测定乳制品中非乳酸菌含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品领域。具体地，本发明涉及测定乳制品中非乳酸菌含量的方法。更 具体地，本发明涉及用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基及测定乳制品中非乳酸菌含 量的方法。
【背景技术】
[0002] 目前，添加益生菌的产品越来越多，不仅需要对产品中乳酸菌活菌数进行检测，还 需要对非乳酸菌进行检测，以符合限量标准的规定。
[0003] 然而，目前测定乳制品中非乳酸菌含量的方法仍有待改进。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提供用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基及测定乳制品中非乳酸菌含量的方法。 利用根据本发明实施例的用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基及测定乳制品中非乳 酸菌含量的方法能够准确地测定乳制品中非乳酸菌含量。
[0005] 需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
[0006] 目前，没有一个明确的标准的非乳酸菌检测方法。文献《非乳酸菌污染菌菌落计数 方法》中，所需的培养基成分不全，无法满足微生物的生长繁殖，进而导致检测结果的准确 性较低。
[0007] 发明人经过大量实验得到了最优培养基配方，样品经稀释后在该培养基上培养， 并对得到的菌落进行计数，从而确定乳制品中非乳酸菌含量。由此，根据本发明实施例的用 于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基及测定乳制品中非乳酸菌含量的方法能够准确地 测定乳制品中非乳酸菌含量。
[0008] 为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种用于测定乳制品中非乳酸菌含量 的培养基。根据本发明的实施例，所述培养基包括:5. Og/l的胰蛋白胨;2.5g/l的酵母浸粉 或酵母浸膏；1. 〇g/L的葡萄糖；15 . Og/L的琼脂；以及余量的水，所述琼脂培养基的pH值为 6.8~7.2。发明人经过大量实验得到最优培养基成分，非乳酸菌能够在此条件下生长繁殖， 而乳酸菌无法生长，从而能够通过计数培养所得到的菌落数以确定非乳酸菌含量。由此，根 据本发明实施例的用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基能够准确地测定乳制品中非 乳酸菌含量。
[0009] 在本发明的第二方面，本发明提出了一种测定乳制品中非乳酸菌含量的方法。根 据本发明的实施例，所述方法包括：（1)将乳制品与缓冲液或生理盐水进行混合，得到样品 匀液；（2)将样品匀液进行梯度稀释，得到稀释液；（3)将所述稀释液涂布于前面所描述的所 述培养基上，进行培养；以及(4)基于所述培养的结果，确定所述乳制品中非乳酸菌含量。将 涂有稀释液的培养皿进行培养培养，乳酸菌无法生长，得到的菌落均为非乳酸菌。由此，根 据本发明实施例的测定乳制品中非乳酸菌含量的方法能够准确地测定乳制品中非乳酸菌 含量。
[0010] 根据本发明的实施例，针对固体或半固体乳制品，步骤（1)包括:将所述乳制品与 缓冲液或生理盐水置于均质袋中均质混合1~2分钟，得到所述样品匀液，其中，所述乳制品 与缓冲液或生理盐水的体积比为1:10。由此，根据本发明实施例的测定乳制品中非乳酸菌 含量的方法能够准确地测定乳制品中非乳酸菌含量。
[0011] 根据本发明的实施例，所述方法包括:将乳制品与缓冲液或生理盐水进行混合，得 到样品匀液;将所述样品匀液进行第一稀释，得到第一稀释液，再将所述第一稀释液进行第 二稀释，得到第二稀释液;所述第一稀释液和第二稀释液均设至少两组平行处理和1个空白 对照，其中空白对照取〇. lmL空白稀释液涂布于含有所述培养基的培养皿上，平行处理均取 0. 1mL所述稀释液涂布于含有所述培养基的培养皿上，并将培养皿置于29~31摄氏度下培 养70~74小时，计数培养皿上的菌落数;按照公式Ν= Σ(：/(ηι+0.1 n2)d计算得到所述乳制品 中非乳酸菌含量，其中，N为所述乳制品中非乳酸菌数；Σ(：为所述培养皿上菌落数之和;m 为涂布有所述第一稀释液的培养皿个数;Π 2为涂布有所述第二稀释液的培养皿个数;d为所 述第一稀释液相对于所述乳制品的稀释度。由此，根据本发明实施例的测定乳制品中非乳 酸菌含量的方法能够准确地测定乳制品中非乳酸菌含量。
