一种肺癌相关基因突变检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型涉及一种肺癌相关基因突变检测试剂盒，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 肺癌是世界范围内常见的癌症，发病率和死亡率居各癌症之首。肺癌的发生主要 是由于各种因素导致的基因突变，从而导致细胞的过度增值。与肺癌密切相关的基因突变 是一种恶性的基因突变，是导致肺癌发生、扩散、转移和耐药的最根本的原因。因此肺癌相 关基因的突变检测有助于肺癌的早期诊断，同时也可作为靶向化疗治疗及新药研发、应用 的前提和基础。
[0003] 晚期肺癌病人采用放、化疗等治疗手段不仅降低了生存质量，且疗效不佳。易瑞沙 (Iressa)，即吉非替尼（Gefitinib)是目前临床使用最为成功的晚期肺癌靶向治疗药物， 为EGFR酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine Kinase inhibitors，TKI)，研究发现，非小细胞肺癌 患者EGFR基因18、19、20、21外显子上的突变状态与易瑞沙治疗效果显著相关，其中携带 18、19或21外显子的突变型的非小细胞肺癌患者对易瑞沙治疗效果明显好于非突变型患 者，而携带20外显子上的突变型则对易瑞沙耐受。以EML4-ALK融合基因为靶点的克唑替 尼在非小细胞肺癌的靶向治疗中也显示出同样的临床疗效，此外，PI3K抑制剂、BRAF抑制、 MEK抑制剂也具有一定的疗效。由此可见，针对肺癌的单一病理分型已不能满足临床的需 要，必须依据患者肿瘤基因突变分子来选择治疗药物。多项研究证实，与肺癌及靶向治疗密 切相关的突变基因有 EGFR、KRAS、EML4-ALK、BRAF、PI3KCA、PTEN、MEK1、MET、HER2、NAS 和 AKT等。目前，约有70%的肺癌患者仍接受化疗，为了使肺癌患者能接受到最好的治疗，提 高生存率，延长患者生存期。对肺癌患者肿瘤药物靶点及相关的基因突变的了解是实施肺 癌突变特异性治疗（Mutation Specific Therapy)和制定正确化疗方案的前提和基础。
[0004] 目前，基因突变常见的检测方法有：直接测序法、ARMS法、HRM法、DHPLC法等，这些 方法共同缺点是每次只能检测一个突变或一段基因的突变，检测通量低，只能逐个筛查驱 动基因的突变状态，病人等待结果的时间较长。同时，由于晚期病人取材较难，样本量较少， 往往不能满足上述方法检测基因突变谱的需要。因此，我们需要寻求一种新的技术来解决 这一问题。 【实用新型内容】
[0005] 本实用新型所解决的技术问题在于提供一种肺癌相关基因突变检测试剂盒，以解 决上述【背景技术】中提出的问题。
[0006] 本实用新型所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
[0007] -种肺癌相关基因突变检测试剂盒，包括带盒盖的盒体、两个隔板以及三个海绵 衬底，两个隔板置于盒体内，其中一个是竖放的长隔板，其中一个是横放的短隔板，将盒体 分割成三个空间，三个海绵衬底置于三个空间内，海绵衬底上设有用于放置试管的容器孔。
[0008] 试管包括两个装有无核酸水的试管、两个装有PCR Mix的试管、十二个装有引物的 八连管、一个装有引物的试管、十二个装有接头的试管、一个装有连接酶的试管、一个装有 连接酶Buffer的试管、一个装有WARMSTART聚合酶的试管，一个装有HiFi PCR Mix的试管。
[0009] 其中：装有PCR Mix的试管内装有的是含有Taq酶、PCR反应Buffer、dNTP等混合 溶液。
[0010] 进一步的，短两侧的海绵衬底大小一致，颜色不同。
[0011] 短隔板两侧的海绵衬底分别为红色和蓝色，红色海绵衬底的容器孔内放有一个装 有无核酸水的试管，一个装有PCR Mix的试管；蓝色海绵衬底的容器孔内一个装有无核酸 水的试管，一个装有PCR Mix的试管。
[0012] 长隔板一侧的海绵衬底的容器孔内放有十二个装有接头的试管、一个装有引物的 试管、一个装有连接酶的试管、一个装有连接酶Buffer的试管、一个装有WARMSTART聚合酶 的试管以及一个装有HiFi PCR Mix的试管。
[0013] 进一步的，两个隔板的高度低于盒体高度。
[0014] 进一步的，隔板上放置有管架，管架内设有十二条装有引物的八连管。
[0015] 本实用新型的有益效果是：1、本试剂盒结构完全基于一种新的试验方法设计，结 构简单合理、便于使用和操作、分区设计使得检测过程不易受污染；
[0016] 2、本试剂盒在检测肺癌相关基因突变时具有敏感性高、耗时短等优点；本试剂盒 中设置的隔板，及引物、接头试剂等分装，能有效防止样品、试剂交叉等引起的污染，同时也 可以有效减少试剂反复冻融的风险，使得实验更准确。
【附图说明】
[0017] 图1为本实用新型一实施方式的芯片和芯片适配器正确放置的结构示意图。
[0018] 图2为本实用新型一实施方式的适配器的结构示意图。
[0019] 其中：1_盒体；2-装有无核酸水的试管；3-长隔板；4-装有PCR Mix的试管；5-短 隔板；6-容器孔；7-海绵衬底；8-装有HiFi PCR Mix的试管；9-装有引物的试管；10-装有 接头的试管；11-装有连接酶的试管；12-装有连接酶Buffer的试管；13-装有WARMSTART 聚合酶的试管；14-装有引物的八连管；15-管架；16-标记；17-切角。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合附图对本实用新型作进一步详细的说明。
[0021] 实施例一：
[0022] 图1和图2示意性地显示了根据本实用新型的一种肺癌相关基因突变检测试剂 盒，包括带盒盖的盒体1、两个隔板以及三个海绵衬底7,两个隔板置于盒体1内，其中一个 是竖放的长隔板3,其中一个是横放的短隔板5,将盒体1分割成三个空间，三个海绵衬底7 置于三个空间内，海绵衬底7上设有用于放置试管的容器孔6。
[0023] 试管包括两个装有无核酸水的试管2、两个装有PCR Mix的试管4、十二个装有 引物的八连管、一个装有引物的试管9、十二个装有接头的试管10、一个装有连接酶的试 管11、一个装有连接酶Buffer的试管12、一个装有WARMSTART聚合酶的试管13, 一个装有 HiFi PCR Mix 的试管 14。
[0024] 其中：装有PCR Mix的试管4内装有的是含有Taq酶、PCR反应Buffer、dNTP等混 合溶液。
[0025] 长隔板3将盒体分隔成大小两个隔间，短隔板5将隔间分隔成两个大小一样的隔 间。
[0026] 进一步的，短隔板5两侧的