PSMA靶向的NIR染料及其用途的制作方法

本专利申请要求2016年9月9日提交的第62/385528号美国临时专利申请的优先权权益。前述申请的内容在此通过引用整体并入本发明的公开内容。发明领域本发明的公开内容属于诊断学领域。本发明的公开内容提供了合成和利用聚乙二醇连接基团的方法，所述聚乙二醇连接基团与用于肿瘤靶向成像的化合物缀合，所述肿瘤包括前列腺特异性膜抗原(psma)相关疾病，例如前列腺癌。氨基酸基团与荧光染料的缀合增加了化合物检测的特异性。考虑了用于其在诊断成像中的应用的化合物的制备和合成方法。发明背景前列腺是在膀胱下方的存在于骨盆中的男性生殖器官之一。它的作用是产生和储存精液，精液提供了对生殖过程中进入阴道的精子的存活至关重要的营养和液体。像许多其它组织一样，前列腺也容易发展恶性(癌性)或良性(非癌性)肿瘤。美国癌症协会预测，2005年将有超过230000名男性被诊断患有前列腺癌，超过30000名男性会死于该疾病。事实上，前列腺癌是西方社会最常见的男性癌症之一，并且是美国男性第二大恶性肿瘤形式。目前用于前列腺癌的治疗方法包括激素疗法、放射疗法、外科手术、化学疗法、光动力疗法和组合疗法。治疗的选择通常根据癌症的阶段而变化。然而，许多这些治疗方法影响患者的生活质量，特别是那些被诊断患有前列腺癌的50岁以上的男性。例如，使用激素药物通常伴有副作用，例如骨质疏松症和肝损伤。通过使用对导致疾病状态的组织更具选择性或特异性并且避开诸如骨骼或肝脏的非靶组织的治疗，可以减轻这样的副作用。如本文所述，前列腺特异性膜抗原(psma)代表这样的选择性或特异性治疗的靶点。手术切除恶性疾病构成了癌症初级治疗的最常见和有效的治疗方法之一。所有可检测的恶性病变的切除使得所有癌症患者中的约50％没有可检测到的疾病复发，并且可以延长预期寿命或降低看到癌症复发的患者的发病率。毫不奇怪，实现更加定量的细胞减灭的手术方法现在受到更仔细的审查。所有可检测的恶性病变的切除使得所有癌症患者中的约50％没有可检测到的疾病复发，并且可以延长预期寿命或降低看到癌症复发的患者的发病率。鉴于完全切除恶性病变的重要性，确保准确和完全识别恶性病变是有益的。目前通过三种方法完成手术期间恶性组织的识别。首先，许多肿瘤块和结节可以基于异常的颜色、质地和/或形态进行视觉检测。因此，肿瘤块可呈现杂色，看起来不对称且具有不规则的边界，或者从健康器官的轮廓突出。由于与相邻健康组织在可塑性、弹性或坚固性方面的差异，恶性肿块也可以以触觉识别。最后，可以使用荧光染料在术中定位一些癌症病灶，所述荧光染料被动地从原发性肿瘤流入引流淋巴结。在该后者的方法中，可以从视觉上鉴定、切除和检查发荧光的(前哨)淋巴结，以确定癌细胞是否已转移至这些淋巴结。psma的命名主要是由于其在前列腺癌细胞上更高水平的表达；然而，其对前列腺癌细胞的特定功能仍不清楚。与人体中的其它器官如肾、近端小肠和唾液腺相比，psma在恶性前列腺组织中过表达。psma还在大多数实体肿瘤的新血管系统中表达。尽管psma在脑中表达，但该表达很少，并且psma的大多数配体是极性的并且不能穿透血脑屏障。psma是分子量为-110kd的ii型细胞表面膜结合糖蛋白，包括细胞内片段(氨基酸1-18)、跨膜结构域(氨基酸19-43)和广泛的细胞外结构域(氨基酸44-750)。虽然目前认为细胞内片段和跨膜结构域的功能是不重要的，但细胞外结构域参与几种不同的活动。psma在中枢神经系统中起作用，其中它将n-乙酰基-天冬氨酰谷氨酸(naag)代谢为谷氨酸和n-乙酰天冬氨酸。因此，它有时也称为n-乙酰基α连接的酸性二肽酶(naaladase)。由于其在近端小肠中的作用，psma有时也被称为叶酸水解酶i(folhi)或谷氨酸羧肽酶(gcpii)，在近端小肠中其从聚-y-谷氨酸叶酸去除γ-连接的谷氨酸，和从肽和小分子去除α-连接的谷氨酸。psma还与人转铁蛋白受体(tfr)具有相似性，因为psma和tfr都是ii型糖蛋白。更具体地，psma分别显示与tfr1和tfr254％和60％的同源性。然而，尽管由于链间巯基键的形成，tfr仅以二聚体形式存在，但psma可以以二聚体或单体形式存在。与许多其它膜结合蛋白不同，psma以与细胞表面结合受体如维生素受体类似的方式快速内化到细胞中。psma通过网格蛋白被膜小窝内化，随后可以循环到细胞表面或到达溶酶体。已经提出psma的二聚体和单体形式是可相互转化的，尽管相互转化的直接证据正在争论中。即便如此，只有psma的二聚体具有酶活性，而单体不具有酶活性。尽管psma在前列腺癌细胞的细胞表面上的作用仍然未知，但是已经认识到psma代表了用于选择性和/或特异性递送生物活性剂到这样的前列腺癌细胞的可行靶点，所述生物活性剂包括诊断剂、成像剂和治疗剂。抗psma单克隆抗体(mab)7e11的放射免疫缀合物，称为扫描，目前用于诊断前列腺癌转移和复发。然而，这种药剂倾向于产生难以解释的图像(lange，p.h.prostascintscanforstagingprostatecancer.urology2001，57，402-406；haseman，m.k.