小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇的含量测定方法与流程

本发明属于中药制药技术领域，特别是涉及一种小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇含量测定方法。

背景技术：

春夏之交，特别是进入夏季后，小儿风热感冒高发，风热感冒是风热之邪犯表、肺气失和所致。风热感冒通常会伴有发热症状。发热时身体病毒或细菌入侵所产生的一种反应。而家长控制不好，将使小儿反复感染，反复高热，从而影响孩童的发育与成长。

小儿感冒颗粒可以疏风解表，清热解毒。用于小儿风热感冒、发热重，头胀痛，咳嗽痰黏，咽喉肿痛等症状。处方由广藿香、菊花、连翘、大青叶、板蓝根、地黄、地骨皮、白薇、薄荷这几味药材组成，其各味药材标准收载于《中国药典》2010年版一部。小儿感冒颗粒用药材基原明确，产地固定，可以保证产品质量的有效性、稳定性均一性。

《中国药典》2010年版中没有关于小儿感冒颗粒中关于挥发油薄荷脑、百秋李醇含量的控制标准。而薄荷脑、百秋李醇属于挥发油，在小儿感冒颗粒生产工艺中比较难以控制，因此，建立一种小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇含量测定方法来进行小儿感冒颗粒的质量监控非常必要。

技术实现要素：

本发明的目的就在于提供一种小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇含量测定方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇的含量测定方法，其特征在于制备好采用气相色谱法进行测定，其色谱条件为：RTX-5石英毛细管色谱柱，氢火焰离子化检测器，进样口温度为250℃；检测器温度为300℃；载气为N₂；载气流速为2ml/min，分流比为2：1；进样量为1.0μl；采用程序升温，起始80℃，保持5min，8℃/min升至180℃，保持13min。

所述气相色谱法中供试品溶液采用聚乙二醇为助溶剂，超声处理10分钟的方式进行制备。

所述超声处理参数为功率120W，频率40kHz。

通过对小儿感冒颗粒挥发油成分进行分析可知，小儿感冒颗粒中含有的挥发油有：单萜、单萜醇、倍半萜类化合物、碳烯、香桧烯、蒎烯、松油烯、左旋薄荷醇、左旋薄荷酮异薄荷醇、胡薄荷酮、胡椒酮、胡椒烯酮、薄荷脑、百秋李醇、广藿香酮等，挥发油成分太多，采用对比例中的方法没法依次将主要挥发油分离，又因各挥发油的沸点不一样，且对比例中的方法起始温度太低，导致薄荷脑保留时间后延，百秋李醇出峰时间在程序升温结束之后，这导致供试品中的部分挥发油没法在色谱柱中分离，从而存在残留，将会影响下一个样品的检测，以及缩短色谱柱的寿命。

为此，本发明考虑到小儿感冒颗粒中的主要挥发油的沸点以及在色谱柱中的分离程度，特将升温程序中的起始温度修改为80℃，为使百秋李醇能够很好的被分离与检出，将程序升温第二阶段保持温度时间调整为13min。将供试品溶液注入气相色谱仪，按照上述升温程序进行检测，得出的色谱图见图2。由图可知，薄荷脑、百秋李醇均能很好的检出，且薄荷脑同相邻峰的分离度为1.561，实现了完全分离，百秋李醇出峰时间为22.110min，该方法程序升温简单、检测时间短且无残留，适用于小儿感冒颗粒中薄荷脑、百秋李醇含量测定。

同时将小儿感冒颗粒按照对比例提供的方法供试品溶液制备，并进行检测。可知，由于超声时间太长，导致乙酸乙酯混合液挥发严重，影响了薄荷脑、百秋李醇的含量。因此本发明将超声的时间修改为10min，为了提高薄荷脑、百秋李醇于10min内在乙酸乙酯中的溶解度，特加入0.5ml的聚乙二醇做为助溶剂，并进行检测。将两次检测结果进行对比可以知，采用助溶剂超声10min薄荷脑含量提高12％，百秋李醇含量提高15％，可知调整后方法适用于小儿感冒颗粒中薄荷脑、百秋李醇含量的检测。

本发明的方法学验证数据如下：

1)专属性：将空白溶剂、空白对照溶液、混合对照品溶液、小儿感冒颗粒供试品溶液分别注入气相色谱仪进行检测，结果空白对照对薄荷脑、百秋李醇的测定无干扰，专属性良好；薄荷脑、百秋李醇分离度良好，峰形对称，检测方法可行，符合检测要求。空白溶剂见图3，空白对照见图4，混合对照品见图5，供试品见图6。

2)线性：精密称取薄荷脑、百秋李醇对照品适量，用乙酸乙酯制成浓度分别为每0.005mg/ml、0.05mg/ml的混合对照品储备溶液D1精密称取薄荷脑、百秋李醇对照品适量，用乙酸乙酯制成浓度分别为0.07mg/ml、0.5mg/ml的混合对照品储备液D2。将混合对照品储备液D1与D2分别稀释成5个浓度级，依法进样，以峰面积为纵坐标，溶液浓度为横坐标，计算回归方程，薄荷脑回归方程为y＝2.1E+6x+618.41r^2＝0.9997，百秋李醇回归方程为y＝2.4E+6x+4911.8r^2＝0.9995。试验结果表明，薄荷脑在0.000952～0.0426mg/ml范围内，呈良好的线性关系，百秋李醇在0.00988～0.2805mg/ml范围内，呈良好的线性关系。

