本发明涉及害虫化学防治领域，具体地说，涉及一种测定杀虫剂对二化螟的生物活性的方法。
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：杀虫剂的生物测定是利用昆虫对杀虫剂的反应，来鉴别某种农药或化合物的生物活性，是测定农药对昆虫毒力与药效的一种基本方法。它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。一个好的生物测定方法应具备易于操作、结果准确、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。二化螟chilosuppressalis(walker)，属鳞翅目螟蛾科，是水稻的重要害虫之一，可为害水稻形成枯鞘、枯心、死孕穗、白穗和虫伤株等症状，对水稻生产造成重大损失。近年来，由于气候、耕作制度和栽培方式的改变，二化螟种群呈迅猛上升势头，尤其在1998年以后，已成为长江流域及江南稻区的首要害虫，严重阻碍了水稻的稳产和高产。目前，在杀虫剂对二化螟的生物活性的测定方法中，主要有点滴法、稻苗浸渍法和人工饲料药膜法。点滴法是fao推荐的方法。但该法需要精密的点滴工具(例如微量点滴仪)，且仅适用于触杀性药剂，只能反应杀虫剂的触杀毒力，不能体现杀虫剂的胃毒作用，不适于检测胃毒作用为主的药剂的毒力和活性。稻苗浸渍法可以同时检测胃毒和触杀作用，充分反映杀虫剂的毒力。但是，该法需要预先准备好生长3周左右的水稻苗，药后5-6天检查试验结果，显得费时耗工，比较繁琐，而且在处理3-4天后稻苗即开始变黄枯萎，对试虫的存活不利从而影响试验结果的准确性。人工饲料药膜法也可以同时检测胃毒和触杀作用，可以充分反映杀虫剂的毒力。但该法的主要缺陷是药剂在饲料表面分布不均匀，而且选用初孵幼虫为试虫，在调查试验结果时因虫体太小而难以准确判断试虫的存活情况。技术实现要素：针对现有技术的不足，本发明建立了测定杀虫剂对二化螟的生物活性的新方法——人工饲料浸药法，该方法具有操作简便、快速、准确且适用性广的优点。本发明采用的技术方案如下：一种测定杀虫剂对二化螟的生物活性的方法，测定步骤包括：配制不同浓度药液，制备人工饲料，把人工饲料切成薄片，将人工饲料薄片放入药液中浸泡若干时间后捞出晾干，然后把带药的人工饲料薄片挑入于玻璃管中并接入二化螟幼虫，若干时间后检查各个浓度药液处理的人工饲料薄片上的二化螟幼虫死亡情况，统计分析获得毒力回归线和lc50值等生物活性资料。进一步地，该方法的具体步骤如下：(1)人工饲料制备：①a相的制备：在1000ml水中加入135克麦胚粉、120克蔗糖、45克纤维素、155克酪蛋白和20克酵母粉，搅拌均匀后置于自动蒸汽灭菌器中124℃灭菌30分钟；将180克琼脂放入2000毫升水中，于微波炉中煮熔为止，将煮熔的琼脂溶液加入至上述灭菌后的饲料中并搅拌均匀；②b相的制备：把15克对羟基苯甲酸丙酯钠、15克山梨酸钾、2.5克氯霉素、4克韦氏盐、30克加强维生素混合液、4克氯化胆碱、7毫升40％甲醛、10毫升菜子油和5克胆固醇放入含1000毫升灭菌水的烧杯中，在磁力搅拌器上搅拌溶解20分钟；③待a相的温度下降至60℃时加入b相并搅拌均匀，然后分装于无菌铝盒中，置于4℃冰箱中保存备用；(2)药剂配制：各种药剂用溶剂溶解，非水溶性药剂(例如：三唑磷、阿维菌素和氯虫苯甲酰胺等药剂)采用二甲基甲酰胺或丙酮溶解制备成母液，然后采用含1％吐温-80(或tritonx-100)的蒸馏水稀释为5-7个不同的浓度作为生物活性测定浓度；水溶性药剂(例如：杀虫单)则直接采用蒸馏水溶解和稀释为5-7个不同的浓度作为生物活性测定浓度；(3)二化螟幼虫在室内用步骤(1)制得的人工饲料饲养至4龄2日龄；(4)带药人工饲料制备：把步骤(1)制备的人工饲料切成长度1.5cm×宽度1.5cm×厚度1.2mm的薄片，将薄片挑入步骤(2)制备的不同浓度药液中浸泡10s后捞出，置于与水平面呈45度的不锈钢丝网面上晾干30min，吸去多余药液后，将带药的人工饲料薄片挑入到直径3cm×高9cm的平底玻璃管中；(5)生物活性测定：将4龄2日龄二化螟幼虫挑入至步骤(4)中的带药人工饲料薄片的玻璃管中，每个浓度处理10头，进行4次生物学重复；(6)测定结果：沙蚕毒素类、苯基吡唑类、菊酯类、有机磷类、氨基甲酸酯类和大环内酯类处理48小时，昆虫几丁质抑制剂类处理72h，双酰胺类药剂处理96h，检查各处理的死亡虫数；死亡标准：不能正常爬行运动的幼虫均判为死亡个体；死亡率用abbott公式校正，再根据浓度对数-校正死亡率机率值分析(bliss)法，用dps数据处理软件计算出各药剂的毒力回归方程和lc50值等生物活性资料。