等人cancerbiotherradiopharm2000，15，131-140；rosenthal，s.a.等人techurol2001，7，27-37)。它与坏死的前列腺癌细胞中的psma的细胞内表位结合。最近，已经开发了单克隆抗体，其结合psma的细胞外结构域，并且已被放射性标记，并显示在动物的psma阳性前列腺肿瘤模型中积聚。然而，使用单克隆抗体的诊断和肿瘤检测已受到低渗透性的限制，因为它们的尺寸大[分子量(mw)～150000da]和从非靶向组织清除缓慢。此外，由于它们的半衰期长(约30天)，用于成像或治疗目的的放射性或光学成像剂的选择性靶向是具有困难的。特别是患者必须在医院待更长的日子，并在医疗费用上花更多的钱。目前两种有希望的荧光引导的手术的方法正在处在为了临床应用的深入研究中。在一种方法中，可激活的nir荧光探针由于其接近所附着的猝灭剂而在稳态下荧光最小，其在恶性组织中释放猝灭剂时变得发强荧光。最常用的释放机制之一涉及在染料和猝灭剂之间掺入肽序列，该肽序列可以被肿瘤富含的蛋白酶(即组织蛋白酶、半胱天冬酶和基质金属蛋白酶)特异性切割。这种策略的主要优点在于缺乏活化酶的组织中不存在荧光，使得组织沿排泄途径(例如肾、膀胱、肝)保持非荧光，除非它们偶然表达裂解酶。只要恶性病变在裂解蛋白酶中富集并且释放的染料保留在肿瘤中，这样的肿瘤激活的nir染料也可以在肿瘤块中产生显著的荧光。这种方法的主要缺点源于许多相关水解酶的较差的肿瘤特异性(其中大多数也在经历自然重塑或经历炎症的健康组织中表达)。此外，期望的蛋白酶的丰度在肿瘤块之间可变化，导致一些恶性病变中荧光的激活缓慢或不激活，以及其它恶性病变中荧光的迅速发展。大多数情况下，这些可激活的肽含有超过20个通过肽键连接的氨基酸，这可能导致更高的分子量、更长的提前期(24小时)、在循环中肽酶对肽键的裂解、高假阳性结果和非常高的制造成本。可激活的染料使用的其它释放机制是循环之间和肿瘤内的ph差异或氧化还原电位的变化。在第二种情况中，荧光染料与引起附着的染料在过表达配体的受体的癌症中积聚的肿瘤特异性靶向配体缀合。虽然psma靶向的抗体-nir染料缀合物尚未进入用于癌症的荧光引导手术的临床试验，但是出于临床开发的目的已经将几种类型的nir染料与诸如her-2的单克隆抗体缀合。不幸的是，大多数这些染料使用蛋白质中的赖氨酸或半胱氨酸残基通过酰胺、二硫化物或马来酰亚胺化学非特异性地栓系到抗体，形成异质化学实体，这导致可变的亲和力、效力、pk和安全性情形。此外，已知马来酰亚胺和二硫键在循环中不稳定(半衰期≤2h)。另一方面，由于与生产过程和安全性相关的困难，缺乏精确的结构定义可能限制这些缀合物进入临床使用的进展。此外，与小分子配体相比，这些抗体(mw～150000da)的生产非常昂贵。相比之下，小分子配体(mw>0.5da)可以快速穿透实体肿瘤，并在<2h内从psma阴性组织清除，显示出高肿瘤背景比，易于合成，并且在合成和储存期间稳定。尽管那些小分子配体具有所有优点，但是维持或增强小分子性质的nir染料的开发是具有挑战性的。最近，各种低分子量psma抑制剂已经与可见光波长染料(400-600nm)，诸如荧光素和罗丹明缀合，并在动物模型中[kularatnesa,wangk,santhapuramhk,lowps.molpharm.2009may-jun；6(3):780-9]或在培养的细胞中[liut,nedrow-byersjr,hopkinsmr,berkmance.bioorgmedchemlett.2011dec1；21(23)]或在人血样品中(hew,kularatnesa,kallikr,prendergastfg,amatorj,kleegg,hartmannlc,lowps.intjcancer.2008oct15；123(8):1968-73)进行测试。可见光波长染料对于术中图像引导的手术不是最佳的，因为由于组织中胶原的存在，这些染料与相对高水平的非特异性背景光相关。因此，来自这些常规化合物的信噪比很低。此外，生物发色团，特别是血红蛋白对可见光的吸收将穿透深度限制在几毫米。因此，在组织中埋藏深度超过几毫米的肿瘤通常不被检测到。此外，荧光素的电离平衡(pka＝6.4)导致ph依赖性吸收和在5至9范围内的发射。因此，荧光素基染料的荧光在低ph(ph5以下)下猝灭。因此，与靶向psma的小分子配体缀合的nir染料[(a)humbletv,lapidusr,williamslr,tsukamotot,rojasc,majerp,hinb,ohnishis,degrandam,zaheera,renzejt,nakayamaa,slusherbs,frangionijv.molimaging.2005oct-dec；4(4):448-62.；(b)thomasm,kularatnesa,qil,kleindlp,leamoncp,hansenmj,lowps.