本发明涉及基因检测技术领域，具体来说，涉及一种区分1型和2型糖尿病的试剂盒。
背景技术：
糖尿病已成为威胁人类健康的重大疾病之一。据世卫组织统计，2014年，全球糖尿病患者约为4.22亿，预计这一数字在2040年将升至6.14亿。中国是世界上糖尿病患病的第一大国。在中国，糖尿病患病人数在2015年也升至1.13亿，世界排名居于首位。
其中绝大多数为2型糖尿病，其次为1型糖尿病。两种类型的糖尿病的临床表现不同。1型糖尿病大多数为40岁以下发病，20岁以下的青少年及儿童绝大多数为1型糖尿病，仅极少数例外。2型糖尿病大多数为40岁以上的中老年人，50岁以上的人患1型糖尿病很少。发生糖尿病时明显超重或肥胖者大多数为2型糖尿病，肥胖越明显，越易患2型糖尿病。1型糖尿病人在起病前体重多属正常或偏低。1型糖尿病均有明显的临床症状如多饮、多尿、多食等，即“三多”，而2型糖尿病常无典型的“三多”症状。为数不少的2型糖尿病人由于临床症状不明显，常常难以确定何时起病，有的只是在检查血糖后才知道自己患了糖尿病。临床表现很难判断是那种类型糖尿病的患者，常常需要进一步的检查，包括：空腹及餐后2小时胰岛素或c肽检查：可以了解患者体内胰岛素是绝对缺乏还是相对缺乏。各种免疫抗体的检查：如gad抗体、ica抗体等。但是还是有很多人存在不典型的症状，无法被确诊为1型或者2型糖尿病，为了让这部分症状不典型的糖尿病人能够得到准确而快速的确诊，需要别的技术手段来诊别糖尿病类型。
针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。
技术实现要素：
针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种区分1型和2型糖尿病的基因多肽性检测试剂盒，能够补充、辅助鉴别糖尿病的患病类型。另一方面，本发明还提供了一种用于区分1型和2型糖尿病的基因多肽性检测的基因芯片。
1型糖尿病和2型糖尿病都为多基因遗传的复杂疾病，它们的发生有一定的遗传易感性。通过易感基因检测可以区分糖尿病类型。易感基因检测方法有很多种，其中高准确性、高通量、经济实惠的就数飞行时间质谱检测。其原理是：分子量大小不同的dna片段在相同的电场作用下，飞行时间不同而得以区分。该方法目前很成熟，是snp分型的金标准。本发明关键之处在于易感基因的选择和引物设计，是保证检验准确性的关键。本发明确立了本产品所检测的基因和snp位点。并设计了一套30个snp位点的扩增引物和单碱基延伸引物。
为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种区分1型和2型糖尿病的snp标志物，包括人基因组的30个snp位点，所述30个snp位点是rs3788013、rs4788084、rs425105、rs12708716、rs1264813、rs2395029、rs9388489、rs12722495、rs1893217、rs7454108、rs763361、rs2069762、rs689、rs3129889、rs10509540、rs1465788、rs11594656、rs11755527、rs5753037、rs3825932、rs7202877、rs1990760、rs17574546、rs2187668、rs3087243、rs2281808、rs2292239、rs4948088、rs3024505、rs2476601。
进一步地，所述检测rs3788013的pcr扩增引物序列为seqidno：1和seqidno：2，单碱基延伸引物的序列为seqidno：61；
所述检测rs4788084的pcr扩增引物序列为seqidno：3和seqidno：4，单碱基延伸引物的序列为seqidno：62；
所述检测rs425105的pcr扩增引物序列为seqidno：5和seqidno：6，单碱基延伸引物的序列为seqidno：63；
所述检测rs12708716的pcr扩增引物序列为seqidno：7和seqidno：8，单碱基延伸引物的序列为seqidno：64；
所述检测rsl264813的pcr扩增引物序列为seqidno：9和seqidno：10，单碱基延伸引物的序列为seqidno：65；
所述检测rs2395029的pcr扩增引物序列为seqidno：11和seqidno：12，单碱基延伸引物的序列为seqidno：66；
所述检测rs9388489的pcr扩增引物序列为seqidno：13和seqidno：14，单碱基延伸引物的序列为seqidno：67；
所述检测rs12722495的pcr扩增引物序列为seqidno：15和seqidno：16，单碱基延伸引物的序列为seqidno：68；
所述检测rs1893217的pcr扩增引物序列为seqidno：17和seqidno：18，单碱基延伸引物的序列为seqidno：69；
所述检测rs7454108的pcr扩增引物序列为seqidno：19和seqidno：20，单碱基延伸引物的序列为seqidno：70；
所述检测rs763361的pcr扩增引物序列为seqidno：21和seqidno：22，单碱基延伸引物的序列为seqidno：71；
所述检测rs2069762的pcr扩增引物序列为seqidno：23和seqidno：24，单碱基延伸引物的序列为seqidno：72；
所述检测rs689的pcr扩增引物序列为seqidno：25和seqidno：26，单碱基延伸引物的序列为seqidno：73；
所述检测rs3129889的pcr扩增引物序列为seqidno：27和seqidno：28，单碱基延伸引物的序列为seqidno：74；
所述检测rs10509540的pcr扩增引物序列为seqidno：29和seqidno：30，单碱基延伸引物的序列为seqidno：75；
所述检测rs1465788的pcr扩增引物序列为seqidno：31和seqidno：32，单碱基延伸引物的序列为seqidno：76；
