本发明涉及一种骨转换率的评价方法。
背景技术：
骨钙素(osteocalcin)是一种由49个氨基酸组成的蛋白质。它来源于骨组织，由成骨细胞合成并分泌到骨中，是骨组织中非胶原性蛋白的主要成分，其作用是调节和维持骨钙，基本上能够反映近期成骨细胞活性和骨转换的情况。
完整的骨钙素(氨基酸1-49)在外周血中不稳定，羧基端43与44之间的氨基酸链易被蛋白酶水解。裂解后的大片段(氨基酸1-43)包含43个氨基酸，其被称为骨钙素N端中分子片段或骨钙素-N端肽(N-MID)，骨钙素-N端肽在外周血中比较稳定。因此，为了精准测定血清中骨钙素含量，必须同时检测血清中全段的骨钙素(氨基酸1-49)和骨钙素-N端肽(氨基酸1-43)的含量，只有这样，才能较好地反映近期骨转换的情况，从而可进一步对骨代谢疾病进行诊断和疗效观察。
目前，市场上只有少数几家公司能生产同时检测血清中全段的骨钙素和骨钙素-N端肽的体外诊断试剂，比如罗氏诊断有限公司、嘉兴行健生物科技有限公司、广州菲康生物技术有限公司等。但是，精准检测血清中骨钙素的含量只是评估骨转换率的第一步，评估骨转换率高低的临界值才是关键。
在医学分析上，临界值通常是以一组不少于120例的健康人群(考虑地区、性别、年龄等因素)的测定值为统计对象的，对于大多数分析物，以2.5％为低限，以97.5％为高限，通常确定范围在2.5％～97.5％的测定值为临界值。对于单侧指标，可以确定第5百分位数或第95百分位数为临界值。罗氏诊断有限公司在骨钙素临界值的统计上也遵循惯例，对于女性，停经前(＞20岁)以108例停经前健康女性在5％～95％的测定值(即11-43ng/mL)为临界值；停经后以102例停经后健康女性在5％～95％(即15-46ng/mL)的测定值为临界值。然而，女性在绝经初期，有一个骨量丢失的加速期，主要由于雌激素水平下降，导致破骨细胞活性增加，骨吸收增强，表现为骨钙素水平逐渐升高。在女性绝经后20年，骨钙素水平维持在一个相对稳定的较高水平。因此，女性的骨健康人群不应包含绝经期后的人群(该年龄段女性已存在较大的骨量丢失)，而应以绝经前女性人群为统计基准。罗氏骨钙素在临界值上的设计缺陷，导致其在临床上很难应用，且与临床其他诊断(如骨密度检测)的一致性较差。因而，现有的骨转换率评价方法在临床难以得到有效的应用。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种更为精准的40岁以上女性骨转换率的评估方法，以解决现有技术中的问题。
本发明提供一种40岁以上女性骨转换率的评估方法，其包括如下步骤：
(a)测定血清中骨钙素的含量，得到测定值Cs，单位ng/mL；
(b)设定第一临界值D1和第二临界值D2，单位ng/mL，其中1≤D1≤8，12≤D2≤28；
(c)将测定值Cs与第一临界值D1及第二临界值D2进行比较：当Cs＜D1，则判断为低骨转换率；当D1≤Cs＜D2，则判断为正常骨转换率；当Cs≥D2，则判断为高骨转换率。
优选的，步骤(a)中采用体外诊断试剂法测定血清中骨钙素的含量。
优选的，采用体外诊断试剂法测定血清中骨钙素N端中分子片段以及全段的骨钙素的含量，该体外诊断试剂法为酶联免疫法、免疫比浊法或化学发光法。
优选的，步骤(b)中以当地年龄为34-44岁的女性血清中骨钙素含量进行统计获取第一临界值D1和第二临界值D2。
优选的，步骤(b)中2≤D1≤5，15≤D2≤19，单位ng/mL。
相较于现有技术，本发明所述骨转换率的评价方法通过以当地年龄为30-50岁的女性血清中骨钙素含量进行统计获取第一临界值D1和第二临界值D2，将骨钙素的测定值与第一临界值、第二临界值进行比较判断，该D1及D2的取值范围为：1≤D1≤8，12≤D2≤28。相对于现有以绝经后女性为骨健康人群的临界值(已存在较大的骨量丢失)，该临界值的统计对象基本排除了绝经后女性的人群，因而可准确表达骨健康状态，该骨钙素的评估结果与其他的检测手段如骨密度测试基本一致。该骨钙素的评估方法可进一步对临床骨代谢疾病进行更为有效和准确的诊断和疗效观察。
具体实施方式
下面将对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施方式，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种40岁以上女性骨转换率的评估方法，其包括如下步骤：
(a)测定血清中骨钙素-N端肽的含量，得到测定值Cs，单位ng/mL；
(b)以当地年龄为30-50岁的女性血清中骨钙素含量进行统计获取第一临界值D1和第二临界值D2，单位ng/mL，其中1≤D1≤8，12≤D2≤28；
(c)将测定值Cs与第一临界值D1及第二临界值D2进行比较：当Cs＜D1，则判断为低骨转换率；当D1≤Cs＜D2，则判断为正常骨转换率；当Cs≥D2，则判断为高骨转换率。
