灰树花多糖的提取工艺及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及了灰树花多糖的提取工艺及其应用。
【背景技术】
[0002] 胃黏膜具有防止胃液自身消化与各种损伤因子的刺激，保护胃黏膜细胞的生理功 能的组织结构，该屏障的完整性是胃黏膜得W保护的重要基础。胃黏膜常因化学因素（喝 酒、浓茶、咖啡、吸烟及刺激性药品如阿司匹林、消炎痛等）、物理因素(过冷、过烫、过于粗糖 的食物或暴饮暴食）、细菌或其毒素刺激的原因造成损伤。临床多表现为胃腕部疼痛不适、 饱胀、暧气、反酸、胃烧灼感、恶屯、、呕吐等一系列症状。胃镜检查多出现不同程度的胃黏膜 改变，如粘膜水肿、糜烂、渗出、充血、或由浅表溃瘍，并有可能有出血或渗血等。胃黏膜损伤 在临床上十分常见，是引发多数胃病的主要原因，目前尚无有效的防治手段。
[0003] 灰树花Grifola f;rondosa(Dicks. )Gray隶属真菌界，担子菌口，伞菌纲，多孔菌 目，盖孔菌科，又名贝叶多孔菌，是一种食、药兼用葦菌。大量的药理研究证明，灰树花多糖 (GFP)具有显著的抗肿瘤、降血糖、降血脂、抑制B型肝炎DNA复制、抗HIV病毒、抗氧化W及改 善免疫系统功能等功效，但暂未有其在修复胃粘膜创伤方面应用的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了灰树花多糖的提取工艺及其 应用。
[0005] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：
[0006] -种灰树花多糖的提取工艺，取灰树花子实体干品，粉碎后过10目筛，加入8~12 倍量水微沸提取1~化;过滤，滤渣用5~10倍量的1~3 %的化0田容液进行浸提1~化;过滤， 滤液浓缩至化ix含15%，离屯、，上清液先后累入Ξ个截留分子量依次减小的超滤分离组件， 上一个超滤分离组件的滤出液继续累入下一个超滤分离组件，分别收集每个超滤分离组件 的截留液和最终的滤出液，得到分子量〉100kDa的第一截留液、30W)a<分子量<100kDa的第 二截留液、5kDa<分子量<30kDa的第Ξ截留液和分子量巧kDa的滤出液;上述第一截留液、第 二截留液、第Ξ截留液和滤出液分别按照1:2~4的体积比加入95%的乙醇进行醇沉2~化， 过滤，滤渣复溶于水，离屯、，收集上清液，分别制得第一碱提物，为分子量〉lOOkDa、多糖含量 28~34%的灰树花多糖，第二碱提物，为30kDa<分子量<100kDa、多糖含量23~27%的灰树 花多糖，第Ξ碱提物，为化Da<分子量<301d)a、多糖含量20~26%的灰树花多糖，第四碱提 物，为分子量巧kDa、多糖含量9~13%的灰树花多糖。
[0007] -实施例中：所述超滤膜经W下步骤清洗后再行超滤:去离子水清洗^化0H回流 清洗^去离子水清洗^HCl清洗^去离子水清洗至超滤膜干净。
[000引一实施例中:所述超滤步骤中，通过透过液的折光率变化判断超滤进度。
[0009] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：
[0010] 灰树花多糖在制备修复人胃粘膜创伤的药物上的用途。
[0011] -实施例中：所述灰树花多糖为多糖含量9~34 %的灰树花多糖，该多糖含量9~ 34%的灰树花多糖的临床上可接受的盐、临床上可接受的制剂;含有该多糖含量9~34%的 灰树花多糖的复方药物组合物，该复方药物组合物的临床上可接受的盐、临床上可接受的 制剂;所述多糖含量9~34%的灰树花多糖例如为多糖含量28~34%的灰树花多糖，多糖含 量23~27 %的灰树花多糖，多糖含量20~26 %的灰树花多糖，多糖含量9~13 %的灰树花多 糖，最好是多糖含量31 %的灰树花多糖，多糖含量25%的灰树花多糖，多糖含量23%的灰树 花多糖，多糖含量11 %的灰树花多糖。
