身 序列的相似性来诱导染色体自发进行环化，环化位置单一。因此，提供精确操控的环化酿酒 酵母染色体的方法具有应用价值和意义。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明提供了酿酒酵母环形染色体的构建方法。酿酒酵母环形染色体 的构建方法，为环形染色体疾病的研究提供了一种新的模型。
[0005] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0006] 本发明提供了酿酒酵母环形染色体的构建方法，删除所述酿酒酵母染色体端粒区 域，利用酿酒酵母自身同源重组的特性，构建酿酒酵母环形染色体。
[0007] 在本发明的一些具体实施方案中，酿酒酵母环形染色体的构建方法中所述酿酒酵 母染色体为V号染色体。
[0008] 在本发明的一些具体实施方案中，酿酒酵母环形染色体的构建方法中环化位点为 左端距离染色体左臂端点689bp，右端距离染色体右臂端点738bp。
[0009] 在本发明的一些具体实施方案中，酿酒酵母环形染色体的构建方法中环化位点为 左端距离染色体左臂端点25896bp，右端距离染色体右臂端点25696bp。
[0010] 本发明还提供了所述的构建方法获得的含有酿酒酵母环形染色体的菌株。
[0011] 此外，本发明还提供了含有酿酒酵母环形染色体的菌株，通过删除所述酿酒酵母 染色体端粒区域，利用酿酒酵母自身同源重组的特性，构建酿酒酵母环形染色体。
[0012] 在本发明的一些具体实施方案中，构建得到的含有酿酒酵母环形染色体的菌株 中，所述酿酒酵母染色体为V号染色体。
[0013] 在本发明的一些具体实施方案中，构建得到的含有酿酒酵母环形染色体的菌株 中，环化位点为左端距离染色体左臂端点689bp，右端距离染色体右臂端点738bp。
[0014] 在本发明的一些具体实施方案中，构建得到的含有酿酒酵母环形染色体的菌株 中，环化位点为左端距离染色体左臂端点25896bp，右端距离染色体右臂端点25696bp。
[0015] 本发明还提供了所述的菌株作为环形染色体疾病的研究模型中的应用。
[0016] 本发明利用酿酒酵母同源重组的特性，通过删除酿酒酵母染色体的端粒区来实现 染色体的环化，从而获得环形染色体1'；[11〖￥_8和1'；[11〖￥_13。
[0017] 本发明对比已有成果具有以下有益效果：
[0018] 1.利用同源重组的方法实现对酿酒酵母染色体的人工环化。
[0019] 2.环化位点可自由选择。
[0020] 3.为环形染色体疾病的研究提供了一种新的模型。
【附图说明】
[0021] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0022] 图1示本发明的构建酿酒酵母环形V号染色体的示意图；根据酿酒酵母V号染色体 具体序列信息，利用酿酒酵母同源重组特性删除染色体的端粒区域将其进行环化获得环形 V号染色体，获得两个菌株:r ;[11〖￥_8和1· ingV_b;
[0023] 图2示本发明中实施例一对环形V号染色体ringVJ^^PCR验证琼脂糖凝胶电泳图； 在进行染色体环化所选择同源臂外侧设计引物进行PCR验证，如果确认是环形染色体的话 可以获得PCR产物，如果不是环形染色体的话则不能获得PCR产物;琼脂糖凝胶电泳验证PCR 结果，环形染色体r ingV_b#在条带，对照组BY4741，证明确实为环形染色体；
[0024]图3示本发明中实施例一对环形V号染色体验证琼脂糖凝胶电泳图； 在进行染色体环化所选择同源臂外侧设计引物进行PCR验证，如果确认是环形染色体的话 可以获得PCR产物，如果不是环形染色体的话则不能获得PCR产物;琼脂糖凝胶电泳验证PCR 结果，环形染色体ringV_s#在条带，对照组BY4741，证明确实为环形染色体。
【具体实施方式】
[0025] 本发明公开了酿酒酵母环形染色体的构建方法，本领域技术人员可以借鉴本文内 容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员 来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施 例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和 应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0026] 本发明的目的是通过下属技术方案实现的。
[0027] 1.酿酒酵母环形染色体的构建技术，
[0028] a)通过删除酿酒酵母染色体端粒区域得到环形染色体；
[0029] b)利用酿酒酵母自身同源重组的特性实现染色体的环化。
[0030] 2.基于权利1所述的酿酒酵母环形染色体的构建技术，酿酒酵母环形染色体是基 于酿酒酵母染色体进行构建。
[0031] 本发明利用酿酒酵母同源重组的特性，通过删除酿酒酵母染色体的端粒区来实现 染色体的环化，从而获得环形染色体1'；[11〖￥_8和1'；[11〖￥_13。
[0032] 本发明对比已有成果具有以下创新点：
[0033] 1.利用同源重组的方法实现对酿酒酵母染色体的人工环化。
[0034] 2.环化位点可自由选择。
[0035] 3.为环形染色体疾病的研究提供了一种新的模型。
[0036] 本发明提供的酿酒酵母环形染色体的构建方法中所用菌株及原料均可由市场购 得。
[0037] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0038] 实施例1
[0039] 酿酒酵母环形V号染色体ringV_b的构建是通过环化酿酒酵母V号染色体实