所述检测rs11594656的pcr扩增引物序列为seqidno：33和seqidno：34，单碱基延伸引物的序列为seqidno：77；
所述检测rs11755527的pcr扩增引物序列为seqidno：35和seqidno：36，单碱基延伸引物的序列为seqidno：78；
所述检测rs5753037的pcr扩增引物序列为seqidno：37和seqidno：38，单碱基延伸引物的序列为seqidno：79；
所述检测rs3825932的pcr扩增引物序列为seqidno：39和seqidno：40，单碱基延伸引物的序列为seqidno：80；
所述检测rs7202877的pcr扩增引物序列为seqidno：41和seqidno：42，单碱基延伸引物的序列为seqidno：81；
所述检测rs1990760的pcr扩增引物序列为seqidno：43和seqidno：44，单碱基延伸引物的序列为seqidno：82；
所述检测rs17574546的pcr扩增引物序列为seqidno：45和seqidno：46，单碱基延伸引物的序列为seqidno：83；
所述检测rs2187668的pcr扩增引物序列为seqidno：47和seqidno：48，单碱基延伸引物的序列为seqidno：84；
所述检测rs3087243的pcr扩增引物序列为seqidno：49和seqidno：50，单碱基延伸引物的序列为seqidno：85；
所述检测rs2281808的pcr扩增引物序列为seqidno：51和seqidno：52，单碱基延伸引物的序列为seqidno：86；
所述检测rs2292239的pcr扩增引物序列为seqidno：53和seqidno：54，单碱基延伸引物的序列为seqidno：87；
所述检测rs4948088的pcr扩增引物序列为seqidno：55和seqidno：56，单碱基延伸引物的序列为seqidno：88；
所述检测rs3024505的pcr扩增引物序列为seqidno：57和seqidno：58，单碱基延伸引物的序列为seqidno：89；
所述检测rs2476601的pcr扩增引物序列为seqidno：59和seqidno：60，单碱基延伸引物的序列为seqidno：90。
根据本发明的另一方面，提供了一种区分1型和2型糖尿病的试剂盒，包括检测人基因组的30个snp位点的pcr扩增引物和单碱基延伸引物，所述30个snp位点是rs3788013、rs4788084、rs425105、rs12708716、rs1264813、rs2395029、rs9388489、rs12722495、rs1893217、rs7454108、rs763361、rs2069762、rs689、rs3129889、rs10509540、rs1465788、rs11594656、rs11755527、rs5753037、rs3825932、rs7202877、rs1990760、rs17574546、rs2187668、rs3087243、rs2281808、rs2292239、rs4948088、rs3024505、rs2476601。
进一步地，所述检测rs3788013的pcr扩增引物序列为seqidno：1和seqidno：2，单碱基延伸引物的序列为seqidno：61；
所述检测rs4788084的pcr扩增引物序列为seqidno：3和seqidno：4，单碱基延伸引物的序列为seqidno：62；
所述检测rs425105的pcr扩增引物序列为seqidno：5和seqidno：6，单碱基延伸引物的序列为seqidno：63；
所述检测rs12708716的pcr扩增引物序列为seqidno：7和seqidno：8，单碱基延伸引物的序列为seqidno：64；
所述检测rs1264813的pcr扩增引物序列为seqidno：9和seqidno：10，单碱基延伸引物的序列为seqidno：65；
所述检测rs2395029的pcr扩增引物序列为seqidno：11和seqidno：12，单碱基延伸引物的序列为seqidno：66；
所述检测rs9388489的pcr扩增引物序列为seqidno：13和seqidno：14，单碱基延伸引物的序列为seqidno：67；
所述检测rs12722495的pcr扩增引物序列为seqidno：15和seqidno：16，单碱基延伸引物的序列为seqidno：68；
所述检测rs1893217的pcr扩增引物序列为seqidno：17和seqidno：18，单碱基延伸引物的序列为seqidno：69；
所述检测rs7454108的pcr扩增引物序列为seqidno：19和seqidno：20，单碱基延伸引物的序列为seqidno：70；
所述检测rs763361的pcr扩增引物序列为seqidno：21和seqidno：22，单碱基延伸引物的序列为seqidno：71；
所述检测rs2069762的pcr扩增引物序列为seqidno：23和seqidno：24，单碱基延伸引物的序列为seqidno：72；
所述检测rs689的pcr扩增引物序列为seqidno：25和seqidno：26，单碱基延伸引物的序列为seqidno：73；
所述检测rs3129889的pcr扩增引物序列为seqidno：27和seqidno：28，单碱基延伸引物的序列为seqidno：74；
所述检测rs10509540的pcr扩增引物序列为seqidno：29和seqidno：30，单碱基延伸引物的序列为seqidno：75；
所述检测rs1465788的pcr扩增引物序列为seqidno：31和seqidno：32，单碱基延伸引物的序列为seqidno：76；
所述检测rs11594656的pcr扩增引物序列为seqidno：33和seqidno：34，单碱基延伸引物的序列为seqidno：77；
所述检测rs11755527的pcr扩增引物序列为seqidno：35和seqidno：36，单碱基延伸引物的序列为seqidno：78；
