本发明涉及一种银纳米辅助浊点萃取测定烟草中的亚硝酸盐方法。属于检测技术领域。
背景技术：
硝酸盐和亚硝酸盐是烟草中一类重要的含氮化合物，其含量的多少不但直接影响烟叶的吃味和品质，还会影响其他含氮化合物的形成和含量。其中，亚硝酸盐更是烟草特有亚硝胺的直接前体物，它的含量与烟草特有亚硝胺的含量呈显著相关。随着人们对烟草特有亚硝胺的日益关注，如何快速准确地对硝酸盐和亚硝酸盐进行定量分析也显得愈发重要。目前烟草中硝酸盐的测定有行业标准YC/T 296-2009烟草及烟草制品中硝酸盐的测定-连续流动法。方法原理是用水萃取试样，萃取液中的硝酸盐在碱性条件下与硫酸肼－硫酸铜溶液反应生成亚硝酸盐。亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺反应生成重氮化合物，在酸性条件下，重氮化合物与N－(1－萘基)－乙二胺二盐酸发生偶合反应生成一种紫红色配合物，其最大吸收波长为520nm，用比色计测定。研究小组之前将浊点萃取技术应用于亚硝酸盐的测定，产生了好的技术效果，申请了相关发明专利CN104458712A、CN104280383A。本发明是对现有标准及技术的改进，将NO2-与I-反应形成的I3-与阳离子染料形成离子对进行银纳米辅助浊点萃取，与一般的浊点萃取比较，具有萃取率更高、萃取时间缩短，检测灵敏度更高的优势。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种操作简单，灵敏度高，检测时间短的银纳米辅助浊点萃取测定烟草中的亚硝酸盐方法。
本发明的一种银纳米辅助浊点萃取测定烟草中的亚硝酸盐方法，包括以下步骤：
(1)亚硝酸盐工作曲线的制作：将亚硝酸盐0.01～2.0mg/L的标准溶液转移到50mL离心管中，加入KI试剂，染料溶液，pH缓冲溶液，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入制备的银纳米溶液及非离子表面活性剂，加热，待溶液变混浊后，停止加热，放入冰浴，离心分相，取出表面活性剂相，进行紫外分光光度法测定。
(2)烟草样品亚硝酸盐测定：称取0.5～1.0g(准确到0.1mg)于250mL锥形瓶中，准确加入50～100mL高纯水，具塞后置于超声波发生器中超声30～60min。静置，离心分离，加入活性炭，混合均匀，滤纸过滤除去活性炭，取出20mL脱色后的溶液，移到50mL离心管中，加入KI试剂，染料溶液，pH缓冲溶液，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入制备的银纳米溶液及非离子表面活性剂，加热，待溶液变混浊后，停止加热，放入冰浴，离心分相，取出表面活性剂相，进行紫外分光光度法测定，代入步骤(1)回归方程计算烟草样品中亚硝酸盐含量。
所述的碘化钾试剂浓度为0.5～2mmol/L。
所述的染料包括孔雀石绿、结晶紫中之一种，浓度为1～5×10-5mol/L。
所述的缓冲溶液为pH 4Britton-Robinson缓冲溶液。
所述的银纳米的制备：20g黄芩中加入200mL高纯水，煮沸30min，冷却至室温，过滤得到黄芩水提物；取10mL黄芩水提物加入0.05mol/L的AgNO3溶液10mL，搅拌30min，得到银纳米溶液；银纳米溶液加入量为0.2～0.5mL。
所述的非离子表面活性剂包括Triton X-100，Triton X-114，体积百分比浓度为0.1～0.2％。
所述的加热温度为40～60℃，加热时间为10～20min。
所述的冰浴时间为5～10min。
所述的离心时间5～15min，离心速率3000～6000r/min。
所述的加入活性炭的量为0.5～1g。
本发明的优点在于：
1.本发明利用NO2-与I-反应形成的I3-与阳离子染料形成离子对有色化合物，进行银纳米辅助浊点萃取，紫外分光光度法间接测定烟草中的亚硝酸盐，方法简单。
2.由于染料与I3-形成离子对化合物颜色敏感，用于NO2-的检测，灵敏度高。
3.由于银纳米是通过天然产物提取物均匀还原形成的，与非离子表面活性剂进行辅助浊点萃取离子对有色化合物，具有萃取率高、萃取时间短，浊点温度低，检测灵敏度高的特点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1
1、银纳米的制备：20g黄芩中加入200mL高纯水，煮沸30min，冷却至室温，过滤得到黄芩水提物；取10mL黄芩水提物加入0.05mol/L的AgNO3溶液10mL，搅拌30min，得到银纳米溶液。
2、亚硝酸盐工作曲线的制作：取浓度为1.0mg/L的NO2-标准溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂1mL，2.5×10-3mol/L结晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液1mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.2mL及5％非离子表面活性剂Triton X-114 2mL，加热至45℃，10min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴5min，4000r/min离心10min后分相，取出表面活性剂相，450nm处进行光度法测定吸光度，得到回归方程y＝0.4196x-0.04，相关系数r＝0.9989。
3、烟草样品测定：称取0.5g烟叶粉末(准确到0.1mg)于250mL锥形瓶中，准确加入50mL高纯水，具塞后置于超声波发生器中超声30min。静置，4000r/min离心15min，加入0.5g活性炭，混合均匀，滤纸过滤除去活性炭，取出20mL脱色后的溶液，移到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂1mL，2.5×10-3mol/L结晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液1mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.2mL及5％非离子表面活性剂Triton X-114 2mL，加热至45℃，10min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴5min，4000r/min离心5min后分相，取出表面活性剂相，450nm处进行光度法测定吸光度，代入步骤2回归方程计算烟草样品中亚硝酸盐含量为18.23mg/kg。