本发明的有益效果在于：①本发明使用的人工饲料，与其他配方中需要活体材料(例如茭白，水稻或小麦)的二化螟人工饲料不同，本配方中所需的材料均可随时在市场上购买获得，确保试验可随时开展。②将人工饲料薄片浸泡在药液中后，药剂便粘附在人工饲料薄片上，由于幼虫在浸药后的人工饲料中爬行和取食，因此，该法可以同时检测药剂的胃毒和触杀活性，可以充分反映杀虫剂的毒力。③人工饲料在2个小时内即可制备完成，药剂处理后2-4天即可获得试验结果，具有快速性的特点。④该测定方法所需设备简单，无需精密仪器；试验操作简便，基层技术人员也易于掌握应用，具有良好的实用性。具体实施方式以下通过具体实施例对本发明作进一步说明，并结合相应试验进一步说明本发明的有益效果。但本发明的内容并不局限于此，不能因此而理解为对本发明范围的限制。实施例1人工饲料浸药法测定10种杀虫剂对二化螟的生物活性1.研究对象本发明的研究对象为在实验室内未接触任何药剂的条件下以人工饲料饲养40余代且采用单卵块筛选敏感性筛选了3代次的敏感二化螟种群。2.方法2.1供试药剂：95％杀虫单、92％阿维菌素、95％氟虫腈、97％甲氧虫酰肼、85％三唑磷、95％氟铃脲、92％丙溴磷、95％二嗪磷、95％氯虫苯甲酰胺、92％氟苯虫酰胺原药。92％阿维菌素、95％氟虫腈、97％甲氧虫酰肼、85％三唑磷、95％氟铃脲、92％丙溴磷、95％二嗪磷、95％氯虫苯甲酰胺、92％氟苯虫酰胺原药采用二甲基甲酰胺溶解制备成母液，然后用含1％吐温-80的蒸馏水充分搅拌稀释为5-7个不同浓度作为生物活性测定浓度备用，95％杀虫单用蒸馏水溶解和稀释为5-7个不同浓度作为生物活性测定浓度备用。2.2人工饲料的制备：①a相的制备：在1000ml水中加入135克麦胚粉、120克蔗糖、45克纤维素、155克酪蛋白和20克酵母粉，搅拌均匀后置于自动蒸汽灭菌器中124℃灭菌30分钟；将180克琼脂放入2000毫升水中，于微波炉中煮熔为止，将煮熔的琼脂溶液加入至上述灭菌后的饲料中并搅拌均匀；②b相的制备：把15克对羟基苯甲酸丙酯钠、15克山梨酸钾、2.5克氯霉素、4克韦氏盐、30克加强维生素混合液、4克氯化胆碱、7毫升40％甲醛、10毫升菜子油和5克胆固醇放入含1000毫升灭菌水的烧杯中，在磁力搅拌器上搅拌溶解20分钟；③待a相的温度下降至60℃时加入b相并搅拌均匀，然后分装于无菌铝盒中，置于4℃冰箱中保存备用；2.3带药人工饲料制备：将2.2中制备的人工饲料切成长度1.5cm×宽度1.5cm×厚度1.2mm的薄片，把薄片挑入至2.1制备的不同浓度药液中浸泡10s后捞出，置于与水平面呈45度的不锈钢丝网面上晾干30min，吸去多余药液后，将带药的人工饲料薄片挑入到直径3cm高9cm的平底玻璃管中。2.4毒力测定：将4龄2日龄敏感二化螟幼虫挑入至2.3中含带药人工饲料薄片的玻璃管中，每个浓度处理10头，至少进行4次生物学重复。2.5检查结果：沙蚕毒素类、苯基吡唑类、菊酯类、有机磷类、氨基甲酸酯类和大环内酯类处理48小时，昆虫几丁质抑制剂类处理72h，双酰胺类药剂处理96h，检查各处理的死亡虫数；死亡标准：不能正常爬行运动的幼虫均判为死亡个体；死亡率用abbott公式校正，再根据浓度对数-校正死亡率机率值分析(bliss)法，用dps数据处理软件计算出各药剂的毒力回归方程和lc50值等生物活性资料。表110种杀虫剂对二化螟的生物活性药剂毒力回归线(y＝)lc50(mg/l)相对毒力指数阿维菌素6.9889+1.8571x0.0849176.91氯虫苯甲酰胺5.0842+1.9065x0.903316.63杀虫单4.863+1.614x1.215912.35氟虫腈4.4612+2.7367x1.57359.55氟苯虫酰胺3.5468+3.2260x2.82155.32甲氧虫酰肼3.9067+2.0171x3.48374.31三唑磷3.2009+3.0551x3.88053.87氟铃脲4.0573+1.0905x7.31942.05丙溴磷2.9981+2.0839x9.13371.64二嗪磷-0.6914+4.8369x15.021.00(相对毒力指数以二嗪磷的lc50为基准计算所得)表1的结果表明，阿维菌素对二化螟的生物活性最高，其相对毒力指数为176.91，氯虫苯甲酰胺、杀虫单、氟虫腈和氟苯虫酰胺的相对毒力指数在5.32-16.63之间，也表现出良好的生物活性。当前第1页12