；(c)cheny,dharas,banerjeesr,byuny,pullambhatlam,measerc,pompermg.biochembiophysrescommun.2009dec18；390(3):624-9；(d)nakajimat,mitsunagam,bandernh,hestonwd,choykepl,kobayashih.bioconjugchem.2011aug17；22(8):1700-5.；(e)cheny,pullambhatlam,banerjeesr,byuny,stathism,rojasc,slusherbs,measerc,pompermg.bioconjugchem.2012dec19；23(12):2377-85.；(f)laydnerh,huangss,hestonwd,autorinor,wangx,harschkm,magi-galluzzic,isacw,khannar,hub,escobarp,chalikondas,raopk,habergp,kaoukjh,steinrj.urology.2013feb；81(2):451-6.；(g)kelderhousele,chelvamv,wayuac,mahalingams,pohs,kularatnesa,lowps.bioconjugchem.2013jun19；24(6):1075-80.]已经在前列腺癌鼠模型中作为成像剂进行测试。虽然这些psma靶向的nir染料在培养物中显示出前列腺癌细胞的一些标记，但是在表达psma的前列腺肿瘤异种移植动物模型中，它们具有非常弱的荧光。例如，humblet等人描述的分子在肿瘤异种移植模型中显示出非常低的肿瘤积聚和荧光。这可能是由于配体和nir染料之间缺乏合适的接头，可能已经阻碍配体与psma中的结合口袋的结合。另一方面，与dupa相比，磷基配体对psma的亲和力较低。此外，磷基配体难以合成，涉及多个步骤，并且制造将是昂贵的。chen等人报道的psma靶向的nir试剂已经用了超过20小时到达肿瘤并且用了72小时从非靶向组织清除。同样值得注意的是，这种psma靶向的nir染料具有非常缓慢的皮肤清除率。虽然它们使用的转染细胞中psma的结合表位可以是人工的，但它在psma转染的前列腺癌细胞肿瘤中具有非常低的摄取和低荧光。此外，该分子在所有其它组织中都有大量的非特异性摄取，并且psma阴性细胞中存在积聚和荧光，表明chen等人报道的nir缀合物的非特异性和非靶向性质。chen等人和laydner等人已将小分子配体与ir800cw(一种nir染料)缀合。ir800cw是不对称染料，具有活化的羧酸和n-羟基琥珀酰亚胺酯(nhs)。这是一种合成极其昂贵的分子，并且从商购来源购买甚至更贵(1克超过60000美元)。ir800cw也有缺点，即它在合成过程中不稳定，原因有两个：(a)nhs酯的水解，(b)乙烯基醚的水解。ir800cw缀合物在合成过程中缺乏稳定性导致超过60％的不期望的副产物形成。这需要复杂的纯化技术，表明生产成本更高、临床转译等待时间更长的路径以及外科医生和患者将无法获得药物。laydner等人通过长肽空间(6个氨基酸)和具有nhs和马来酰亚胺的双功能接头将psma配体与ir800cw缀合。除了由ir800cw引起的所有缺点之外，这种psma靶向的ir800cw缀合物具有复杂的合成方案，需要在多个步骤中以五个阶段合成(配体的合成、通过马来酰亚胺官能团将配体缀合至双功能接头、肽接头的合成、肽接头与ir800cw的缀合、肽接头-ir800cw通过酰胺键与配体-双功能接头的缀合)。因此，制造成本阻碍了该分子用于临床目的的有效生产。由于分子中有多个手性中心，这些分子的合成方案更加复杂。然而，肽接头具有多个手性中心(立体异构体)，通常使得用于fda批准所需的所有立体异构体的生产和评估成为必要的。例如，仅具有3个氨基酸(即3个手性中心)的肽接头将需要8种不同药物产品的毒性情况，因为这些异质混合物可能导致不同的亲和力、效力、pk和安全性情况。laydner等人使用的小分子配体是glunhconhcys-sh。cys中的游离硫醇部分倾向于氧化，因此分子必须在氩气或氮气环境下处理，并且通常导致不稳定的分子。glunhconhcys-sh配体通过马来酰亚胺反应与双功能接头缀合。据广泛的报道，硫醇和马来酰亚胺之间的反应是可逆的，并且产生50％的期望的产物。此外，马来酰亚胺键在人体的循环中不稳定，因此马来酰亚胺键的使用会冒非靶向染料的释放导致其非特异性摄取的风险。kelderhouse等人通过马来酰亚胺基团将dupa-接头-cys缀合至alexaflour647和将dylight750缀合至dupa。同样，这些分子具有与马来酰亚胺相关的所有缺点。此外，这些低波长nir染料虽然可商购，但非常昂贵。虽然分子在实验性转移性小鼠模型上进行了测试，但图像尚无定论。liu等人还报道了psma靶向的nir染料和一些体外数据，但没有报道动物数据。配体和nir染料之间缺乏适当的接头可能归因于缺乏体内数据(vivodata)。此外，该染料与其它报道的化合物一样有许多缺点。它是磷基配体和不对称染料。因此，它既有磷基配体所述的缺点，也有不对称nir染料所述的缺点。