本发明涉及一种氯霉素电化学传感器检测方法，属于食品安全检测技术领域，特别是一种氯霉素的快速灵敏检测方法。
背景技术：
氯霉素(chloramphenicol，(1r,2r)-n-[α-(羟基甲基)-β-羟基-对硝基苯乙基]-2,2-二氯乙酰胺)，最初是从由委内瑞拉链霉菌培养液中提取制得。1948年其结构被确定并成为第一种完全由人工合成的抗生素，是一种高效广谱抗生素。它由于抑菌效果好，价格低曾被广泛应用于各类动物源性食品加工过程中。也正因为其应用广泛，滥用现象日趋严重，氯霉素对造血系统的严重损伤也越来越引起人们的重视。中华人民共和国农业部规定氯霉素在动物源性食品中不得检出。
目前国内外有关食品中氯霉素检测方法大都采用液相色谱法或液相、气相色谱与质谱联用的方法进行定性、定量的检测，但上述几种检测方法所使用的设备价格昂贵，分析时间长并且需要复杂的样品前处理技术。电化学传感器具有反映速度快、准确、稳定性好、成本低等特点。因此，以有序介孔碳@多巴胺复合物膜和β-环糊精修饰电极，构建高灵敏电化学传感器，用于食品中痕量氯霉素的定量检测，具有重要意义。本发明以有序介孔碳@多巴胺复合物膜和β-环糊精修饰电极，建立可用于痕量氯霉素检测的电化学传感器未见报道。
技术实现要素：
为了解决上述问题，本发明提供了一种氯霉素电化学传感器检测方法，目的在于克服传统的氯霉素检测方法存在的检测时间长、仪器价格昂贵、前处理烦琐等缺陷，提供一种氯霉素的快速灵敏检测方法。
本发明采取的技术方案是：
一种氯霉素电化学传感器检测方法，步骤如下：
1)电化学传感器电极修饰：
将100～500mg有序介孔碳cmk-3，50～200mg盐酸多巴胺和100～120mgtris(三羟甲基氨基甲烷)加入到100ml超纯水中，冰浴条件下超声分散1～5min，室温搅拌8～10h，过滤、洗涤、干燥后得到cmk-3@pda复合材料。将8～12μl浓度为1.5mgml-1的cmk-3@pda复合材料溶液滴涂在裸玻碳电极表面，室温下晾干，得到修饰后的cmk-3@pda/gce电极；将cmk-3@pda/gce电极浸入到浓度为0.5～1.0moll-1naoh溶液中利用循环伏安法在-1.25v－+0.8v电位范围内以50mvs-1的速率扫描6～12圈。然后将cmk-3@pda/gce电极浸入到β-环糊精溶液(称取0.227gβ-环糊精，用0.1moll-1ph7.0的磷酸缓冲溶液溶解，转移到容量瓶中定容到100ml，得到2.0mmoll-1的β-环糊精溶液)中用循环伏安法在-2.0v－+2.5v范围内以100mvs-1的速率扫描6～8圈，得到有序介孔碳@多巴胺复合物膜和β-环糊精双重修饰电极(β-cd/cmk-3@pda/gce)。
2)将饱和甘汞电极和铂电极分别作为参比电极和辅助电极，步骤1)制备的修饰电极β-cd/cmk-3@pda/gce作为工作电极构成三电极体系，利用方波伏安法在电位窗口0－-0.2v，电位增量2.0mvs-1，方波振幅100mv，方波频率20hz的条件下，将工作电极浸入用0.2moll-1ph7.0的磷酸盐缓冲溶液配制的不同浓度氯霉素标准溶液中孵育，记录相应电流值ip。
3)以氯霉素标准溶液浓度c为横坐标，电流值为纵坐标，绘制ip‐c工作曲线。按照下列公式计算不同电流值对应的样品中氯霉素的含量：
ip＝0.0441c－0.0205
式中：
ip——样品提取液的电流值(μa)；
c——样品提取液的浓度(μmoll-1)；
4)分析物中按重量体积比(g/ml)1:1加入乙酸乙酯溶液涡旋离心重复提取三次，合并提取液用氮气吹干。用10ml0.2moll-1ph7.0的磷酸盐缓冲溶液溶解氮吹之后得到的剩余物，0.22μm滤膜过滤得样品提取液；将样品提取液代替氯霉素标准溶液,重复步骤2)操作，根据电流值由标准曲线计算出分析物中氯霉素含量。
