一种快速检测抗SSB抗体的胶体金试纸条的制作方法

本实用新型属于免疫学检测领域，具体涉及一种快速检测抗SSB抗体的胶体金试纸条。

背景技术：

干燥综合征( syndrome,SS)是一种慢性炎症型自身免疫病，以大量淋巴细胞浸润和产生大量自身抗体为特征。本病主要影响外分泌腺尤其是唾液腺和泪腺，导致腺体机能受损及分泌减少，引起口干、眼干的典型表现，亦可同时影响其他组织器官，导致肾损害、肝脏损害及肺部损害等系统性损害，严重时会危及生命。干燥综合征是一种常见的风湿免疫病，居弥散性结缔组织病之首，发病率高于类风湿性关节炎。据研究报道其全球发病率约为0.1％～4％，而在我国发病率为0.29％～0.77％。该病患病比约为女性:男性＝9:1，任何年龄均可发病，但多见于40岁以后，在老年人群中的患病率达3％～4％，且有明显上升趋势。目前公认发病人群主要为中老年女性。

当今，干燥综合征(SS)的分类诊断是以唇腺的病理组织学检查为标准，该项检查具有一定创伤性，患者的依从性较低，临床上辅助诊断干燥综合征(SS)最常用的血清学指标是抗SSA抗体和抗SSB抗体。多篇文献证实抗SSB/La抗体几乎仅见于干燥综合症(SS,40％～80％)和系统性红斑狼疮(SLE,10％～20％)患者的血清中，但敏感性较低；但是抗SSA/Ro抗体并不是SS干燥综合征(SS)的标志物，其在其它自身免疫性疾病中亦有较高的阳性率，特异性较差。所以与抗SSA抗体相比，抗SSB抗体虽然其灵敏度稍差，但却是干燥综合征(SS)更特异的抗体。

早期已有报导提出干燥综合征(SS)可能发生在有临床表现之前，Isenberg等人于1982年在抗SSB/La抗体阳性且有关节疼痛的病例中发现两年后73.33％的患者病情发展为干燥综合征(SS)，这证明了抗SSB抗体阳性的检查结果可能使干燥综合征(SS)提前数月甚至数年被发现，所以对于抗SSB抗体的早诊断具有非常重要的意义。目前常用的针对特异性自身抗体的检测方法有酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)、线性免疫印迹法(Linear immunoblotting assay,LIA)、放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)、乳胶凝集试验(Latex agglutination test,LAT)、免疫比浊法(Immunoturbidimetric assay,ITA)、胶体金快速免疫层析技术(Immune colloidal goldtechnique,GICT)等方法，这些方法各有优缺点。酶联免疫吸附法(ELISA)可定量、高灵敏和高特异性对特异性抗体进行分类鉴定，但费时，检测成本高，所需仪器昂贵，做特异抗体分类需要纯化的抗原；线性免疫印迹法(LIA)可实现高灵敏高特异性检测，但操作复杂，费时费力，易造成抗原的丢失；放射免疫法(RIA)可高灵敏和特异性地检测出ELISA法检测不到的IgM型抗体，但方法复杂，费时，并有放射性危害；乳胶凝集试验(LAT)和免疫比浊法(ITA)虽操作简单，不需要特殊仪器，成本低，但国内外临床上普遍用于检测类风湿因子(RF)，对结果的判断主观性强；而胶体金免疫层析技术(GICT)具有快速简便、特异性强、敏感性高、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、成本低、不需要专业人员、结果判断直观等优点，能定性和半定量，对于辅助临床诊断而言，该检测结果具有极大的参考价值。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种快速检测抗SSB抗体的胶体金试纸条，试纸条可以实现对干燥综合征(SS)的特异性抗体进行定性或者半定量检测，并且基于此原理可以实现单一项目或多个项目的联合检测，提高对疾病诊断的准确性。

本实用新型的目的通过下述技术方案实现：一种快速检测抗SSB抗体的胶体金试纸条，包括外壳和底板，底板上附着有由左至右紧密相连的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；样品垫与结合垫紧密相连时样品垫压着结合垫，结合垫与硝酸纤维素膜紧密相连时结合垫压着硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜与吸水纸紧密相连时吸水纸压着硝酸纤维素膜；在硝酸纤维素膜上设置检测线(T线)和质控线(C线)，结合垫、检测线、质控线和吸水纸依次排列。

所述的结合垫上设置有胶体金标记的葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal ProteinA,SPA)层。

所述的检测线处设置有SSB抗原层。

所述的质控线处设置有羊抗人IgG层。

所述的外壳为塑料外壳。

所述的底板为PVC底板。

所述的外壳上设置有加样孔和观察孔，加样孔位于样品垫上，观察孔位于硝酸纤维素膜上检测线和质控线区域。

所述的外壳的作用是防止胶体金试纸条受到污染以及便携易用。

所述的样品垫的材质为玻璃纤维素膜。

所述吸水纸为能吸收不低于500μL液体的吸水纸。

与现有技术相比，本实用新型的优点在于：本实用新型的设计简单巧妙，试剂安全无毒，对环境污染小，成本低，便于携带，操作简便，快速显色，结果直观，不需任何仪器，无需专业人员操作。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图；其中，1为样品垫，2为结合垫，3为硝酸纤维素膜，4为吸水纸，5为底板，6为检测线，7为质控线。