所述检测rs5753037的pcr扩增引物序列为seqidno：37和seqidno：38，单碱基延伸引物的序列为seqidno：79；
所述检测rs3825932的pcr扩增引物序列为seqidno：39和seqidno：40，单碱基延伸引物的序列为seqidno：80；
所述检测rs7202877的pcr扩增引物序列为seqidno：41和seqidno：42，单碱基延伸引物的序列为seqidno：81；
所述检测rs1990760的pcr扩增引物序列为seqidno：43和seqidno：44，单碱基延伸引物的序列为seqidno：82；
所述检测rs17574546的pcr扩增引物序列为seqidno：45和seqidno：46，单碱基延伸引物的序列为seqidno：83；
所述检测rs2187668的pcr扩增引物序列为seqidno：47和seqidno：48，单碱基延伸引物的序列为seqidno：84；
所述检测rs3087243的pcr扩增引物序列为seqidno：49和seqidno：50，单碱基延伸引物的序列为seqidno：85；
所述检测rs2281808的pcr扩增引物序列为seqidno：51和seqidno：52，单碱基延伸引物的序列为seqidno：86；
所述检测rs2292239的pcr扩增引物序列为seqidno：53和seqidno：54，单碱基延伸引物的序列为seqidno：87；
所述检测rs4948088的pcr扩增引物序列为seqidno：55和seqidno：56，单碱基延伸引物的序列为seqidno：88；
所述检测rs3024505的pcr扩增引物序列为seqidno：57和seqidno：58，单碱基延伸引物的序列为seqidno：89；
所述检测rs2476601的pcr扩增引物序列为seqidno：59和seqidno：60，单碱基延伸引物的序列为seqidno：90。
进一步地，所述试剂盒还包括pcr缓冲液、mgcl2溶液、dntp混合液、taq酶。
本发明的有益效果：本发明确立了检测1型糖尿病和2型糖尿病的基因和snp位点，并设计了一套30个位点的扩增引物和单碱基延伸引物，可以补充、辅助鉴别糖尿病的患病类型，填补市场没有基因水平检测鉴别1型和2型糖尿病产品的空白。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本方面实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中所涉及到的各种试剂、机械未经特殊说明均可通过商业途径获得。
本发明实施例的样本来自近10年来协和医科大学基础研究所提供的已经经其他途径确诊为1型糖尿病或2型糖尿病的病例患者，排除其他先天或后天的基因缺陷影响，并准备了与病例患者年龄、性别匹配的对照。
实施例一：dna提取
1.1唾液dna提取
利用口腔拭子基因组dna提取试剂盒(品牌：康为世纪，货号：cw0530m)进行唾液dna提取。
在buffergw1和buffergw2中加入一定量的无水乙醇。从采样管中取500μl唾液样本，加入300μlbuffergr、20μlproteinasek和300μlbuffergl，震荡混匀，56℃震荡孵育15min，加入300μl无水乙醇，震荡混匀；将750μl该混匀溶液加入到收集管的吸附柱中，12000rpm离心1min，弃液；向吸附柱中加入400μlbuffergw1，12000rpm离心1min，弃液；向吸附柱中加入400μlbuffergw2，12000rpm离心1min，弃液；12000rpm离心2min，静置晾干；将吸附柱置于新的1.5ml离心管中，悬空加入40μlbufferge，静置5min，12000rpm离心1min，收集dna溶液，质检，于4℃保存。
其中，buffergw1、buffergw2、buffergr、proteinasek、buffergl、bufferge、收集管、采样管、吸附柱均由康为世纪口腔拭子基因组dna提取试剂盒直接提供。
1.2血卡dna提取
使用打孔器在干血卡上血斑较厚区域打孔，取2片1mm大小的血片于1.5ml离心管中；加入200μlddh2o，室温震荡10min，弃液；加入50μlbufferb2，95℃孵育15min，弃液；加入40μlbufferb3，室温震荡10min，质检，4℃保存。
其中，bufferb2、bufferb3由血液dna提取试剂盒康为血液基因组柱式小量提取试剂盒(cw2087)提供。
实施例二：pcr扩增
将实施例一中1.1或1.2提取的待测样本的dna加入到384孔板中，进行多重pcr扩增。按照多重pcr扩增的反应体系(共5μl)加入到每个反应孔中，反应体系：
模板dna：1μl，
引物mix：1μl，
10×pcr缓冲液：0.5μl，
25mmmgcl2：0.4μl，
25mmdntp：0.1μl，
ddh2o1.8μl，
余量为hotstartaq酶(5u/μl)。
反应体系配制好后使用pcr封口膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于abi9700pcr仪上进行如下反应：
95℃条件下预变性2min；
95℃30s，56℃30s，72℃1min，45个循环；
72℃5min，4℃保持；
得到pcr扩增产物，离心备用。
实施例三：sap消化反应
利用sequenom平台配套试剂和操作步骤，完成待测样本snp位点分型结果。实施例二中得到的pcr扩增产物，按照sap消化的反应体系(2μl)加入到每个反应孔中，反应体系：
sap×buffer：0.17μl，
sapenzyme(1u/μl)：0.3μl，
ddh2o：1.53μl；
反应体系配制好后使用pcr封口膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于abi9700pcr仪上进行如下反应：