nakajima等人报道了与icg缀合的抗psma抗体(j591)。不幸的是，该化合物需要72小时才能从其它健康组织如肝脏清除。此外，该化合物保持循环6天，表明它在人体内将保持在体内超过30天。此外，icg通过酰胺使用蛋白质中的赖氨酸残基非特异性地栓系至j591，形成异质化学实体，这导致可变的亲和力、效力、pk和安全性情况。由于与生产过程和安全性相关的困难，缺乏精确的结构定义可能限制这些缀合物用于临床应用的进展。报道的psma靶向的nir染料的更高非特异性和从皮肤缓慢清除可能是由于这些化合物的药代动力学(pk)性质差。因此，仍然需要一种染料物质，其可用于特异性靶向表达psma的癌细胞或患病组织的新血管系统，具有增加的稳定性、更好的pk性质、更高的溶解度、快速的肿瘤积聚、强荧光、快速的皮肤清除和较高的肿瘤背景比(tbr)，用于体内组织成像和用于图像引导的手术。发明简述本发明的公开内容提供了通过不同接头与nir染料连接的psma靶向的配体，以改善化合物的临床性质(例如稳定性、pk性质、溶解性、快速肿瘤积聚、更强的荧光、快速皮肤清除和更高的肿瘤背景比)。本发明的公开内容提供了化合物在图像引导的手术中的用途以及用于合成该化合物的方法。本发明的公开内容还通过向接头添加正电荷或减少染料分子中的负电荷数量来提供配体-接头-nir染料缀合物的总电荷变化。本发明的公开内容还提供了新的更高亲和力的配体，以改善nir缀合物的体内亲和力和pk性质。本发明的公开内容还提供了用于包括但不限于前列腺癌的表达psma的肿瘤的靶向成像的化合物，以及例如在涉及psma阳性的组织和肿瘤的成像和手术中的使用方法。在某些实施方案中，本发明的化合物具有以下形式：b-x-y-z其中b是psma靶向的分子；x是接头；y是氨基酸接头；和z是nir染料。在一些实施方案中，psma靶向的分子选自小分子、配体、抑制剂、拮抗剂或其衍生物。在一些实施方案中，psma靶向的化合物是配体。在一些实施方案中，psma靶向的化合物是dupa。在其它实施方案中，psma靶向的化合物是结合psma的小分子。在一些实施方案中，x是疏水性接头。在一些实施方案中，x选自包含1、2、3或4个peg单体的聚乙二醇(peg)序列、7个原子的链、7个原子长度的接头、7至24个原子的长度的链；包含两个芳基或芳烷基的肽，其中每个芳基或芳烷基任选地被取代，并且其中一个芳基或芳烷基为约7至约11个，或约7至约14个原子，并且另一个芳基或芳烷基为约10至约14个，或约10至约17个原子。在另一个实施方案中，所述接头包含约1至约30个原子，或约2至约20个原子。在一些实施方案中，所述接头长度为7个原子。在一些实施方案中，所述接头包含peg2。在一些实施方案中，所述接头是可变地带电的。在一些实施方案中，x具有正电荷。在其它实施方案中，x具有负电荷。在一些实施方案中，y选自：酸性(带负电的)氨基酸，例如天冬氨酸和谷氨酸及其衍生物；碱性(带正电荷)氨基酸，如精氨酸、组氨酸和赖氨酸及其衍生物；中性极性氨基酸，如甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺及其衍生物；中性非极性(疏水)氨基酸，如丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和蛋氨酸；及其衍生物。在一些实施方案中，y是芳族氨基酸及其衍生物。在一些实施方案中，y具有正电荷。在其它实施方案中，y具有负电荷。在一些实施方案中，z选自近红外染料，包括但不限于ls288ir800sp054s0121s2076s0456kodakird28和/或选自下组的染料：在某些实施方案中，z是可变地带电荷的。在一些实施方案中，z具有正电荷。在其它实施方案中，z具有负电荷。在某些实施方案中，本发明的化合物具有下式：b-x-y-z其中b是psma靶向的化合物；x是接头；y是具有含硫侧链基团的氨基酸接头；和z是nir染料。在一些实施方案中，所述具有含硫侧基的氨基酸接头是半胱氨酸。在一些实施方案中，所述具有含硫侧基的氨基酸接头是蛋氨酸。在一些实施方案中，所述具有含硫侧基的氨基酸接头是含有苯硫酚部分的分子。在一些实施方案中，本发明的化合物具有以下形式：b-x-y-z其中b是psma靶向的化合物；x是接头；y是含有硫属元素的侧链基团的氨基酸接头；和z是nir染料。在一些实施方案中，本发明提供以下形式的化合物：b-x-y-z其中，b是psma靶向的化合物；x是接头；y是选自酪氨酸、半胱氨酸、赖氨酸或其衍生物的氨基酸；和z是nir染料。在一些实施方案中，y包含酪氨酸或酪氨酸衍生物。在一些实施方案中，y包含酪氨酸，并且碳同位素在酪氨酸的芳环上。在一些实施方案中，y包含具有氢同位素的芳环的氨基酸。在一些实施方案中，本发明包括化合物b-x-y-z，其中b包含dupa或其衍生物，x包含eaoa，y包含酪氨酸，z包含so456。