1.一种生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备缓冲溶液;
(2)合成ZnS纳米簇,制备适配体1修饰ZnS纳米簇;
(3)合成Fe3O4纳米粒子,制备探针DNA修饰Fe3O4纳米粒子;
(4)制备适配体2修饰电极;
(5)加入血小板衍生生长因子-BB,构建生物传感器。
2.如权利要求1所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述缓冲溶液包括实验体系所用缓冲溶液和/或DNA缓冲溶液。
3.如权利要求1和2所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(1)包括以下步骤:将分别为2.5OD的适配体1、适配体2,探针DNA,8-17DNA酶序列分别溶解在20mM pH=7.4PBS缓冲溶液中,分别得到多个浓度为100μM的DNA缓冲溶液,在4℃下保存备用。
4.如权利要求3所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,DNA序列分别为:
适配体1:CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATC CTGTTTTTT-biotin;适配体2:CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTGTTTT-(CH2)3-HS;底物DNA:biotin–CCACCACAATGTTATACAGGTACTATrAG GAAGTTGAGTTACGAGGCGGTGGTGG-(CH2)3-SH;8-17DNA酶:CTCAACTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTACCT。
5.如权利要求1-4所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(2)中采用水热法合成ZnS纳米簇,包括如下步骤:
(2-1)将0.1756g的二水合醋酸锌和1.5224g的硫脲溶解在20mL的超纯水中形成澄清溶液;
(2-2)室温下搅拌30分钟;
(2-3)装入反应釜中140℃加热90分钟;
(2-4)冷却至室温后,离心得到白色沉淀物质;
(2-5)20mL超纯水洗两遍20mL乙醇洗两遍后60℃烘干6小时得到ZnS纳米簇。
6.如权利要求1-5所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(2)中制备适配体1修饰ZnS纳米簇,包括如下步骤:
(2-6)将1mg的ZnS纳米簇溶解于1mL的PBS缓冲溶液中;
(2-7)25μL 1mg/mL的链霉亲和素6mg of 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5mg的N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶解于1mL PBS缓冲溶液中;
(2-8)震荡15分钟;
(2-9)加入20μL 1mg/mL的ZnS纳米簇;
(2-10)室温震荡3小时得到链霉亲和素修饰的ZnS纳米簇溶液;
(2-11)适配体1加入上述溶液中,实现适配体1终浓度5μM;
(2-12)室温下搅拌30分钟合成适配体1修饰ZnS纳米簇。
7.如权利要求1-6所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(3)合成Fe3O4纳米粒子包括如下步骤:
(3-1)1.35g的六水合三氯化铁溶解于40mL乙二醇中形成澄清溶液;
(3-2)加入3.6g醋酸钠和1.0g聚乙二醇;
(3-3)混合物搅拌30分钟后倒入反应釜中;
(3-4)200℃加热8小时;
(3-5)冷却至室温;
(3-6)用乙醇和水清洗;
(3-7)60℃烘干6小时后得到Fe3O4纳米粒子。
8.如权利要求1-7所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(4)包括如下步骤:
(4-1)在100μL的100μM适配体2溶液中加入0.1μL的100mM硫醇类还原剂TCEP中;
(4-2)室温下反应1小时,防止DNA自身形成二硫键;
(4-3)用PBS缓冲溶液将以上得到的适配体2稀释到0.5μM;
(4-4)将5μL 0.5μM的适配体2滴加到干净的金电极表面;
(4-5)在黑暗环境下室温反应2小时;
(4-6)用超纯水清洗;
(4-7)将适配体2修饰的金电极保存在含有1.0mM 6-巯基乙醇的20mM PBS以封闭剩余的空穴。
9.如权利要求8所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(4-7)中PBS的pH=7.4。
10.如权利要求1-9所述的生物适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤(5)包括如下步骤:
(5-1)将电极浸入到1.0×10-12M血小板衍生生长因子-BB溶液中;
(5-2)将电极浸没在200μL含有14μL 1.0mM AgNO3的PBS缓冲溶液中;
(5-3)室温下反应10分钟;
(5-4)在上述溶液中加入150nM底物DNA,75nM 8-17DNAzyme在37℃反应60分钟;
(5-5)底物DNA被剪切,通过磁性分离,可得到剪切后的部分底物DNA转换酶;
(5-6)20μL 1.0M的蔗糖溶液加入到分离得到的上述溶液中;
(5-7)在室温下反应20分钟。