检测人hk2基因的表达水平的特异引物对及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体设及检测人皿2基因的表达水平的特异引物对及 其应用。
【背景技术】
[0002] 食管癌是常见的消化道肿瘤，发病率仅次于胃癌。在我国农村，食管癌是发病率最 高的肿瘤。现已证实食管癌早期发现手术治疗切除率可达100%，5年生存率可达90% W上， 但是目前就诊患者中多数W达中、晚期，因此治疗食管癌关键在于早发现、早诊断、早治疗。 目前食管癌的普查方法主要是食管拉网细胞学检查和复方舰溶液内镜下粘膜染色检查，其 灵敏度和特异性都不理想，因此寻找新的食管癌诊断标志物至关重要。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是如何鉴定或辅助鉴定待测患者是否为食管癌患者。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了特异引物对甲。
[0005] 本发明所提供的特异引物对甲，由用于扩增特异DNA片段的两条引物组成;所述特 异DNA片段中具有人基因组中引物HK2-F和引物HK2-R组成的引物对的祀序列。
[0006] 所述引物服2-F可为如下al)或曰2):
[0007] a 1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
[000引a2)将序列1经过一个或几个核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相 同功能的DNA分子。
[0009] 所述引物服2-R可为如下曰3)或曰4):
[0010 ]日3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
[0011] a4)将序列2经过一个或几个核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相 同功能的DNA分子。
[001 ^ 所述特异引物对甲具体可由所述引物HK2-巧日所述引物HK2-R组成。
[0013] 上述任一所述特异引物对甲在制备产品中的应用也属于本发明的保护范围；所述 产品的功能可为如下bl)或b2)或b3)或b4):
[0014] bl)鉴定或辅助鉴定食管癌；
[0015] b2)鉴定或辅助鉴定待测患者是否为食管癌患者；
[0016] b3)检测人服2基因；
[0017] b4)检测人服2基因的表达水平。
[0018] 为解决上述技术问题，本发明还提供了一种产品。
[0019] 本发明所提供的产品，其含有上述任一所述特异引物对甲；所述产品的功能可为 如下bl)或b2)或b3)或b4):
[0020] bl)鉴定或辅助鉴定食管癌；
[0021] b2)鉴定或辅助鉴定待测患者是否为食管癌患者；
[0022] b3)检测人服2基因；
[0023] b4)检测人服2基因的表达水平。
[0024] 所述产品中还可含有特异引物对乙；所述特异引物对乙的祀序列可位于人的内参 基因中。
[00巧]上述产品中，所述内参基因可为人GAPDH基因、人e-actin基因或人18s-rRNA基因。
[0026] 上述产品中，所述特异引物对乙具体可由引物GAPDH-F和引物GAPDH-R组成；
[0027] 所述引物GAPDH-F可为如下Cl)或c2):
[0028] Cl)序列表的序列3所示的单链DNA分子；
[0029] c2)将序列3经过一个或几个核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相 同功能的DNA分子；
[0030] 所述引物GAPDH-R可为如下c3)或c4):
[0031] c3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；
[0032] c4)将序列4经过一个或几个核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相 同功能的DNA分子。
[0033] 上述产品中还可包括具有如下n)或f2)或巧）或f4)或巧）或f6)或巧）或巧）或巧） 或no)的数据处理和结论显示功能的装置：
[0034] fl)比较同一个体中的待测组织和正常组织中人HK2基因的表达量，如果所述待测 组织中所述人HK2基因的表达量高于所述正常组织、则所述待测组织为或候选为肿瘤组织， 如果所述待测组织中所述人皿2基因的表达量为所述正常组织W下、则所述待测组织不为 或候选不为肿瘤组织；
[0035] f 2)比较同一个体中的待测组织和正常组织中人皿2基因参比内参基因的相对表 达量，如果所述待测组织中所述人HK2基因参比内参基因的相对表达量高于所述正常组织、 则所述待测组织为或候选为肿瘤组织，如果所述待测组织中所述人皿2基因参比内参基因 的相对表达量为所述正常组织W下、则所述待测组织不为或候选不为肿瘤组织；
[0036] f3)比较同一待测患者中的食管组织和非食管组织中人HK2基因的表达量，如果所 述食管组织中所述人皿2基因的表达量高于所述非食管组织、则所述待测患者为或候选为 食管癌患者;如果所述食管组织中所述人HK2基因的表达量为所述非食管组织W下、则所述 待测患者不为或候选不为食管癌患者；
[0037] f4)比较同一待测患者中的食管组织和非食管组织中人HK2基因参比内参基因的 相对表达量，如果所述食管组织中人皿2基因参比内参基因的相对表达量高于所述非食管 组织、则所述待测患者为或候选为食管癌患者;如果所述食管组织中人HK2基因参比内参基 因的相对表达量为所述非食管组织W下、则所述待测患者不为或候选不为食管癌患者；
[0038] 巧）比较待测患者的食管组织和正常人的组织中人HK2基因的表达量，如果所述待 测患者的食管组织中所述人皿2基因的表达量高于所述正常人的组织、则所述待测患者为 或候选为食管癌患者；如果所述待测患者的食管组织中所述人皿2基因的表达量为所述正 常人的组织W下、则所述待测患者不为或候选不为食管癌患者；
[0039] f 6)比较待测患者的食管组织和正常人的组织中人皿2基因参比内参基因的相对 表达量，如果所述待测患者的食管组织中人HK2基因参比内参基因的相对表达量高于所述 正常人的组织、则所述待测患者为或候选为食管癌患者；如果所述待测患者的食管组织中 人HK2基因参比内参基因的相对表达量为所述正常人的组织W下、则所述待测患者不为或 候选不为食管癌患者；
[0040] f7)检测人皿2基因的表达水平，包括W待测样本的CDNA为模板，采用所述特异引 物对甲进行PCR扩增的步骤；
[0041] f8)检测人皿2基因的表达水平，包括W待测样本的CDNA为模板，采用所述特异引 物对甲和所述特异引物对乙进行PCR扩增的步骤；
[0042] f9)检测人HK2基因的表达水平，包括W待测样本的RNA为模板，采用所述特异引物 对甲进行RT-PCR扩增的步骤；
[0043] no)检测人皿2基因的表达水平，包括W待测样本的RNA为模板，采用所述特异引 物对甲和所述特异引物对乙进行RT-PCR扩增的步骤。
[0044] 上述任一所述产品的制备方法也属于本发明的保护范围。
[0045] 上述任一所述产品的制备方法包括el)或e2):
[0046] el)将上述任一所述特异引物对甲和上述任一所述特异引物对乙中的各引物分别 单独包装的步骤；
[0047] e2)将上述任一所述特异引物对甲中的各引物分别单独包装的步骤。
[0048] 用于检测人HK2基因表达量的物质在制备用于诊断食管癌的试剂盒中的应用也属 于本发明的保护范围。
[0049] 上述应用中，所述"用于检测人HK2基因表达量的物质"可为检测特异DNA片段的物 质;所述特异DNA片段中具有人基因组中引物HK2-F和引物HK2-R组成的引物对的祀序列。
[0050] 所述检测所述特异DNA片段的物质可为所述特异引