检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条的制作方法

本实用新型涉及生物技术领域，尤其是涉及一种广谱检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条。

背景技术：

农药作为防治病虫害的重要工具,已逐渐成为农业生产的一个重要环节。但是出于监管以及使用时的一些漏洞,农药残留问题已逐渐成为现代农业发展的障碍之一。有机磷类与氨基甲酸酯类杀农药以其广谱、高效、易降解、半衰期短等优点广泛应用在现代农业中,给人类带了巨大的经济效益,但同时也产生了环境和食品污染等问题。近年来食品安全重大事件层出不断,导致人们对于国内的食品安全普遍持怀疑态度,如何度过这场“信任危机”是我国食品行业急待解决的问题。

现行农药的检测方法主要包括仪器检测和快速检测,其中仪器检测主要包括气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱一质谱联用技术等在内的诸多仪器检测方法；快速检测主要包括比色法、酶片法及生物传感器法。采用仪器检测蔬菜农药残留时，因对检测人员素质要求高、设备昂贵、检验分析周期长、检验费用多等特点，难于实现市场的快速检测，可以作为检测结果的最终判定检测方法使用；快速检测法操作简便，不需要仪器设备和配制试剂，检测人员不需培训，是市场、车站、乡镇等对检测灵敏度要求较低的场所使用的最佳检测方法。现有的农残速测法与传统的色谱法、光谱法比较,虽然更适用于大量样品筛选及现场检测，但缺点是准确度及灵敏度欠缺。为了保证食品的质量安全,促进我国农产品的对外出口贸易，研究有效的农药残留速测分析方法有着十分重要的意义。

可以看出，现有食品质量监督体系普遍是建立在实验室仪器分析技术的基础上,食品的抽样送检过程,不仅耗时费力,且信息发布严重滞后,很难对消费者质疑的产品进行快速反应。同时,由于对监管体制的不信任,越来越多的消费者期望能自己对产品进行快速定性检测,尤其是对每日生活所必需的水果蔬菜。因此,迫切需要发展快速、灵敏、低成本的食品安全现场快测技术。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种高灵敏、低成本、易操作的一次性检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条。

为实现上述目的，本实用新型可采取下述技术方案：

本实用新型所述的检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条，包括支撑背板和贴附在所述支撑背板上的检测膜，所述检测膜包括其上设有检测带的硝酸纤维素膜，在所述硝酸纤维素膜左侧的支撑背板上粘贴有与所述硝酸纤维素膜相搭接的吸水膜，在所述硝酸纤维素膜右侧的支撑背板上依次搭接设置有底物垫、酶片和样品垫。

所述支撑背板为厚度为0.3~0.7mm的聚氯乙烯塑料薄片，其长度为60~100mm，宽度3~5mm。

所述样品垫为厚0.4~0.7mm，长10~20mm、宽3~5mm的吸水纸；所述酶片为浸泡有乙酰胆碱酯酶的厚0.2~0.5mm，长10~20mm、宽3~5mm的吸水玻璃纤维膜；所述底物垫为浸泡有吲哚乙酸酯的厚0.3~0.6mm，长10~20mm、宽3~5mm的吸水聚酯纤维膜；所述吸水膜的厚度0.3~0.5mm，长10~20mm、宽3~5mm。

所述硝酸纤维素膜为NC膜，其长度10~20mm、宽3~5mm，所述检测带为划在所述硝酸纤维素膜上的固红或固蓝试剂线。

所述相邻两膜片之间的搭接长度为1~2mm 。

本实用新型的优点在于首次利用偶合反应原理制作用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条，试剂条结构简单，制作快捷，操作方便，不需要专用仪器设备，无需配制试剂，检测人员不需培训，通过观察检测带的颜色来间接表明样品中有无农药的存在，非常直观。

附图说明

图1是本实用新型的结构示意图。

图2是放置本实用新型试纸条的检测卡体结构图。

具体实施方式

如图1所示，本实用新型所述的检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条，包括支撑背板1和贴附在支撑背板上的检测膜，本实用新型的检测膜包括其上设有检测带2的硝酸纤维素膜3（硝酸纤维素膜3为NC膜，其长度10~20mm、宽3~5mm），检测带2为划在硝酸纤维素膜上的固红或固蓝试剂线；在硝酸纤维素膜3左侧的支撑背板上粘贴有与硝酸纤维素膜相搭接的吸水膜4，在硝酸纤维素膜右侧的支撑背板上依次搭接设置有底物垫5、酶片6和样品垫7。

支撑背板1采用厚度0.3~0.7mm的聚氯乙烯塑料薄片，其长度为60~100mm，宽度3~5mm。

样品垫7采用厚0.4~0.7mm，长10~20mm、宽3~5mm的吸水纸；

酶片6为浸泡有乙酰胆碱酯酶的厚0.2~0.5mm，长10~20mm、宽3~5mm的吸水玻璃纤维膜；制备时，可将玻璃纤维膜剪成上述尺寸的长条，浸泡在活性2000U/ml的乙酰胆碱酯酶溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽20min，干燥即可；

底物垫5为浸泡有吲哚乙酸酯的厚0.3~0.6mm，长10~20mm、宽3~5mm的吸水聚酯纤维膜DL42，制备时，将聚酯纤维膜剪成长条，浸泡在100mM的吲哚乙酸酯溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽5min，干燥即可；

吸水膜4的厚度0.3~0.5mm，长10~20mm、宽3~5mm。

相邻两膜片之间的搭接长度为1~2mm 。

成型试纸条可放置在扁平薄壳状的检测卡体8中（支撑背板粘贴在卡体底部），如图2所示，在检测卡体8的上表面开设有检测窗孔9和加样孔10，置于检测卡体内的试纸条的样品垫7正对加样孔10，硝酸纤维素膜3上的检测带2 正对检测窗孔9。

本实用新型的反应原理为：根据硝酸纤维素膜上固定的相应浓度的重氮盐（固红或固蓝试剂）与乙酰胆碱酯酶被底物水解释放处理的芳香族化合物发生偶合反应，形成偶氮化合物。若无农药，底物吲哚乙酸酯被乙酰胆碱酯酶水解，释放出亲核芳香族化合物与重氮盐固红或固蓝发生偶合反应，生成棕红色或蓝色的偶氮化合物，与出现在层析介质表面的功能集团形成离子/共价键，因此可以在膜上形成指示带；若有农药，乙酰胆碱酯酶被农药抑制，底物水解受到限制，无法进行下一步的偶合反应，进而在指示带处显示色变弱或无色。通过其最终显示的颜色来指示乙酰胆碱酯酶的有无，从而判断有机磷类农药与氨基甲酸酯类农药的含量。

采用本实用新型的试纸条检测果蔬中农残含量的方法如下：

1、将待测的蔬菜样品剪成1cm左右见方碎片，取1g放入小烧杯中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min~2min，倒出样品提取液，静置3min~5min待用；

其中所用缓冲溶液为：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1L蒸馏水溶解既得；

2、将待检测的样品液从加样孔10中滴入到样品垫7上，由于虹吸作用原理，样品液经过酶片6到达底物垫5，然后向硝酸纤维素膜3上扩散，与固定在硝酸纤维素膜3上的固红或固蓝试剂（检测带2）发生偶合反应。

3、25℃条件下，5~15分钟内肉眼观察检测窗孔9内检测带2的颜色变化，主要反应结果有以下两种情况：

a、当检测带2显示出棕红色或蓝色印记带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品农药残留不超标；

b、当检测带2不显示颜色或淡黄色，表示检测结果为阳性，说明被检测样品农药残留超标。