图2为本实用新型用于检测样品后的显色示意图；其中，2a为阳性结果示意图，2b为阴性结果示意图，2c为无效结果示意图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本实用新型作进一步详细的描述，但本实用新型的实施方式不限于此。

实施例1

一、本实用新型的结构

一种快速检测抗SSB抗体的胶体金试纸条，如图1所示，包括外壳和底板，底板上附着有由左至右紧密相连的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；样品垫与结合垫紧密相连时样品垫压着结合垫，结合垫与硝酸纤维素膜紧密相连时结合垫压着硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜与吸水纸紧密相连时吸水纸压着硝酸纤维素膜；在硝酸纤维素膜上设置检测线(T线)和质控线(C线)，结合垫、检测线、质控线和吸水纸依次排列。结合垫上设置有胶体金标记的葡萄球菌A蛋白(PROSPEC)层。

所述的检测线处设置有SSB抗原(上海前迪生物科技有限公司)层。

所述的质控线处设置有羊抗人IgG(Solarbio)层。

二、本实用新型的制备过程

(1)喷金

在室温条件下，控制环境湿度在45％～60％，设置喷点参数为2.0μL/cm，用划膜喷金仪将胶体金标记的葡萄球菌A蛋白喷涂于结合垫2上，并将喷好的金标结合垫置于27℃，湿度为20％的干燥箱干燥3小时以上备用。

(2)划膜

将硝酸纤维素膜3非点样面粘贴于PVC(聚氯乙烯)底板5上，置于27℃，湿度20％的干燥箱平衡1小时；将SSB抗原用0.015M、pH7.4的PBS稀释至0.4mg/ml，并将羊抗人IgG用0.015M、pH7.4的PBS稀释至1mg/ml；设定BIODOT仪器喷点量为1.0μL/cm，划涂于硝酸纤维素膜3的特定区域分别作为检测线6和质控线7；再放入27℃烘箱内干燥，湿度为20％干燥48小时以上，备用。

(2)试纸条的组装、切割和包装

1)在已粘贴有硝酸纤维素膜3的PVC底板5上，将金标结合垫粘贴在硝酸纤维素膜3的上方，覆盖硝酸纤维素膜1～3mm；金标结合垫与硝酸纤维素膜3上的检测线相邻；

2)吸水纸4粘贴在硝酸纤维素膜3的上方，覆盖硝酸纤维素膜1～3mm；吸水纸与硝酸纤维素膜3上的质控线相邻；

3)样品垫1粘贴在金标SPA结合垫2的上方，覆盖胶体金结合垫1～3mm；

4)用切条仪把胶体金免疫层析试纸条切成4mm宽的试纸条后放到塑料外壳里组成完整的试纸条成品；外壳的作用是为了防止胶体金试纸条受到污染以及便携易用。外壳上设置有加样孔和观察孔，加样孔位于样品垫1上方，观察孔位于硝酸纤维素膜3上检测线和质控线区域上方。

5)将上述试纸条成品和干燥剂一并装入铝箔袋，密封后贴上标签。

三、本实用新型的应用

(1)血清样本的检测

从医院收集血清分装后于-20℃冻存，检测前取一支已分装的血清移至4℃解冻；将血清用PBS-T稀释200倍，平衡至室温，然后取60μL稀释后的血清滴加到样品垫1中；样品垫1可以将检测液体充分吸收，检测液体先层析至结合垫2上与喷涂的金标SPA完全接触，充分反应，再层析至硝酸纤维素膜3上进行反应。5～8min后观察试纸条T线、C线的出线情况。

具体的结果判断如下：阳性结果：在硝酸纤维素膜的检测线6(SSB抗原包被处)、质控线7(羊抗人IgG包被处)均有红色条带出现，且与自身抗体的含量成正相关。如图2-2a所示。阴性结果：只在硝酸纤维素膜的质控线7(羊抗人IgG包被处)有红色条带出现，如图2-2b所示。无效结果：当硝酸纤维素膜的质控线7(羊抗人IgG包被处)不显示出红色条带，则无论检测线显示出红色条带与否，该试纸条判为无效，如图2-2c所示。

本实用新型采用间接法免疫层析测定，其原理是：在试纸条上预先将胶体金标记的葡萄球菌A蛋白(SPA)喷涂在结合垫上，将SSB抗原和羊抗人IgG预先包被在硝酸纤维素膜上。基于抗原抗体反应的高度特异性，以及葡萄球菌A蛋白(SPA)能与人IgG分子-Fc段发生非特异性结合，且不影响IgG分子-Fab段与抗原结合的活性这一特点，结合抗SSB抗体的本质是一种IgG，采用了免疫层析技术来实现抗SSB抗体的快速检测。当滴加样品检测时，样品垫可以将检测液体充分吸收，检测液体先层析至结合垫上，人血清中的IgG会与结合垫上的金标SPA结合，形成抗体-金标SPA复合物。若样本含有抗SSB抗体，由于毛细作用会在包被有SSB抗原的检测线上富集抗原-抗体-金标SPA复合物，形成肉眼可见的红色条带，过剩的抗体-金标SPA复合物则会在质控线处与羊抗人IgG结合，富集抗抗体-抗体-金标SPA复合物，形成肉眼可见的红色条带；反之若是阴性样本，则包被有SSB抗原的检测线上没有红色条带，只在质控线形成肉眼可见的红色条带。

上述实施例为本实用新型较佳的实施方式，但本实用新型的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离实用新型的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本实用新型的保护范围之内。