利中的胶体金免疫层析试纸相似(CN103267854)，由检测结合垫6、层析膜7、吸收垫8及支持垫9组成。检测结合垫6设置在层析膜7的一端，吸收垫8设置在层析膜7的另一端；在层析膜7上设有检测区11和对照区12 ;支撑垫9设置在层析膜7下方，且支撑垫9的长度大于层析膜7的长度；所述支撑垫9为四层，顶层支撑垫与层析膜7结合；第二层支撑垫的前端处设有扩增结合垫10，且在该扩增结合垫10上涂覆显色纳米金颗粒层，形成扩增区；第三层支撑垫为FTA卡13 ;底层支撑垫的前端处设有底层吸收垫14 ;还包括用于遮挡扩增结合垫10和FTA卡13的胶纸15。
[0036]试纸扩增区10及滴加纳米金区的结合垫6材料为玻璃纤维膜，用于进行扩增及承载显色纳米金颗粒。层析膜7材料为硝酸纤维素膜，用于固定2mg/ml的检测物，链霉素及100 μΜ的对照物，对照分子，形成检测区11与对照区12。吸收垫材料为纤维素，用于给试纸内溶液流动提供毛细驱动力。支持垫材料为聚氯乙烯膜，用作支持结合垫、层析膜、吸收垫的基板。指示颗粒为纳米金颗粒，粒度为13nm。
[0037]为实现核酸提取、扩增与检测一体化，试纸条包括扩增区和检测区两个区域，但两者的结合垫事先被隔开。在FTA卡13上实现核酸提取后，用40 μ L FTA卡纯化剂及80 μ L缓冲液进行冲洗，后把底层吸收垫14撕掉。扩增前先将总量为25 μ L的扩增试剂及引物滴加在试纸的扩增区结合垫上，用胶纸15把扩增区10及FTA卡13遮盖，以提防液体蒸发，然后将试纸条放置在加热腔内，把盖子盖上，再进行扩增。待扩增完成后，通过单面粘胶让两个区域结合，并滴加缓冲液后进行检测。以上所述两个区域的结合垫材料可以是玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，都可承载颗粒。
[0038]本实用新型利用链霉素在检测线上捕获带有生物素的扩增物。目标物能与纳米金颗粒结合。捕获分子能与纳米金颗粒结合，也能与目标物特异性结合。对照分子能与捕获分子特异性结合。检测反应完成后，观察检测区11和对照区12，检测结果显双区同时显色，表明阳性；检测区未显色，对照区显色，表明阴性；双区未显色，结果不可靠，需重复检测。
[0039]本实用新型的系统，在使用时:
[0040]先将总量为10 μ L的待检测样本滴加在FTA卡13上，提取核酸，15分钟后用40 μ LFTA纯化剂及80 μ L TE缓冲液将FTA卡13清洗干净，再将吸收垫8拆开；
[0041]待5分钟后，将扩增结合垫10及FTA卡13合起，将25 μ L的扩增试剂及引物滴加在扩增结合垫10上，形成扩增区，再用胶纸15将扩增区遮盖，使测试纸的扩增区和检测区隔开，然后将测试纸置于检测箱体1的加热腔3中进行核酸扩增；
[0042]待扩增完成后，把胶纸15拆开，通过单面粘胶让测试纸的扩增区和检测区结合，然后将检测腔4的上盖打开，向检测腔4中滴加50 μ L缓冲液，将扩增区和检测区结合的测试纸放入检测腔4中进行核酸检测；
[0043]检测反应完成后，观察检测区和对照区，若检测区和对照区同时显色，表明阳性；若检测区未显色，对照区显色，表明阴性；若检测区和对照区均未显色，结果不可靠，需重复检测。
[0044]综上所述，本实用新型的系统为小型手持检测装置，能够对任意食品、环境及临床等样本进行核酸提取，对任何一种核酸扩增及检测一体化操作，尤其是在纸基上实现核酸提取、恒温扩增(LAMP)及试纸检测。检测结果可轻易用肉眼观察，用手机软件定量。总扩增及检测时间只需大约1小时。与现有其它方法相比，采用本实用新型公开的系统可简化核酸提取、扩增和检测，减少操作步骤，实现现场高效的快速检测。
【主权项】