本发明还涉及具有下式的化合物：或其药学上可接受的盐，或其同位素，其中：r1代表氢或so3h；r2代表氢、ch3、c3h6so3-、c3h6so3h或c4h8so3-、或c4h8so3h或c3h6n+(ch3)3；r3和r5各自代表碳，任选地一个或多个共用键，r4表示具有任选的一个或多个共用键的碳；r6代表氮、氧或硫或没有原子(芳环和乙烯环之间的直接c-c键)；r7是任选的，并且当存在时代表芳族取代基团以增强光谱性质，例如增加乙烯基醚桥的亮度和稳定性；r8是任选的，并且当存在时代表具有芳族氨基酸如phe、trp、his或其衍生物，阳离子氨基酸如arg、lys或其衍生物，阴离子氨基酸如asp、glu或它们的衍生物，芳族/阳离子/阴离子酸的非天然氨基酸或其衍生物的接头；r9是任选的，并且当存在时代表直链碳链、或聚乙二醇接头、阳离子接头或其衍生物；r10表示co2h、po3h2、so3h、ch2so3h、ch2conhch2so3h、ch2conhch2ch2so3h；r11代表co2h、so3h、ch2conhch2so3h、ch2conhch2ch2so3h；和r12表示氢、甲基、ch2，并且可任选地代表各自的ch2共用键。在一些实施方案中，本发明的化合物具有约500nm至约900nm的吸收和发射最大值。在一些实施方案中，本发明的化合物具有约600nm至800nm的吸收和发射最大值。在一些实施方案中，使本发明的化合物分布在组织细胞中后发荧光。在一些实施方案中，通过使化合物经受近红外波长的激发光，使本发明的化合物发荧光。在一些实施方案中，本发明的化合物具有类似于dupa的结合亲和力的对psma的结合亲和力。在一些实施方案中，本发明的化合物对于靶向肿瘤细胞是高度选择性的。在特别优选的实施方案中，本发明的化合物靶向前列腺癌细胞。在某些实施方案中，将本发明的化合物给予有需要的受试者，并且在一些实施方案中，除所述化合物外，给予的组合物还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。本发明的一些实施方案提供了包含psma靶向nir染料化合物的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒用于表达psma的细胞的成像。在一些实施方案中，表达psma的细胞是肿瘤细胞。在一些实施方案中，表达psma的细胞是非前列腺癌细胞。在某些实施方案中，表达psma的细胞是前列腺肿瘤细胞。在某些实施方案中，表达psma的细胞是癌细胞。在某些实施方案中，表达psma的区域是肿瘤细胞的新血管系统。在一些实施方案中，本发明用于检测转移性疾病。在一些实施方案中，本发明的化合物用于改善手术切除和/或改善预后。在一些实施方案中，本发明的方法提供比非nir缀合的荧光染料更清洁的手术切缘。在一些实施方案中，本发明的psma靶向的nir染料化合物具有改善的肿瘤背景比。在另一个实施方案中，本文描述了用于治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态和/或成像与表达或过表达psma的致病细胞群相关的组织和/或细胞的方法。这样的方法包括以有效治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态、和/或成像与表达或过表达psma的致病细胞群相关的组织和/或细胞的量给予本文所述缀合物和/或含有本文所述缀合物的药物组合物的步骤。附图简述图1描绘了1：otl78的化学结构、激发和发射光谱。图2示出了1：otl78相对于dupa-fitc(14)的相对结合亲和力。随着1的浓度增加，将psma阳性的22rv1人前列腺癌细胞在100nmdupa-fitc存在下在37℃下孵育1小时。然后移除培养基，用新鲜培养基清洗三次，并用pbs置换。使用流式细胞术测定细胞结合的荧光。图3显示了在向携带前列腺肿瘤异种移植物的小鼠注射1：otl78后，在2小时时间点调整阈值后，全身荧光图像在白光图像上的叠加。向携带22rv1人前列腺肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol的1：otl78，并在注射后2小时用ivis成像仪(ex＝745nm，em＝icg，暴露时间＝1s)成像。图4描绘了在全身成像后解剖的来自图3的小鼠中1：otl78的离体组织生物分布。图5a使用携带pc3肿瘤(psma阴性)的裸鼠的全身成像说明了1：otl78的体内特异性。图5b使用图5a中小鼠的离体组织生物分布说明了1：otl78的体内特异性。图6：在调节阈值之后，全身或半体荧光图像在白光图像上的叠加。向携带22rv1人前列腺肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol的1：otl78，并用ivis成像仪(ex＝745nm，em＝icg，暴露时间＝1s)以不同的时间间隔成像。图7a描绘了粗品化合物8的lc/ms色谱图：仪器：acquityuplc，waters柱：behc18，1.7μm，2.1×50mm。洗脱液a：20mmnh4oac水溶液；洗脱液b：acn。梯度：按照表#中所示的梯度程序，在2.2分钟内，5％b-75％b。运行时间：7分钟。流速：0.35ml/min。检测器：220nmuv检测器。