[0012] 在本发明的第三方面，本发明提出了一种测定乳制品中非乳酸菌含量的方法。根 据本发明的实施例，所述方法包括：以无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL生理盐水的容 器中，混匀，制成1:10的样品匀液;将所述样品匀液进行梯度稀释，得到2~3个不同浓度的 稀释液;针对每种稀释液，均设至少两个平行处理和1个空白对照，其中空白对照采用〇. lmL 空白稀释液进行平板培养基涂布，平行处理均取〇. lmL所述稀释液涂布于平板培养基上;将 涂有稀释液的平板培养基置于29~31摄氏度下培养70~74小时，计数平板培养基上的所有 菌落数，并基于计数结果确定乳制品中非乳酸菌含量，所述平板培养基是通过下列步骤获 得的：将5.0g胰蛋白胨、2.5g酵母浸膏、l.Og葡萄糖及15.0g琼脂混合，并用蒸馏水定容至 10001^，煮沸溶解，调节?田直至7.0±0.2，121°(：高压灭菌151^11，无菌条件下趁热倒入平皿 中，每个平皿倒入10~15mL，冷却凝固。由此，根据本发明实施例的测定乳制品中非乳酸菌 含量的方法能够准确地测定乳制品中非乳酸菌含量。
[0013] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0014] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。
[0015] 本发明提出了用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基及测定乳制品中非乳酸 菌含量的方法，下面将分别对其进行详细描述。
[0016] 用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基
[0017] 在本发明的第一方面，本发明提出了用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基。 根据本发明的实施例，该培养基包括:5. Og/L的胰蛋白胨;2.5g/L的酵母浸粉或酵母浸膏； 1. 〇g/L的葡萄糖；15.0g/L的琼脂；以及余量的水，琼脂培养基的pH值为6.8~7.2。胰蛋白 胨、酵母浸粉或酵母浸膏的添加能够为非乳酸菌提供碳源、氮源和生长因子。发明人意外地 发现，若只添加蛋白胨、酵母浸粉或酵母浸膏，不能满足非乳酸菌的生长繁殖，即部分非乳 酸菌未生长或形成的菌落过小，不满足计数要求，导致检测结果偏低。经过深入研究发现， 通过向培养基中添加葡萄糖，以补充碳源，能够促使非乳酸菌生长繁殖，形成大小适宜的菌 落，从而保证检测结果的准确性。进一步地，通过优化得到各成分的添加比例及培养基的pH 值，在此最优条件下能够保证非乳酸菌正常生长繁殖，并在培养基上形成大小适宜的菌落， 得到的检测结果的准确性较高，稳定性好。若pH值过低，容易使乳酸菌生长繁殖，从而导致 检测结果偏高。由此，根据本发明实施例的用于测定乳制品中非乳酸菌含量的培养基能够 准确地测定乳制品中非乳酸菌含量。
[0018] 测定乳制品中非乳酸菌含量的方法
[0019] 在本发明的第二方面，本发明提出了一种测定乳制品中非乳酸菌含量的方法。根 据本发明的实施例，该方法包括：（1)将乳制品与缓冲液或生理盐水进行混合，得到样品匀 液；（2)将样品匀液进行梯度稀释，得到稀释液；（3)将稀释液涂布于前面所描述的培养基 上，进行培养；以及(4)基于培养的结果，确定乳制品中非乳酸菌含量。将乳制品与缓冲液或 生理盐水进行混合及稀释，并将得到的稀释液涂布于前面所描述的培养基上，能够使非乳 酸菌正常生长繁殖，并在培养基上长出大小适宜的菌落，通过计数菌落数，确定乳制品中非 乳酸菌含量。由此，根据本发明实施例的测定乳制品中非乳酸菌含量的方法能够准确地测 定乳制品中非乳酸菌含量。