一种琥珀酸曲格列汀制剂有关物质检测方法与流程

1、本发明涉及一种二肽基肽酶-4抑制剂的检测方法，尤其是涉及一种琥珀酸曲格列汀制剂的有关物质检测方法。

背景技术：

2、琥珀酸曲格列汀(Trelagliptin Succinate)，其化学名称为：：2-({6-[(3R)-3-氨基哌啶-1-基]-3-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶基-1(2H)-基}甲基)-4-氟苯甲腈一琥珀酸盐

3、其结构式为：

4、琥珀酸曲格列汀杂质Ⅲ的结构式为：

5、Trelagliptin(曲格列汀)是一种每周一次的二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂，通过选择性、持续性抑制DPP-4，控制血糖水平。DPP-4是一种酶，能够引发肠促胰岛素(胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP))的失活，而这2种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-4，能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。

6、琥珀酸曲格列汀制剂的有关物质检测方法虽有报道，但未见杂质Ⅲ回收率的相关研究，其检测方法的难度在于杂质Ⅲ的回收率受溶剂影响较大，回收率不容易达到药典规定要求。

技术实现要素：

7、本发明的目的是提供一种能测定琥珀酸曲格列汀制剂的有关物质检测方法。

8、本发明提供一种琥珀酸曲格列汀制剂的有关物质检测方法，采用紫外检测器，该方法采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A为氯化铵缓冲液，流动相B为甲醇-乙腈(15∶85)，且所述的氯化铵缓冲液与乙腈的体积比为15∶85～85∶15，氯化铵缓冲液的pH值为3.5～5.0，氯化铵缓冲液的浓度为0.01～0.1mol/L，检测波长为230nm，甲酸水的浓度为0.01～2.0％。

9、所述的氯化铵缓冲液为氯化铵和甲酸的水溶。氯化铵和甲酸是改性剂，通常加在反相或离子对流动相中，增加离子强度，减少样品中的拖尾峰。

10、所述的氯化铵缓冲液中氯化铵和甲酸的质量体积比为1∶10～3∶10。

11、所述的氯化铵缓冲液为0.03mol/L。

12、所述的氯化铵缓冲液的pH值为4.0。

13、所述的氯化铵缓冲液的pH值用1mol/L氢氧化钠溶液调节。

14、所述的配样溶剂甲酸水的浓度为0.2％。

15、本发明的有关物质检测方法，步骤如下：

(1)杂质储备液：取杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质Ⅶ和杂质Ⅺ各10mg，琥珀酸曲格列汀对照品14mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加50％乙腈水溶液适量，超声使溶解，加50％乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀。取杂质XⅢ对照品10mg，置25ml量瓶中，加乙腈适量，超声使溶解，加乙腈稀释定容至刻度，摇匀，即得各杂质储备液。

(2)混合对照溶液：精密量取各杂质储备液2.5ml，置同一100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为混合对照溶液。

(3)供试品溶液：取本品适量，加溶剂适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

(4)取混合对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液和混合对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算有关物质；

16、色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Phenomenex 250×4.6mm，5μm)，以30mmol/L氯化铵(甲酸0.1％，1mol/L NaOH溶液调pH4.0)作为流动相A，甲醇：乙腈＝15：85为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为每分钟1.0ml，检测波长为230nm，柱温为30℃。

17、其中所述有关物质是指琥珀酸曲格列汀合成过程中带入的杂质，如：溶剂，中间体，副产物和降解产物等，杂质成分为限制成分，测定有关物质的目的在于限制其含量。

18、本发明的有益技术效果：

(1)被分析物中各成分间分离彻底，可操作性强，分析方法的专属性强、准确度和灵敏度高，特别是杂质Ⅲ的准确度高，适用性强，为包装药品安全、有效、可控提供依据。

(2)主峰峰形良好，主峰前后杂质峰与主峰分离度良好，色谱条件的系统适用性良好。

(3)该方法中各杂质的平均回收率均在92.0％～108.0％之间，RSD均小于2.0％。

附图说明：

1、图1为分离度溶液色谱图

2、图2为供试品溶液色谱图

3、图3为氧化破坏溶液色谱图

4、图4为回收率溶液色谱图

5、图5为检测限溶液色谱图

具体实施方式：

1以下实施例用于说明本发明，但不作为对本发明的限制。

2实施例1

3琥珀酸曲格列汀的有关物质的检测方法

4实验仪器及色谱条件：

5岛津高效液相色谱仪，菲罗门C18色谱柱(5μm，250×4.6mm)，水相A(30mmol/L氯化铵水溶液，0.1％甲酸，氢氧化钠调pH至4.0)-有机相B(甲醇∶乙腈＝15∶85)进行梯度洗脱，检测波长为230nm；流速为0.8～1.2ml/min；进样量为5～100μl。

试剂：乙腈(HPLC级)来自MERDA公司，水为娃哈哈水。

5.1配样溶剂的选择

我们通过实验比较了不同的配样溶剂(水、0.1％甲酸水、0.2％甲酸水、0.5％甲酸水、流动相A、20％乙腈水、0.2％磷酸水)对杂质Ⅲ回收率的影响，溶剂为水时的回收率为34.22％，溶剂为0.1％甲酸水时的回收率为97.80％，溶剂为0.2％甲酸水时的回收率为99.64％，溶剂为0.5％甲酸水时的回收率为99.58％，溶剂为流动相A时的回收率为95.51％，流动相为20％乙腈水时的回收率为58.06％，流动相为0.2％磷酸水时的回收率为102.56％。

5.2检测条件的验证

5.2.1专属性

取样品适量，加0.2％甲酸水溶解并稀释制成浓度为2mg/ml的溶液，加30％双氧水约1ml，室温放置3天，取20μl注入色谱仪，记录色谱图(见图3)。结果表明，在此检测条件下，破坏后的样品中其他组分与主峰均可达到基线分离，专属性强。

5.2.2检测限

取杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质Ⅶ和杂质Ⅺ各10mg，琥珀酸曲格列汀对照品14mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加50％乙腈水溶液适量，超声使溶解，加50％乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀。取杂质XIII对照品10mg，置25ml量瓶中，加乙腈适量，超声使溶解，加乙腈稀释定容至刻度，摇匀，即得各杂质储备液。精密量取各杂质储备液2.5ml，置同一100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为混合对照溶液。根据响应值计算各杂质的信噪比，配制各杂质响应值为基线噪音3倍的溶液，各杂质的最低检出量均小于0.03μg/mL

5.2.3回收率

分别配制各杂质浓度为80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL3个浓度的样品，取20μl注入色谱仪，计算回收率。该方法的平均回收率均在90.0％～108.0％之间，RSD均小于2.0％。

上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范

围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。