本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种脑膜炎菌胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途。
背景技术：
脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎的病原体。人类是其唯一的宿主，可定植在人类的鼻咽部粘膜上,主要通过飞沫直接从空气中通过呼吸道传播所引起，在冬末春初季节最为流行。流行性脑脊髓膜炎主要临床表现为发热、头痛、呕吐、皮肤粘膜瘀点、瘀斑及脑膜刺激征。重者可有败血症性休克和脑膜脑炎。脑脊液可呈化脓性改变。无论是在发展中国家或是发达国家均可以引起较高的流脑发病率和死亡率。
流行性脑脊髓膜炎，尤其是暴发型流脑病情进展迅速，主要死因为败血症导致的休克、DIC和脑水肿脑疝。因此，及早的诊断、严密的病情观察是本病治疗的基础。
技术实现要素：
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种脑膜炎菌胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一方面，提供一种脑膜炎菌胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物采用胶体金标记。
优选的，所述底板为PVC底板。
优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。
优选的，所述检测线上包被有脑膜炎重组抗原。
优选的，质控线上包被羊抗兔IgG多克隆抗体。
优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、 甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50-100mM。
优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。
优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。
优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN 20、S-20TWEEN 80、S-13TRITON X-45、S-14TRITON X-100、S-15TRITON X305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为20～40g/L。
优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明所述的金标垫在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钠和甘氨酸，且果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钾和甘氨酸的总浓度为4.5－6.5g/L，缓冲液的pH值为7.3－7.5。
优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：
果糖1.0-2.0g/L；氢氧化铝0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化钠0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。
所述预处理缓冲液的溶剂为水。
所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。
所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。
优选的，所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质控线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。
更优选的，所述卡壳为塑料卡壳。
优选的，所述检测试剂盒用于定性检测人血清/血浆中脑膜炎菌。
本发明第二方面提供所述脑膜炎菌胶体金检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
1)用胶体金标记的脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物溶液喷涂金标垫，制得包含脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物的金标垫；
2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂脑膜炎重组抗原及羊抗兔IgG多克隆抗体，制得包被后的硝酸纤维素膜；
3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。
优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。
优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN 20、S-20TWEEN 80、S-13TRITON X-45、S-14TRITON X-100、S-15TRITON X305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为20～40g/L。
优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明所述的金标垫在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钠和甘氨酸，且果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钾和甘氨酸的总浓度为4.5－6.5g/L，缓冲液的pH值为7.3－7.5。
优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：
果糖1.0-2.0g/L；氢氧化铝0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化钠0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。
所述预处理缓冲液的溶剂为水。
所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。
所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。
本发明第三方面提供所述脑膜炎菌胶体金检测试剂盒在脑膜炎菌检测领域的用途。
本发明的有益效果为：
本发明所提供的脑膜炎菌胶体金检测试剂盒兼具高灵敏性和高特异性，能够快速检测脑膜炎菌。此外，所述检测试剂盒具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；the series METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，Academic Press，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，Chromatin Protocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
实施例1本发明试纸卡的制备
1)使用预处理缓冲液对金标垫进行预处理，预处理缓冲液为：果糖1.5g/L，氢氧化铝0.5g/L，葡萄糖1.25g/L，氯化钠0.3g/L，甘氨酸2.0g/L的水溶液，pH＝7.4，预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡2h，取出放于37℃烘干；然后用胶体金标记的脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物溶液喷涂经预处理的金标垫，制得包被脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物的金标垫，溶液中胶体金与复合物的质量比为5:1，溶液的浓度为10mg/ml，喷涂量为4ul/cm；
2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂1mg/ml的脑膜炎重组抗原溶液和羊抗兔IgG多克隆抗体溶液，喷涂量为1ul/cm，制得包被后的硝酸纤维素膜；
3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在PVC底板上，切裁制得宽3-5mm的检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
实施例2对比试剂盒的制备
对比例试纸卡的制备：采用25mM甘氨酸缓冲液预处理金标垫，其他试剂及实验方法均 同实施例1。
1)采用25mM甘氨酸缓冲液预处理金标垫，然后用胶体金标记的脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物溶液喷涂经预处理的金标垫，制得包被脑膜炎重组抗原、兔IgG多克隆抗体复合物的金标垫，溶液中胶体金与复合物的质量比为5:1，溶液的浓度为10mg/ml，喷涂量为4ul/cm；
2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂1mg/ml的脑膜炎重组抗原溶液和羊抗兔IgG多克隆抗体溶液，喷涂量为1ul/cm，制得包被后的硝酸纤维素膜；
3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在PVC底板上，切裁制得宽3-5mm的检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
实施例3检测试剂盒的特异性实验
检测方法：
1.取实施例1制备的本发明试剂盒和实施例2的对比试剂盒，将试剂盒放置在水平台面上。
2.待测样品的制备：按表1的四类实验对象，从检测者血清中取样，使用0.01M pH7.2的PBS缓冲液稀释，稀释比例为1：1。。
3.每类实验对象为100人，对比实验所用的样品相同，检测结果如表1：
表1 检测试剂盒特异性试验结果
由上表可知，本发明的检测试剂盒对大肠杆菌及痢疾杆菌均无交叉反应，特异性良好。
综上所述，本发明所提供的检测试剂盒具有良好的抗干扰性和特异性，且具有很好的灵 敏性，阴性本底更低，有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。