实施例2
1、银纳米的制备按实施例1。
2、亚硝酸盐工作曲线的制作：取浓度为1.0mg/L的NO2-标准溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂2mL，2.5×10-3mol/L孔雀石绿溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液2mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.5mL及5％非离子表面活性剂Triton X-100 3mL，加热至60℃，15min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴10min，6000r/min离心5min后分相，取出表面活性剂相，600nm处进行光度法测定吸光度，得到回归方程y＝0.1245x-0.009，相关系数r＝0.9965。
3、烟草样品测定：称取1.0g烟叶粉末(准确到0.1mg)于250mL锥形瓶中，准确加入100mL高纯水，具塞后置于超声波发生器中超声60min。静置，6000r/min离心10min，加入1.0g活性炭，混合均匀，滤纸过滤除去活性炭，取出20mL脱色后的溶液，移到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂2mL，2.5×10-3mol/L孔雀石绿溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液2mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.5mL及5％非离子表面活性剂Triton X-100 3mL，加热至60℃，15min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴10min，6000r/min离心5min后分相，取出表面活性剂相，600nm处进行光度法测定吸光度，代入步骤2回归方程计算烟草样品中亚硝酸盐含量为25.21mg/kg。
实施例3
1、银纳米的制备按实施例1。
2、亚硝酸盐工作曲线的制作：取浓度为1.0mg/L的NO2-标准溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂2mL，2.5×10-3mol/L孔雀石绿溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液2mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.5mL及5％非离子表面活性剂Triton X-114 3mL，加热至40℃，20min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴8min，5000r/min离心7min后分相，取出表面活性剂相，600nm处进行光度法测定吸光度，得到回归方程y＝0.5210x-0.007，相关系数r＝0.9978。
3、烟草样品测定：称取1.0g烟叶粉末(准确到0.1mg)于250mL锥形瓶中，准确加入100mL高纯水，具塞后置于超声波发生器中超声40min。静置，6000r/min离心10min，加入1.0g活性炭，混合均匀，滤纸过滤除去活性炭，取出20mL脱色后的溶液，移到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂2mL，2.5×10-3mol/L孔雀石绿溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液2mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.5mL及5％非离子表面活性剂Triton X-114 3mL，加热至40℃，20min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴8min，5000r/min离心7min后分相，取出表面活性剂相，600nm处进行光度法测定吸光度，代入步骤2回归方程计算烟草样品中亚硝酸盐含量为32.62mg/kg。
实施例4
1、银纳米的制备按实施例1。
2、亚硝酸盐工作曲线的制作：取浓度为1.0mg/L的NO2-标准溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂1mL，2.5×10-3mol/L结晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液1mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.2mL及5％非离子表面活性剂Triton X-100 2mL，加热至55℃，20min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴10min，3000r/min离心20min后分相，取出表面活性剂相，450nm处进行光度法测定吸光度，得到回归方程y＝0.1246x-0.004，相关系数r＝0.9991。
3、烟草样品测定：称取0.5g烟叶粉末(准确到0.1mg)于250mL锥形瓶中，准确加入50mL高纯水，具塞后置于超声波发生器中超声50min。静置，3000r/min离心20min，加入0.5g活性炭，混合均匀，滤纸过滤除去活性炭，取出20mL脱色后的溶液，移到50mL离心管中，加入0.05mol/L的KI试剂1mL，2.5×10-3mol/L结晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson缓冲溶液1mL，用高纯水稀释到刻度，混匀，加入步骤1制备的银纳米溶液0.2mL及5％非离子表面活性剂Triton X-100 2mL，加热至55℃，20min后，溶液变混浊，停止加热，放入冰浴10min，3000r/min离心20min后分相，取出表面活性剂相，450nm处进行光度法测定吸光度，代入步骤2回归方程计算烟草样品中亚硝酸盐含量为12.15mg/kg。