37℃，40min；85℃，5min；4℃保持；
得到碱性磷酸化酶处理后的pcr产物，离心备用。
实施例四：单碱基延伸反应
利用sequenom平台配套试剂和操作步骤，完成待测样本snp位点分型结果。将步骤实施例三中得到的碱性磷酸化酶处理后的pcr产物，按照单碱基延伸反应体系(2μl)加入到对应的每个反应孔中，反应体系：
延伸引物mix：0.94μl，
gold×buffer(iplexterminationmix，终止混合物)：0.2μl，
extensionmix(延伸缓冲液)：0.2μl，
iplexenzyme(延伸酶)：0.041μl，
ddh2o：0.619μl；
反应体系配制好后使用pcr封口膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于abi9700pcr仪上进行如下反应：
94℃30s；
【94℃5s，(52℃5s，80℃5s，5个内部循环)】40个外部循环；
72℃3min，4℃保持；
得到单碱基延伸产物，离心备用。
实施例五：树脂纯化
利用sequenom平台配套试剂和操作步骤，完成待测样本snp位点分型结果。将实施例四中的单碱基延伸产物的384孔板，轻轻撕下封口膜后，每孔加入16μlddh2o；取干净的a4纸将6mg384板置于其上，用小勺取适量纯化树脂；用塑料板反复左右推平纯化树脂，压实，使每孔树脂含量均匀；将384板倒置压在6mg384板上，两板对调，6mg板在上，敲打6mg板背面，使树脂落入装有单碱基延伸产物的384孔板中；封口膜封好后，15rpm上下颠倒混匀30min，充分纯化。
实施例六：芯片点样
将实施例五中的384孔板离心，启动massarraynanodispenserrs1000点样仪，将树脂纯化后的延伸产物移至384孔spectrochip芯片上；点样后的芯片使用maldi-tof分析，检测结果使用typer4.0软件分型并输出结果。根据该结果得到1型糖尿和2型病诊断结果。
实施例七：结果分析
采集51例1型糖尿病患者和51例2型糖尿病患者的血液按照实施例一至六进行30个snp位点的分型。
所有待测样本的30个snp位点的分型结果均与其dna测序结果一致，其中，某一个待测样本(待测样本中的1例1型糖尿病患者)的snp位点分型结果如表1所示。
表1.其中1例糖尿病患者分型结果
经过分析后，51例i型糖尿病样本有48例正确检出，51例ii型糖尿病样本47例正确检出，准确性达到93％。可见，该30个snp位点具有较高的实用性。本发明所述的试剂盒能够高效率地对30个糖尿病易感性相关的snp基因进行扩增，通过飞行时间质谱检测进行检测分型，实验结果准确、可重现性好，本发明的试剂盒用于辅助鉴别1型和2型糖尿病具有很大的优势和潜力。
序列表
<110>牛晓强
<120>区分1型和2型糖尿病的snp标志物及试剂盒
<160>90
<210>1
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs3788013上游引物
<400>
acgttggatgagaggtcagagtacacatgg30
<210>2
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs3788013下游引物
<400>
acgttggatgagtcttgacacctgcaagag30
<210>3
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs4788084上游引物
<400>
acgttggatgagggactgggtgctctaatc30
<210>4
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs4788084下游引物
<400>
acgttggatgatacccatgcccctgatttc30
<210>5
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs425105上游引物
<400>
acgttggatgatggatgcctcaaaagtccc30
<210>6
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs425105下游引物
<400>
acgttggatgggagatggacaggagttttg30
<210>7
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs12708716上游引物
<400>
acgttggatgtctcgggtcttcagctagtc30
<210>8
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs12708716下游引物
<400>
acgttggatgacttcatcctcactgactcc30
<210>9
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1264813上游引物
<400>
acgttggatgtctgctgacccctattcctc30
<210>10
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1264813下游引物
<400>
acgttggatggagtgatgggagaccttttc30
<210>11
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2395029上游引物
<400>
acgttggatgtggtctctggacacatactg30
<210>12
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2395029下游引物
<400>
acgttggatgggacaaatgagtgcccattg30