在步骤(a)中，采用体外诊断试剂法测定血清中骨钙素N端中分子片段(氨基酸1-43)以及全段的骨钙素(氨基酸1-49)的含量。测定血清中骨钙素的含量Cs的方法不限，可为酶联免疫法、免疫比浊法、化学发光法等。本实施例中，测定血清中骨钙素的含量Cs的方法为骨钙素-N端肽测定试剂盒(酶联免疫法)，可同时测定全段骨钙素及N端中分子片段骨钙素。具体的，该试剂盒采用“双抗体夹心”技术，即通过加入生物素标记骨钙素抗体和辣根过氧化物酶(简称HRP)标记骨钙素抗体混合物，孵育形成“生物素抗体-骨钙素-HRP标记抗体”的双抗体夹心结构，然后加入HRP基质溶液，孵育，测试吸光度。通过吸光度-骨钙素浓度曲线得到骨钙素浓度测试值Cs。
在步骤(b)中，所述第一临界值D1和第二临界值D2因地理、人种、性别及年龄等差异。优选的，以当地年龄为34-44岁的女性血清中骨钙素含量进行统计获取第一临界值D1和第二临界值D2。优选的，2≤D1≤5，15≤D2≤19。
在步骤(c)中，通过将测定值Cs与第一临界值D1及第二临界值D2进行比较，从而对骨转换率进行评价。一般而言，当女性的年龄超过40岁，患有骨质疏松症的概率增加。当判断为高骨转换率时，适宜于抗骨吸收类药物治疗；当判断为低骨转换率时，不适宜应用抗骨吸收类药物治疗，而可用增加骨合成代谢类的药物治疗。
该评价方法可用于评价骨代谢状态、骨质疏松诊断分型、预测骨折风险、抗骨质疏治疗疗效评价、代谢性骨病的鉴别诊断、骨折愈合的评价以及肿瘤骨转移的检测等。
下面结合具体实施例对本发明所述40岁以上女性骨转换率的评估方法进行说明：
实施例1
建立临界值：以我国某地区131例30-50岁的健康女性为统计对象，以骨钙素-N端肽测定试剂盒(酶联免疫法)测定其血清中骨钙素-N端肽含量，建立该地区40岁以上女性血清骨钙素的临界值，取D1＝P5，D2＝P95，结果见表1。注：P5、P95为百分位点。
表1
该地区40岁以上女性33例，以骨钙素-N端肽测定试剂盒(酶联免疫法)测定其血清中骨钙素-N端肽含量，对比的，以骨密度仪(DXA)测量其骨密度，结果见表2。
表2
经统计分析，骨转换率评价结果见表3。
表3
备注：骨钙素-N端肽的评价结果中：阳性(I)表示骨转换率偏低；阴性表示骨转换率正常；阳性(II)表示骨转换率偏高。阳性率＝[阳性(I)+阳性(II)]/划分的例数*100％。
由表3知，表2中各例女性的骨钙素-N端肽的评价结果与骨密度的测试结果吻合一致，这进一步验证了本评价方法较为精确。随着骨量丢失的增加，骨钙素-N端肽的阳性率逐渐增加。
进一步的，表3中的骨质疏松患者12例，其中8例为高转换率骨质疏松，适合抗骨吸收治疗(采用骨吸收抑制剂如双磷酸盐)；1例为低骨转换率，3例为正常骨转换率骨质疏松，不适合抗骨吸收治疗。骨量减少患者12例，其中低转换率0例，正常转换率5例，不适合抗骨吸收预防；而高转换率7例，适合做抗骨吸收预防。
实施例2
建立临界值：以我国某地区128例34-44岁的健康女性为统计对象，以骨钙素-N端肽测定试剂盒(酶联免疫法)测定其血清中骨钙素-N端肽含量，建立该地区40岁以上女性血清骨钙素的临界值，取D1＝P5，D2＝P95，结果见表4。注：P5、P95为百分位点。
表4
该地区40岁以上女性36例，以骨钙素-N端肽测定试剂盒(酶联免疫法)测定其血清中骨钙素-N端肽含量，对比的，以骨密度仪(DXA)测量其骨密度，结果见表5。
表5
经统计分析，骨转换率评价结果见表6。
表6
备注：骨钙素-N端肽的评价结果中：阳性(I)表示骨转换率偏低；阴性表示骨转换率正常；阳性(II)表示骨转换率偏高。阳性率＝[阳性(I)+阳性(II)]/划分的例数*100％。
由表6知，表5中各例女性的骨钙素-N端肽的评价结果与骨密度的测试结果吻合一致，这进一步验证了本评价方法较为精确。随着骨量丢失的增加，骨钙素-N端肽的阳性率逐渐增加。
进一步的，表6中的骨质疏松患者13例，其中8例为高转换率骨质疏松，适合抗骨吸收治疗(采用骨吸收抑制剂如双磷酸盐)；2例为低骨转换率，3例为正常骨转换率骨质疏松，不适合抗骨吸收治疗。骨量减少患者14例，其中低转换率1例，正常转换率6例，不适合抗骨吸收预防；而高转换率7例，适合做抗骨吸收预防。
相较于现有技术，本发明所述骨转换率的评价方法通过设定第一临界值D1和第二临界值D2，将骨钙素-N端肽的测定值与第一临界值、第二临界值进行比较判断，该D1及D2的取值范围为：1≤D1≤8，12≤D2≤28，该取值范围较小，因而可更为精确的判断骨钙素-N端肽的含量，该骨钙素的评估结果与其他的检测手段如骨密度测试基本一致。该骨钙素的评估方法可进一步对临床骨代谢疾病进行更为有效和准确的诊断和疗效观察。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。