本发明的优点和积极效果是：
1.本发明提供的cmk-3@pda复合材料具有较高的选择性，制备方法简单，具有较大的比表面积，导电性能好等优点，并且大大改善了有序介孔碳材料分散性差的问题。
2.本发明将cmk-3@pda复合材料和β-环糊精共同修饰电极，建立了对氯霉素具有高灵敏度的电化学传感器检测方法。该方法的最低检出限为64.6μg/kg，能够满足检测需要，分析时间比传统的检测方法缩短1.0h左右，适用于快速检测氯霉素。
3.本发明制备的电化学传感器成本较低，并且前处理简单、灵敏度高、分析时间短、实验操作简单，适用于各种食品中氯霉素的快速检测。
本发明与现有其他检测方法的比较：
附图说明
图1为氯霉素标准曲线
由图1可知，该方法的线性范围是5.0×10-7-5.0×10-5mol/l，最低检出限为2.0×10-7mol/l(64.6μg/kg)。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明；下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明是将cmk-@pda复合物和β-环糊精共同修饰电极，从而建立对氯霉素具有高灵敏度的快速检测方法。其具体实施例为：
1.电化学传感器电极修饰：
将100mg有序介孔碳cmk-3(购买于南京先锋纳米技术有限公司)，200mg盐酸多巴胺da和120mgtris(三羟甲基氨基甲烷)加入到100ml超纯水中，冰浴条件下超声分散1min，室温搅拌10h。过滤、洗涤、干燥后得到cmk-3@pda复合物材料。将8μl浓度为1.5mgml-1的cmk-3@pda复合材料溶液滴涂在裸玻碳电极表面，在室温下晾干。将上述修饰后的玻碳电极(cmk-3@pda/gce)浸入到0.5moll-1naoh溶液中利用循环伏安法在-1.25v－+0.8v电位范围内以50mvs-1的速率扫描6圈。然后将cmk-3@pda/gce电极浸入到β-环糊精溶液(称取0.227gβ-环糊精，用0.1moll-1ph7.0的磷酸缓冲溶液溶解，转移到容量瓶中定容到100ml,得到2.0mmoll-1的β-环糊精溶液)中用循环伏安法在-2.0v－+2.5v范围内以100mvs-1的速率扫描6圈，得到有序介孔碳@多巴胺复合物膜和β-环糊精双重修饰电极(β-cd/cmk-3@pda/gce)。
2.将市售饱和甘汞电极和铂电极分别作为参比电极和辅助电极，本实验修饰后所得的电极β-cd/cmk-3@pda/gce作为工作电极构成三电极体系，利用方波伏安法在电位窗口0－-0.2v，电位增量2.0mvs-1，方波振幅100mv，方波频率20hz的条件下，将工作电极浸入用0.2moll-1ph7.0的磷酸盐缓冲溶液配制的浓度分别为0.5，5，10，20，50，100，200和500μmoll-1的氯霉素标准溶液中孵育，记录相应电流值ip。
3.以氯霉素标准溶液浓度c为横坐标，电流值为纵坐标，绘制ip‐c工作曲线。按照下列公式计算不同电流值对应的样品中氯霉素的含量：
ip＝0.0441c－0.0205
式中：
ip——样品提取液的电流值(μa)；
c——样品提取液的浓度(μmoll-1)；
4.准确称取蜂蜜10g，加入10ml乙酸乙酯溶液涡旋离心，重复提取三次，合并提取液用氮气吹干。用10ml0.2moll-1ph7.0的磷酸盐缓冲溶液溶解氮吹之后得到的剩余物，用0.22μm滤膜过滤得样品提取液。
5.将样品提取液代替标样稀释液，重复步骤2)操作，根据上述计算公式得出中氯霉素提取液浓度为8.3×10-7moll-1，计算出蜂蜜中氯霉素含量为268μgkg-1。