一种降解环孢菌素a的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种重要医药中间体环抱菌素 A的新颖、快速、高效的降解方法。
【背景技术】
[0002] 环抱菌素 A (切closporine A)化学结构如下：
环抱菌素 A (切closporine A)是一种由真菌产生的大分子天然产物，于1976年首次 分离纯化得到，并于1984年首次报道化学全合成。它是由11个氨基酸组成的环状多肤，其 中包括7个氮甲基肤键。其结构最大的特点是含有亲环蛋白（切P A)结合区域和巧调磯酸 酶（CN)结合区域，因此在抗炎、抗病毒和免疫抑制方面有广泛的应用前景。对其结构的修 饰改造已成为近年来的热点，尤其在抗病毒领域。不同于一般的抗病毒药物的作用机制， 环抱菌素 A衍生物作用于宿主自身的亲环蛋白，而亲环蛋白（cyclo地ilin)送一类酶的功 能是辅助细胞内其他蛋白的折叠和转运，包括病毒复制所需蛋白的折叠和转运，因而病毒 对此类药物不容易产生抗药性，送一特性与作用于直接病毒的药物相比是一大优势。经结 构改造后具有抗艾滋病病毒（HIV)、己型肝炎病毒（皿V)、丙型肝炎病毒（HCV)、甲型流感病 毒、急性呼吸道综合冠状病毒或牛痘病毒等活性的环抱菌素衍生物已有大量报道。
[0003] 除部分文献仅涉及对其支链的修饰外，大部分的改造工作都是将其开环后通过埃 德曼降解（E血an degradation)得到相应的多肤残基，再通过缩合反应连接不同的氨基酸 或小分子肤链，最后关环形成环抱菌素 A的结构类似物。
[0004] 现有文献报道中的埃德曼降解都是末端氨基与异硫氯酸苯醋反应形成硫代甲醜 胺衍生物，然后于酸性条件下降解得到脱去一个N端氨基酸的多肤，送对于含有酸敏感基 团的分子不适用。且该方法每降解一个氨基酸均需要两步反应，如需降解四个氨基酸，则需 八步反应，总收率会大大降低。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种在碱性条件下、用两步反应高效降解两个N-端氨基 酸的环抱菌素 A降解的新方法。主要解决现有的酸性条件下降解环抱菌素存在的反应步骤 多、收率低W及不适用于含有酸敏感基团化合物等技术问题。
[0006] 本发明的技术方案；一种降解环抱菌素 A的方法，包括W下步骤： 第一步反应，W环抱菌素 A为原料，与醋酸酢反应得到己醜基保护的环抱菌素 A ; 第二步反应，己醜基保护的环抱菌素 A在H甲基氧鐵四氣测酸盐的作用下在第H肤键 处发生开环反应，生成链状的十一肤； 第H步反应，链状十一肤的游离氨基先与异硫氯酸苯醋反应后，在碱性条件下降解一 个N-端氨基酸得到十肤，再与过量的异硫氯酸苯醋反应生成十肤的苯胺硫代甲醜胺衍生 物； 第四步反应，在酸性条件下，十肤的苯胺硫代甲醜胺衍生物发生降解生成九肤； 第五步反应，九肤的游离氨基先与异硫氯酸苯醋反应后，在碱性条件下降解一个N-端 氨基酸得到八肤，再与过量的异硫氯酸苯醋反应生成八肤的苯胺硫代甲醜胺衍生物； 第六步反应，在酸性条件下，八肤的苯胺硫代甲醜胺衍生物发生降解生成走肤。
[0007] 化学反应式如下：
第一步反应在溶剂中进行，溶剂为醋酸酢；加4-二甲氨基化巧值M巧作催化剂，4-二 甲氨基化巧的摩尔量为0. 1-1. 0当量；反应温度为〇-8(TC ;反应时间为3-18小时。
[0008] 第二步反应在溶剂中进行，溶剂为无水二氯甲焼；加 H甲基氧鐵四氣测酸盐作开 环试剂；H甲基氧鐵四氣测酸盐的摩尔量为1. 0-3. 0当量；反应温度为0-4(TC;反应时间为 6-72小时。
[0009] 第H步反应在溶剂中进行，溶剂为无水四氨巧喃、无水二氧六环或无水甲苯中的 一种；异硫氯酸苯醋的摩尔量为2. 0-3. 0当量；碱用H己胺、二异丙基己胺或1，8-二氮杂 环[5, 4, 0] ^^一帰-7 (DBU)中的一种，碱的摩尔量为3. 0-5. 0当量；并加入4-二甲氨基化 巧为催化剂，4-二甲氨基化巧的摩尔量为0.1-1.0当量；反应温度为O-Iicrc ;反应时间为 3-18小时。