[0012] -实施例中：所述灰树花多糖为根据技术方案之一的提取工艺得到的第一碱提物 和/或第二碱提物和/或第Ξ碱提物和/或第四碱提物，或该第一碱提物和/或第二碱提物 和/或第Ξ碱提物和/或第四碱提物的临床上可接受的盐、临床上可接受的制剂，或含有该 第一碱提物和/或第二碱提物和/或第Ξ碱提物和/或第四碱提物的复方药物组合物，或该 复方药物组合物的临床上可接受的盐、临床上可接受的制剂。
[0013] -实施例中：所述修复人胃粘膜创伤是指促进人胃粘膜上皮细胞增殖和/或促进 人胃粘膜上皮细胞向胃粘膜创伤区域迁移。
[0014] -实施例中：所述修复人胃粘膜创伤是指调节人胃粘膜上皮细胞中的攻击因子和 防御因子的表达水平平衡。
[0015] -实施例中：所述促进人胃粘膜上皮细胞增殖和/或促进人胃粘膜上皮细胞向胃 粘膜创伤区域迁移是指上调人胃粘膜上皮细胞的表皮生长因子EGF表达，和/或上调人胃粘 膜上皮细胞的Ξ叶因子2TFF2表达，和/或下调人胃粘膜上皮细胞的转移生长因子TGF-βι表 达。
[0016] -实施例中：其特征在于:还包括预防和/或治疗慢性胃炎。
[0017] 本发明所指的临床上可接受的盐意指能保留药物本身性质和生物学有效性的盐， 包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐;所述无机酸例如盐酸、氨漠酸、硝酸、憐酸、硫酸、 高氯酸等;所述有机酸例如乙酸、抗坏血酸、Ξ氣乙酸、丙酸、径乙酸、（D)或化)乳酸、（D)或 (L)苹果酸、草酸、富马酸、马来酸、甲横酸、乙横酸、苯甲酸、对甲苯横酸、水杨酸、肉桂酸、扁 桃酸、酒石酸、巧樣酸、班巧酸、径乙横酸和丙二酸等。
[0018] 本发明所指的临床上可接受的制剂，包括但不限于片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、 丸剂、散剂、滴丸剂、注射剂等。
[0019] 本发明所设及的仪器、试剂等，除有特别说明外，均可从市面上购得;本发明所设 及的各实验方法，除有特别说明外，均为本领域常规技术。
[0020] 本技术方案与【背景技术】相比，它具有如下优点：
[0021] 1.本发明采用的水提^碱提^超滤^醇沉的方式能够有效避免灰树花多糖在提 取过程中的水解损失，还能有效去除杂质，提高提取效率。
[0022] 2.本发明的结果表明，灰树花多糖可W调节人胃粘膜上皮细胞中重要的防御性细 胞因子TFF2、EGF、TGF-βι的表达水平，通过上调TFF2的mRNA和蛋白表达水平、EGF的蛋白表 达水平，下调TGF-βι的mRNA和蛋白表达水平等方面，促进人胃粘膜上皮细胞增殖和向胃粘 膜创伤区域迁移，从而达到促进人胃粘膜愈合修复的目的。本发明提供了灰树花多糖在制 备修复胃粘膜创伤的药物上的用途，为灰树花开发利用及防治胃病难题提供了依据。
【附图说明】
[0023] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
[0024] 图1为实施例2中不同溶度GFP作用下GES-1增殖率的变化(y±s,n = 6)，与对照组比 较冲 <0.05，*冲 <0.01。
[0025] 图2为实施例2中不同溶度GFP作用下GES-1细胞形态及数量变化（100X)，A:对照 组24h;B:0.4mg/mL GPF作用24h;C:0.08mg/mL GPF作用24h;D:对照组4她;E:0.4mg/mL GPF 作用4她;F: 0.08mg/mL GPF作用4她;G:对照组72h; Η: 0.4mg/mL GPF作用72h; 1:0.08mg/mL GPF作用72h; J:对照组96h; Κ: 0.4mg/mL GPF作用96h; L 0.08mg/mL GPF作用96h。
[0026] 图3为实施例3中不同溶度GFP作用下GES-1的愈合率变化（X±s，n = 6),与对照组比 较冲 <0.05，*冲 <0.01。
[0027] 图4为实施例3中GPF作用下的胃粘膜创伤修复情况（100 X ) eA:对照组化;B: 2mg/ mL GPF作用0h;C:0.08mg/血 GPF作用0h;D:对照组化；E:2mg/血 GPF作用化;F:0.08mg/mL GPF作用6h; G:对照组12h; Η: 2