薄荷脑测定结果见表1，线性关系曲线图见图7。

表1薄荷脑含量测定线性范围

百秋李醇测定结果见表2，线性关系曲线图见图8。

表2百秋李醇含量测定线性范围

3)重复性：取同一批号供试品(批号150201)6份，按照含量测定方法测定。结果平均含量：薄荷脑0.00104％，RSD为3.33％，百秋李醇0.00634％，RSD为2.81％，重复性良好，见表7。

表3小儿感冒颗粒薄荷脑、百秋李醇含量测定重复性试验结果表

4)回收率：取小儿感冒颗粒9份，每份15g，精密称定，分别按照所取供试品内薄荷脑、百秋李醇含量的80％，100％，120％加入相应体积的薄荷脑、百秋李醇混合对照品溶液，照含量项下的提取方法及测定方法提取并测定，计算平均回收率薄荷脑106.02％，RSD:3.97％,见表9，百秋李醇104.75％，RSD:4.83％，见表4。

表4薄荷脑回收率试验结果

表5百秋李醇回收率试验结果

5)溶液稳定性：取同一份供试品溶液，自制备后，按含量测定方法，分别在0、1、2、3小时进样测定。结果峰面积平均值为：薄荷脑峰面积平均值为27038.248，RSD为：2.38％，见表6。百秋李醇峰面积平均值为211349.531，RSD为2.88％，见表7。表明供试品溶液自制备后3小时内测定基本稳定。

表6薄荷脑稳定性试验结果

表7百秋李醇稳定性试验结果

综上所述，本发明的小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇含量测定方法通过对色谱条件的优选及供试品、对照品制备方法的试验，建立了制剂中薄荷脑、百秋李醇含量的气相色谱分析方法；通过对色谱分离系统的优化，建立了制剂中薄荷脑、百秋李醇含量的检测方法，通过方法学验证试验研究表明：所建立的方法准确度高、专属性强、重复性良好，通过对制剂中薄荷脑、百秋李醇含量的控制，确保制剂质量，有利于生产过程的质量控制。

附图说明

图1为对比例中采用现有方法进行小儿感冒颗粒中薄荷脑、百秋李醇含量测定的气相色谱图；

图2为本发明方法进行小儿感冒颗粒中薄荷脑、百秋李醇含量测定的气相色谱图；

图3为本发明专属性验证中空白溶剂气相色谱图；

图4为本发明专属性验证中空白对照溶液气相色谱图；

图5为本发明专属性验证中混合对照溶液气相色谱图；

图6为本发明专属性验证中供试品溶液气相色谱图；

图7为本发明线性验证中薄荷脑对照品标准曲线图；

图8为本发明线性验证中百秋李醇对照品标准曲线图。

具体实施方法

下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。

小儿感冒颗粒处方：广藿香75g，菊花75g，连翘75g，大青叶125g，板蓝根75g，地黄75g，地骨皮75g，白薇75g，薄荷50g，石膏125g。

制备方法：以上十味，取石膏25g、板蓝根粉碎成细粉；地黄、白薇、地骨皮、石膏100g加水煎煮二次，第一次3小时，第二次1小时，合并煎液，滤过；菊花、大青叶热浸二次，第一次2小时，第二次1小时，合并浸出液，滤过；广藿香、薄荷、连翘提取挥发油，其水溶液滤过，滤液与以上二液合并，浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的清膏；取清膏1份、蔗糖粉2份、糊精1份，与上述细粉混匀，制成颗粒，干燥，加入挥发油，混匀，即得。

实施例：采用本发明方法进行小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇含量测定

色谱条件RTX-5石英毛细管色谱柱(柱长30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm)，氢火焰离子化检测器(FID)，进样口温度为250℃；检测器温度为300℃；载气为N₂；载气流速为2ml/min，分流比为2：1；进样量为1.0μl；采用程序升温，升温程序见下表：

升温程序表

对照品溶液制备 取薄荷脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品储备溶液。取百秋李醇对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品储备溶液。精密量取薄荷脑对照品储备溶液、百秋李醇对照品储备溶液各5ml，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯制成每1ml含薄荷脑0.01mg，百秋李醇0.1mg的混合溶液，作为混合对照品溶液。

供试品溶液制备 取本品适量，研细，取约30g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20ml，聚乙二醇0.5ml，密塞，称定重量，超声处理(功率120W，频率40kHz)10分钟，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得。

对比例：采用现有技术中方法进行小儿感冒颗粒中薄荷脑和百秋李醇含量测定。

色谱条件：色谱柱：HP-5柱(30m*0.32mm*0.25um)；柱温采用程序升温：起始40℃，保持5min，8℃/min升至180℃，保持2.5min；进样口温度：250℃；检测器(FID)温度：300℃；载气为氮气，流速为2.0ml/min；进样量为1ul，分流比为20:1。

供试品溶液制备：称取本品30g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙酸乙酯40ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率80KHz)30分钟，放冷，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

按照上述方法将我厂生产的小儿感冒颗粒进行检测，结果如下表：

本发明供试品溶液制备同对比例供试品溶液制备结果对比：