本发明涉及一种治疗脑血栓形成出现的中风不语、口眼歪斜、半身不遂等症药物的检测方法，属于制药领域。
背景技术：
脑血栓片执行部颁标准及国家食品药品监督管理局标准，具有活血化瘀、醒脑通络、潜阳熄风作用，用于因瘀血、肝阳上亢出现之中风先兆，如肢体麻木、头晕目眩等和脑血栓形成出现的中风不语、口眼歪斜、半身不遂等症，具有预防和治疗作用。该药由中药材红花、当归、水蛭、赤芍、桃仁、川芎、丹参、土鳖虫、羚羊角、人工牛黄组成；其中丹参、当归、川芎、赤芍及红花均是起主要治疗作用的药材。现有脑血栓片执行标准质量控制方法中，缺少对这些起主要治疗作用药材的质量控制方法，丹参虽然有薄层鉴别方法，但缺少定量检测方法；因此，现有技术在全面评价脑血栓片质量优劣方面存在局限性。本发明克服现有技术的不足，完善脑血栓片的质量控制标准，增加了丹参、赤芍含量测定的质量控制方法以及当归、川芎、红花薄层色谱定性鉴别方法，使本复方制剂质量控制标准进一步完善。
技术实现要素：
本发明目的是克服现有技术不足，完善并制定脑血栓片的质量控制方法，增加了丹参、赤芍含量测定的质量控制方法以及当归、川芎、红花薄层色谱定性鉴别方法，使本复方制剂质量控制标准进一步完善；能够有效控制脑血栓片的产品质量。
本发明通过下述技术方案得以实现:
1.脑血栓片中药材丹参所含丹酚酸b高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液（4：20：76）；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸b峰计算应不低于5000；
b.对照品溶液的制备:取丹酚酸b对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含70µg-90µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取0.3-0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇20-30ml，称定重量，超声处理25-35分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5-10分钟取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含丹参以丹酚酸b计，糖衣片不得少于0.83mg，薄膜衣片不得少于1.66mg；
2.脑血栓片中药材赤芍所含芍药苷高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.05mol/l磷酸二氢钾溶液－三乙胺（28：72：0.5）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000；
b.对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20µg-30µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取1.5-2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，摇匀，放置2-6小时，超声处理(功率150w，频率20khz)15-25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含赤芍以芍药苷计，糖衣片不得少于0.95mg，薄膜衣片不得少于1.90mg；
3.脑血栓片中药材当归及川芎用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备:取当归及川芎对照药材各0.4-0.6g，分别加乙醚15-25ml超声处理5-15分钟，滤过，滤液挥干，残渣分别加甲醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取2.0-3.0g，加乙醚25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述两种对照药材溶液和供试品溶液各2-4μl,分别点于同一硅胶ｇ薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
4.脑血栓片中药材红花用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备:取红花对照药材1.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节ph值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取5.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节ph值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各2-6μl,分别点于同一硅胶ｇ薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（5:3）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏20分钟后，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明可通过下述最佳技术方案得以实现:
1.脑血栓片中药材丹参所含丹酚酸b高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液（4：20：76）；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸b峰计算应不低于5000；
b.对照品溶液的制备:取丹酚酸b对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5分钟取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含丹参以丹酚酸b计，糖衣片不得少于0.83mg，薄膜衣片不得少于1.66mg；
2.脑血栓片中药材赤芍所含芍药苷高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.05mol/l磷酸二氢钾溶液－三乙胺（28：72：0.5）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000；
b.对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，摇匀，放置4小时，超声处理(功率150w，频率20khz)20分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含赤芍以芍药苷计，糖衣片不得少于0.95mg，薄膜衣片不得少于1.90mg；
3.脑血栓片中药材当归及川芎用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备:取当归及川芎对照药材各0.5g，分别加乙醚20ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣分别加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取2.4g，加乙醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1.0ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述两种对照药材溶液和供试品溶液各2-4μl,分别点于同一硅胶ｇ薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明提供了丹参、赤芍含量测定的质量控制方法以及以及当归、川芎、红花薄层色谱定性鉴别方法，方法简便易行，可作为脑血栓片质量控制指标。
具体实施方式
实施例:
取组方中水蛭184g、赤芍184g、羚羊角23g粉碎成细粉，红花184g水煮两次浓缩成膏，当归184g、桃仁184g、川芎184g、丹参184g、土鳖虫46g五味以70%乙醇提取两次，浓缩成膏，将以上水、醇浸膏合并，与赤芍、水蛭、羚羊角、人工牛黄细粉及辅料适量混合，制成颗粒，干燥，压制成2000片，包糖衣；或压制成1000片，包薄膜衣；该药物的质量控制方法包括下列步骤:
1.脑血栓片中药材丹参所含丹酚酸b高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液（4：20：76）；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸b峰计算应不低于5000；
b.对照品溶液的制备:取丹酚酸b对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5分钟取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含丹参以丹酚酸b计，糖衣片不得少于0.83mg，薄膜衣片不得少于1.66mg；
2.脑血栓片中药材赤芍所含芍药苷高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.05mol/l磷酸二氢钾溶液－三乙胺（28：72：0.5）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000；
b.对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，摇匀，放置4小时，超声处理(功率150w，频率20khz)20分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含赤芍以芍药苷计，糖衣片不得少于0.95mg，薄膜衣片不得少于1.90mg；
3.脑血栓片中药材当归及川芎用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备:取当归及川芎对照药材各0.5g，分别加乙醚20ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣分别加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取2.4g，加乙醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1.0ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述两种对照药材溶液和供试品溶液各2-4μl,分别点于同一硅胶ｇ薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.脑血栓片中药材红花用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备:取红花对照药材1.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节ph值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取5.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节ph值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各2-6μl,分别点于同一硅胶ｇ薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（5:3）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏20分钟后，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。