<210>13
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs9388489上游引物
<400>
acgttggatgcagattgcagaaggtgatag30
<210>14
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs9388489下游引物
<400>
acgttggatgttgaagtccctaacagtccc30
<210>15
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs12722495上游引物
<400>
acgttggatgcctagtgaatcagaccaacc30
<210>16
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs12722495下游引物
<400>
acgttggatgccttccagttccttgaatac30
<210>17
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1893217上游引物
<400>
acgttggatggctctcacttgtcaccattc30
<210>18
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1893217下游引物
<400>
acgttggatgtcactgctttcatctgcagg30
<210>19
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs7454108上游引物
<400>
acgttggatgtccaagttctgacttccctc30
<210>20
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs7454108下游引物
<400>
acgttggatgaaaggcagctatctgtggac30
<210>21
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs763361上游引物
<400>
acgttggatggagaaggttggatagttgac30
<210>22
<211>30
<212>dna
<213>人工序列
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<211>30
<212>dna
<213>人工序列
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<211>30
<212>dna
<213>人工序列
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<211>30
<212>dna
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<213>人工序列
<223>rs3024505下游引物
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<213>人工序列
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<211>30
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2476601下游引物
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<212>dna
<213>人工序列
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<212>dna
<213>人工序列
<223>rs12708716单碱基延伸引物
<400>
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<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1264813单碱基延伸引物
<400>
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<210>66
<211>18
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2395029单碱基延伸引物
<400>
aaacacattacagctgcc18
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<212>dna
<213>人工序列
<223>rs9388489单碱基延伸引物
<400>
tcacactggctaaaaaatc19
<210>68
<211>19
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs12722495单碱基延伸引物
<400>
gtttcaatcctaagtgcga19
<210>69
<211>20
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1893217单碱基延伸引物
<400>
acactcttcttcctctacct20
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<211>20
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs7454108单碱基延伸引物
<400>
cctgacttccctccctaata20
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<211>21