[0010] 第四步反应在溶剂中进行，溶剂为无水二氯甲焼或无水四氨巧喃中的一种；酸用 H氣己酸或盐酸中的一种；反应温度为0-4(TC ;反应时间为2-5小时。
[0011] 第五步反应在溶剂中进行，溶剂为无水四氨巧喃、无水二氧六环或无水甲苯中的 一种；异硫氯酸苯醋的摩尔量为2. 0-3. 0当量；碱用H己胺、二异丙基己胺或1，8-二氮杂 环拉4,0] ^^一帰-7 (DBU)中的一种，碱的摩尔量为3.0-5. 0当量；并加入4-二甲氨基化 巧为催化剂，4-二甲氨基化巧的摩尔量为0.1-1.0当量；反应温度为O-Iicrc ;反应时间为 3-18小时。
[0012] 第六步反应在溶剂中进行，溶剂为无水二氯甲焼或无水四氨巧喃中的一种；酸用 H氣己酸或盐酸中的一种；反应温度为0-4(TC ;反应时间为2-5小时。
[0013] 本发明的有益效果是；本发明提供了一种环抱菌素 A开环后在碱性条件下进行埃 德曼降解（E血an degradation)的新方法和用两步反应高效降解两个N-端氨基酸的新合 成工艺。本发明中的新合成工艺仅用四步反应即可实现降解环抱菌素 A中四个N-端氨基 酸的目标，与现有的酸性条件下降解环抱菌素的方法相比，反应步数缩短了一半，收率也提 高了约一倍。
【具体实施方式】
[0014] W下实例有助于了解本
【发明内容】
，本发明包括但不局限于下列有关内容：
连施例I 步骤I ;化合物2的合成 环抱菌素 A-己酸醋
将化合物1 (环抱菌素 A) (600 g，0. 5 mol, 1.0当量）溶解于1.8 L醋酸酢中，在揽拌 下加入4-二甲基氨基化巧（DMAPX6 g，0. 05 mol，0. 1当量)，反应体系开始出现浑浊，该体 系于8(TC下揽拌反应3小时。通过薄层色谱法（IlX)监测反应完成后，将该体系用冰水浴 降温至(TC，揽拌1小时后抽滤，用少量石油離洗涂滤饼，干燥滤饼得510 g环抱菌素 A的己 酸醋，即化合物2。滤液减压蒸出部分醋酸酢至剩余体积约500 mU用冰水浴降温后抽滤，滤 饼洗涂、干燥后再得80 g化合物2。合并后共得到590 g化合物2 (环抱菌素 A-己酸醋)， 收率95%。该化合物无需纯化直接用于下一步反应。
[001 引分子式；CeAisNiiO。;精确分子量=1243. 85 ;质谱（聲勿：1244. 80 (M+H+)。
[001引步骤2 ;化合物3的合成 N-甲基-k亮氨醜A-鄉氨醜-N-甲基-k亮氨醜A-丙氨醜-D-丙氨醜-N-甲 基-k亮氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉氨醜-N-甲基-了帰基-苏氨酸（己酸 醋）-a -氨基了酸-肌氨酸甲醋
将化合物2 (400 g，0. 32 mol, 1.0当量)溶解于4.0 L无水二氯甲焼中，在揽拌下加入 H甲基氧鐵四氣测酸盐（142.6 g，0. 96 mol, 3.0当量)，得一悬浊液，该体系于4(TC下揽拌 反应6小时。通过薄层色谱法（IlX)监测反应完成后，将该体系用冰水浴降温至0°C，加入 1.0 L甲醇钢的甲醇溶液（0.3 M)，揽拌2小时后，再依次加入I L甲醇和I. 2 L稀硫酸（1.0 M)，揽拌半小时后缓慢加入饱和碳酸氨钢水溶液使抑值到中性，然后用4. 0 L二氯甲焼萃 取H次。有机相合并，先后用水3. 0 L和饱和食盐水3. 0 L洗涂，用无水硫酸钢干燥，过滤， 浓缩得粗品。用快速硅胶（100-200目）色谱柱纯化，洗脱液为石油離、己酸己醋和甲醇，得 到310 g化合物3 (N-甲基-k亮氨醜A-鄉氨醜-N-甲基-k亮氨醜A-丙氨醜-D-丙 氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉氨醜-N-甲基-了帰基-苏 氨酸（己酸醋）-a-氨基了酸-肌氨酸甲醋)，收率75%。薄层色谱Rf;0.4 (展开剂体积比： 己酸己醋/甲醇=10/1)。
[0017] 分子式；〇55也术11〇14;精确分子量=1275. 88 ;质谱（聲么）：1276. 7 (M+H