图7b示出了粗品化合物8的lc/ms色谱图：除了检测器是263nmuv检测器之外，与图7a的条件相同。图7c显示了粗品化合物8的lc/ms色谱图：除了检测器是二极管阵列之外，与图7a的条件相同。图7d描绘了使用正模式电喷雾电离质谱分析的粗品化合物8的质谱，示出了粗品化合物8+h(m/z575.5)及其二聚体(m/z1150)。图8a示出了粗品化合物9的lc/ms色谱图：与图7a的条件相同。图8b显示了粗品化合物9的lc/ms色谱图：与图7b的条件相同。图8c描绘了粗品化合物9的lc/ms色谱图：与图7c的条件相同。图8d示出了使用正模式电喷雾电离质谱法分析的粗品化合物9的质谱，示出了粗品化合物9+h(m/z441.5)及其二聚体(m/z882)。图9a显示了粗品化合物11的lc/ms色谱图：与图7a的条件相同。图9b描绘了粗品化合物11的lc/ms色谱图：与图7b的条件相同。图9c示出了粗品化合物11的lc/ms色谱图：与图7c的条件相同。图9d显示了使用正模式电喷雾电离质谱分析的粗品化合物11的质谱，示出了粗品化合物11+h(m/z734.86)及其二聚体(m/z1486.68)。图10a描绘了粗品化合物12的lc/ms色谱图：与图7a的条件相同。图10b示出了粗品化合物12的lc/ms色谱图：与图7b的条件相同。图10c显示了粗品化合物12的lc/ms色谱图：与图7c的条件相同。图10d描绘了使用正模式电喷雾电离质谱分析的粗品化合物12的质谱，示出了粗品化合物12+h(m/z600.7)及其二聚体(m/z1200)。图11a示出了粗品化合物13的lc/ms色谱图：与图7a的条件相同。图11b显示了粗品化合物13的lc/ms色谱图：与图7b的条件相同。图11c描绘了粗品化合物13的lc/ms色谱图：与图7c的条件相同。图11d示出了使用正模式电喷雾电离质谱分析的粗品化合物13的质谱，示出了粗品化合物13+h(m/z1071.2)及其二聚体(m/z2142)。图12a显示了化合物5纯化后的lc/ms色谱图：与图7a的条件相同。图12b描绘了化合物5纯化后的lc/ms色谱图：与图7a的条件相同。图12c示出了化合物5纯化后的lc/ms色谱图：与图7c的条件相同。图12d显示了使用正模式电喷雾电离质谱法分析的化合物5纯化后的质谱，示出了化合物5+h(m/z790.6)。图13a示出了以1小时的时间间隔监测反应进程最多达4小时的反应混合物的lc/ms色谱图情况。图13b显示了以2小时的时间间隔监测反应进程最多达4小时的反应混合物的lc/ms色谱图情况。图13c描绘了以3小时时间间隔监测反应进程最多达4小时的反应混合物的lc/ms色谱图情况。图13d示出了以4小时时间间隔监测反应进程最多达4小时的反应混合物的lc/ms色谱图情况。图14a示出了在220nmuv波长下在4小时时间点的反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图14b描绘了在490nmuv波长下在4小时时间点的反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图14c示出了在550nmuv波长下在4小时时间点的反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图14d示出了在775nmuv波长下在4小时时间点的反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图15a描绘了化合物5纯化后的lc/ms色谱图：与图7a相同的条件。图15b示出了化合物5纯化后的lc/ms色谱图：与图7a相同的条件。图15c显示了化合物5纯化后的lc/ms色谱图：与图7c相同的条件。图15d描绘了使用正模式电喷雾电离质谱法分析的化合物5纯化后的质谱，示出了化合物5+h(m/z790.6)。图15e示出了化合物5纯化后的二极管阵列波长图。图16a显示了以1小时时间间隔在220nmuv波长下监测反应进程时反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图16b描绘了以1小时时间间隔在775nmuv波长下监测反应进程时反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图16c示出了以2小时时间间隔在775nmuv波长下监测反应进程时反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图16d显示了以3小时时间间隔在775nmuv波长下监测反应进程时反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图16e描绘了以4小时时间间隔在775nmuv波长下监测反应进程时反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图示出了在220nmuv波长下在4小时时间点反应混合物的lc/ms色谱图谱情况，在490nmuv波长下在4小时时间点反应混合物的lc/ms色谱图情况；在550nmuv波长下在4小时的时间点反应混合物的lc/ms色谱图情况；以及在775nmuv波长下在4小时的时间点反应混合物的lc/ms色谱图情况。