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs763361单碱基延伸引物
<400>
ccgagaagtcccatctctacc21
<210>72
<211>21
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2069762单碱基延伸引物
<400>
cacatgttcagtgtagtttta21
<210>73
<211>22
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs689单碱基延伸引物
<400>
ccccgcctcagccctgcctgtc22
<210>74
<211>22
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs3129889单碱基延伸引物
<400>
ccacactatcatgaatagttta22
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<211>23
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs10509540单碱基延伸引物
<400>
gtgattctgactcagagaaatta23
<210>76
<211>23
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1465788单碱基延伸引物
<400>
aatgtggaagtctacactgaata23
<210>77
<211>24
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs11594656单碱基延伸引物
<400>
ctattttctcactatgatgccttc24
<210>78
<211>25
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs11755527单碱基延伸引物
<400>
ccccccacccagttgtccatacttt25
<210>79
<211>25
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs5753037单碱基延伸引物
<400>
attgtaatattccctttatcaaaaa25
<210>80
<211>25
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs3825932单碱基延伸引物
<400>
ggaaaattgactaccagtttgcctc25
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<211>26
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs7202877单碱基延伸引物
<400>
ccctcaaaagccacacacgccctgac26
<210>82
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<212>dna
<213>人工序列
<223>rs1990760单碱基延伸引物
<400>
aactttacattgtaagagaaaacaaa26
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<211>27
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs17574546单碱基延伸引物
<400>
ttcaggttgtttccttctttcatcctc27
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<211>27
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2187668单碱基延伸引物
<400>
aaaaatcattttaccacatggtcctca27
<210>85
<211>27
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs3087243单碱基延伸引物
<400>
cagtactgctatgtctgtgttaaccca27
<210>86
<211>27
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2281808单碱基延伸引物
<400>
gataaacattagtttacaatgtggatt27
<210>87
<211>28
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2292239单碱基延伸引物
<400>
acaactagtgaagagacttttgaatcta28
<210>88
<211>15
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs4948088单碱基延伸引物
<400>
tggcagcagaggtgg15
<210>89
<211>20
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs3024505单碱基延伸引物
<400>
gagctgagtaaacactagtc20
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<211>21
<212>dna
<213>人工序列
<223>rs2476601单碱基延伸引物
<400>
caataaatgattcaggtgtcc21