1.一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,依次包括以下步骤:
(1)取90μl标准品和样品,加入10μl抗原敏化红细胞,吸打混匀;
(2)37℃水浴30min,以1000g离心力在10℃离心10min,使用200μl/管牛白蛋白-巴比妥缓冲液洗涤两次,最后一次洗涤吸取并废弃上清,尽量吸取完全;
(3)加入80μl预热至37℃的牛白蛋白-巴比妥缓冲液,加入20μl补体,吸打混匀,操作尽量轻柔并确保细胞吹散;
(4)迅速加入细胞计数板中,读数,每间隔1min读取细胞总数一次;
(5)数据处理:
计算公式如下:
S’=Sexp/As (a)
IFc=100%×[(Ss’-Sc’)/(Sr’-Sc’)] (b)
公式中:S’为用As修正Sexp得到的总细胞数最大差值;
As分别为样品、标准品及阴性对照的起始细胞总数;
Sexp分别为根据样品、标准品及阴性对照各自的溶血反应动力学曲线分别计算出相邻3点间的总细胞数最大差值;
IFc为样品激活补体的功能指数;
Ss’为样品总细胞数最大差值;
Sc’为阴性对照总细胞数最大差值;
Sr’为标准品总细胞数最大差值;
按公式(a)分别计算出标准品、样品和阴性对照总细胞数最大差值;按公式(b)计算样品激活补体的功能指数(IFc)。
2.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,步骤(4)中采用细胞计数器进行溶血细胞及完整细胞的计数。
3.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,敏化红细胞所用抗原为重组风疹抗原E1或重组白喉CRM197。
4.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,敏化红细胞的制备步骤具体为:
①O型血红细胞用PBS缓冲液洗涤三次;
②用PBS缓冲液配制为2%红细胞悬液;
③鞣化红细胞:2%红细胞悬液按1:1的体积比加入1.3mg/L鞣酸B液混匀,37℃水浴15min;
④PBS缓冲液洗涤③中鞣化红细胞一次,并用PBS缓冲液将鞣化红细胞稀释为1%;
⑤1%的鞣化红细胞悬液按1:0.02的质量体积比加入抗原,37℃水浴30min;
⑥牛白蛋白-巴比妥缓冲液洗涤⑤制备的红细胞两次;
⑦牛白蛋白-巴比妥缓冲液调整⑥洗涤后红细胞浓度为1%~1.5%,稀释10倍后,细胞计数总细胞数为2500±500个;
至此,敏化红细胞制备完成。
5.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,质控品溶液的制备:牛白蛋白-巴比妥缓冲液稀释IFc%=100%的标准品至40g/L,稀释后标准品与蛋白浓度为40g/L的F(ab’)2片段溶液按1:1比例混合。
6.根据权利要求5所述的一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,质控品溶液的标定:新鲜标准品标定质控品IFc%10次,取平均值为质控品溶液IFc%值,标定后IFc%=48.31%。
7.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,标准品:复溶后新鲜标准品(pH=6.0~7.0)加牛白蛋白-巴比妥缓冲液,调节蛋白浓度为40g/L,4℃保存;
样品pH=7.0,蛋白浓度40g/L。
8.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白Fc段活性检测方法,其特征在于,鞣酸A液:取1mg鞣酸,用10ml pH7.2的PBS缓冲液溶解;1.3mg/L鞣酸B液的制备为:取A液0.1ml,用7.5mlpH7.2的PBS缓冲液溶解。