lc/ms方法与图7a中相同。图18a显示了在220nmuv波长下在4小时时间点反应混合物的uplc/ms色谱图情况。图18b描绘了在490nmuv波长下在4小时时间点反应混合物的uplc/ms色谱图情况。图18c示出了在550nmuv波长下在4小时时间点反应混合物的uplc/ms色谱图情况。图18d显示了在775nmuv波长下在4小时时间点反应混合物的uplc/ms色谱图情况。图19a描绘了在硅胶柱纯化和冻干后在220nmuv波长下化合物1：otl78的lc/ms色谱图情况。图19b示出了在硅胶柱纯化和冻干后在490nmuv波长下化合物1：otl78的lc/ms色谱图情况。图19c显示了在硅胶柱纯化和冻干后在550nmuv波长下化合物1：otl78的lc/ms色谱图情况。图19d描绘了在硅胶柱纯化和冻干后在775nmuv波长下化合物1：otl78的lc/ms色谱图情况。图20a示出了在硅胶柱纯化和冻干后在490nmuv波长下化合物1：otl78的uplc以及hplc柱色谱图情况。图20b显示了在硅胶柱纯化和冻干后在550nmuv波长下化合物1：otl78的uplc以及hplc柱色谱图情况。图20c描绘了在硅胶柱纯化和冻干后在775nmuv波长下化合物1：otl78的uplc以及hplc柱色谱图情况。图20d示出了在硅胶柱纯化和冻干后在265nmuv波长下化合物1：otl78的uplc以及hplc柱色谱图情况。图21a显示了hplc纯化后在490nmuv波长下化合物1：otl78的lc/ms色谱图情况。图21b描绘了hplc纯化后在550nmuv波长下的化合物1：otl78的lc/ms色谱图谱情况。图21c示出了hplc纯化后在775nmuv波长下的化合物1：otl78的lc/ms色谱图情况。图22a显示了用于杂质分析的图21a的放大视图。图22b描绘了用于杂质分析的图21b的放大视图。图22c示出了用于杂质分析的图21c的放大视图。图23a显示了hplc纯化后在490nmuv波长下化合物1：otl78的uplc及hplc柱色谱图情况。图23b描绘了hplc纯化后在550nmuv波长下化合物1：otl78的uplc及hplc柱色谱图情况。图23c示出了hplc纯化后在775nmuv波长下化合物1：otl78的uplc及hplc柱色谱图情况。图24a显示了图23a的放大视图。图24b描绘了图23b的放大视图。图24c示出了图23c的放大视图。图25显示了按照图4a的lc/ms条件下粗品1：otl78纯化的硅胶柱的组分。定义应当理解，本发明不限于本文所述的特定方法、方案、细胞系、构建体和试剂，因此可以变化。还应当理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不意图限制本发明的范围，本发明的范围仅受所附权利要求限制。如本文和所附权利要求中所使用的，单数形式“一(a)”，“一(an)”和“所述(the)”包括复数的指代物，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提及“前列腺特异性膜抗原配体”、“psma配体”是指一种或多种这样的配体，并且包括本领域技术人员已知的其等同物，等等。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的任何方法、装置和材料可用于本发明的实践或测试，但现在描述优选的方法、装置和材料。出于描述和公开的目的，本文提及的所有出版物和专利通过引用并入本文，例如，出版物中描述的构建体和方法，其可能与目前描述的发明结合使用。本文讨论的出版物仅仅是为了它们在本申请的提交日之前的公开内容而提供。本文中没有内容将被解释为承认发明人无权凭借在先发明或出于任何其它原因使这样的公开提前。关于本发明的psma靶向的nir缀合物，术语“抗原性特异性”或“特异性结合”是指psma靶向化合物，其结合psma的一个或多个表位，但基本上不识别和结合含有混合抗原群的样品中的其它分子。如本文所用的术语“表位”是指psma上被dupa识别的位点。表位可以是线性的或构象上形成的序列或氨基酸的形状。如本文所用，“psma靶向化合物”或“psma靶向的化合物”应包括那些具有至少与psma或psma表位特异性结合的生物学活性的小分子、配体、多肽和蛋白质。这些化合物包括配体、受体、肽或结合至psma或至少一个psma表位的任何氨基酸序列。本发明的化合物包含psma靶向化合物，它们可以结合psma本身的一部分，或者它们可以结合与psma相关的细胞表面蛋白或受体。术语“官能团”、“活性部分”、“活性基团”、“离去基团”、“反应性位点”，“化学反应性基团”和“化学反应性部分”在本领域和本文中用于指代分子的不同的、可定义的部分或单元。这些术语在化学领域中有些同义，并且在本文中用于表示执行某些功能或活性并且与其它分子反应的分子的部分。