1.一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于，由检测箱体(1)和检测试纸条组成； 所述检测箱体(1)内部设有加热控温设备，在检测箱体(1)顶部开设腔体(2)，腔体(2)内设有加热腔(3)和检测腔(4)，加热腔(3)的深度大于检测腔⑷；在检测腔⑷上方设有盖板； 所述检测试纸条为侧向流试纸条，包括检测结合垫￠)、层析膜(7)、吸收垫(8)及支撑垫(9)，检测结合垫(6)设置在层析膜(7)的一端，吸收垫(8)设置在层析膜(7)的另一端；在层析膜(7)上设有检测区(11)和对照区(12);支撑垫(9)设置在层析膜(7)下方，且支撑垫(9)的长度大于层析膜(7)的长度； 所述支撑垫(9)为四层，顶层支撑垫紧贴于层析膜(7)下方；第二层支撑垫的前端处设有扩增结合垫(10)，且在该扩增结合垫(10)上涂覆显色纳米金颗粒层，形成扩增区；第三层支撑垫上设有FTA卡(13);底层支撑垫的前端处设有底层吸收垫(14); 所述检测系统还包括用于遮挡扩增结合垫(10)和FTA卡(13)的胶纸(15)。2.根据权利要求1所述的一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于，所述检测箱体(1)的体积小于7cmX 12cmX 11cm。3.根据权利要求1所述的一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于，加热腔⑶为长方体，体积小于5mmX 10mmX25mm ;检测腔⑷为圆柱体，直径小于5mm，深度小于10mm。4.根据权利要求1所述的一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于，所述加热腔(3)由铝合金制成，加热腔(3)外部包覆隔热材料层。5.根据权利要求1所述的一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于，加热腔(3)内的控温范围为环温+5°C?100°C，控温精度达±0.1°C。6.根据权利要求1所述的一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于，所述检测腔⑷由聚甲醛制成，检测腔⑷上方的盖板由塑料制成。7.根据权利要求1所述的一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于，检测箱体(1)的顶部设有温度调节触控显示屏(5)，检测箱体(1)的内部设有可充电锂离子电池。8.根据权利要求1所述的一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统，其特征在于: 层析膜(7)由硝酸纤维素膜制成，用于固定待检物与对照物； 吸收垫(8)由纤维素膜制成，用于为试纸条内液体流动提供毛细驱动力； 检测结合垫(6)和扩增结合垫(10)由玻璃纤维膜或聚酯纤维膜制成，用于承载显色纳米金颗粒； 支撑垫(9)由聚氯乙烯膜制成，用作支持检测结合垫￠)、层析膜(7)及吸收垫(8)的基板。
【专利摘要】本实用新型公开了一种纸基核酸提取、扩增与检测一体化的检测系统及检测方法，属于生物试纸检测技术领域。本实用新型提供了一种可对任意食品、环境及临床等样本进行核酸提取，任何一种核酸扩增及检测一体化操作，尤其是在纸基上实现核酸提取、恒温扩增(LAMP)及试纸检测，同时提供了一种实现核酸扩增温度的小型手持检测装置。检测结果可轻易用肉眼观察，用手机软件定量。总扩增及检测时间只需大约1小时。与现有其它方法相比，本实用新型提供的方法可简化核酸提取、扩增和检测，减少操作步骤，实现现场高效的快速检测。
【IPC分类】C12M1/34, C12M1/38
【公开号】CN205115487
【申请号】CN201520826257
【发明人】徐峰, 陈玧如, 巩燕, 冯上升, 贝琳达·墨菲
【申请人】西安交通大学
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年10月21日