术语“氨基酸”是指天然存在的和非天然存在的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然编码的氨基酸是20种常见氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸)和焦赖氨酸和硒代半胱氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构，即与氢结合的α碳、羧基、氨基和r基团的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。这样的类似物具有修饰的r基团(例如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸在本文中可以通过它们通常已知的三字母符号或由iupac-iub生物化学命名委员会推荐的单字母符号指代。除了别的之外，本发明解决了与疾病和/或癌症中涉及的表达psma的细胞的早期诊断和手术治疗，特别是具有改善的成像、诊断、生物学性质，包括作为非限制性实例的更高的特异性、降低的背景信号和增加的肿瘤荧光的psma靶向的染料缀合物相关的问题。详述在美国，手术治愈了50％患有实体肿瘤的患者，而化学和放射疗法治愈了不到所有癌症患者的5％。在美国，每年有超过700000名患者经历癌症手术，而40％的手术患者在5年内具有局部区域疾病的复发。尽管在肿瘤学领域有重大进步，但仍然有对早期检测、克服障碍以完成具有阴性切缘的原发性肿瘤的手术切除的方法，以及移除转移性癌细胞和识别卫星疾病的需求。实现这三个目标不仅可以改善疾病清除率，还可以指导有关术后化疗和放疗的决策。虽然已经显示非靶向的荧光染料在一些肿瘤中被动积聚，但是所得到的肿瘤背景比通常差，并且恶性组织和健康组织之间的界限可能难以限定。尽管配体靶向的荧光染料(例如，ec17：叶酸-eda-fitc)已经被用于组织成像，但是这些染料无效，因为它们不能穿透深层组织，且因此仅识别组织表面上的特异性细胞，而不能识别组织样品内更深的特异性细胞。另外，荧光素基染料有低保质期稳定性的缺点。由荧光异硫氰酸酯(fitc)化合物形成的硫脲桥易于分解，形成不稳定的化合物。此外，由于ec17使用荧光素，其具有来自成像部位周围组织中的胶原的非特异性背景噪声水平相对高的缺点。此外，生物发色团，特别是血红蛋白对可见光的吸收进一步限制了掺入荧光素的染料的有用性。因此，常规染料不能容易地检测到可能在组织中埋得比几毫米更深的肿瘤。此外，来自荧光素的荧光在低ph(ph5以下)下猝灭。为了使染料材料可用于检测和引导手术或提供早期、转移和其它组织成像的检测，克服这些缺点是重要的。本发明提供了近红外染料的psma靶向的缀合物，其是稳定的、在红外范围内发荧光，深入渗透到靶组织内，以产生对表达psma的组织的区域特异性和明亮的识别，从不表达psma的组织快速清除以获得高肿瘤背景比，以及快速的皮肤清除。更具体地，psma靶向的缀合物通过由一个或多个原子接头、氨基酸、氨基酸衍生物组成的接头连接至近红外染料。甚至更具体地，已经发现，当原子接头是具有中性或带电原子的疏水性的7-原子接头，氨基酸接头是芳族氨基酸或芳族氨基酸的衍生物，或负电荷或正电荷氨基酸和酪氨酸或酪氨酸的衍生物。可以改变接头的电荷以获得快速皮肤清除和快速肿瘤积聚以获得更高的肿瘤背景比。此外，通过具有芳族氨基酸或酪氨酸或酪氨酸的衍生物保持或甚至增强nir染料的荧光强度，和nir染料的电荷能够变化以实现快速皮肤清除。本发明的公开内容提供了连接至nir染料的psma靶向的配体及其合成方法。本发明的公开内容还提供了用于表达psma的肿瘤，包括但不限于前列腺癌的靶向的成像的化合物，以及用于例如涉及psma阳性的组织和肿瘤的成像和手术的方法。在某些实施方案中，本发明的化合物具有以下形式：b-x-y-z其中b是psma靶向的化合物；x是接头；y是氨基酸接头；和z是nir染料。在一些实施方案中，psma靶向的化合物选自小分子、配体或其衍生物。在一些实施方案中，psma靶向的化合物是配体。在一些实施方案中，psma靶向的化合物是dupa。在其它实施方案中，psma靶向的化合物是结合psma的小分子。在一些实施方案中，x是疏水性接头。在一些实施方案中，x选自八氨基辛酸(eaoa)、7个原子的链、聚乙二醇接头、长度为7个原子的接头、阳离子接头、7个原子的链、长度为7-24个原子的链；包含两个芳基或芳烷基的肽，每个芳基或芳烷基任选地被取代，并且其中一个芳基或芳烷基为约7至约11个，或约7至约14个原子，并且另一个芳基或芳烷基为约10至约14个，或约10至约17个原子。在另一个实施方案中，接头包含约1至约30个原子，或约2至约20个原子。在一些实施方案中，接头长度为7个原子。在一些实施方案中，接头包含eaoa。在一些实施方案中，接头是可变地带电荷的。在一些实施方案中，x具有正电荷。在其它实施方案中，x具有负电荷。在一些实施方案中，y选自：酸性(带负电荷的)氨基酸，例如天冬氨酸和谷氨酸；碱性(带正电荷的)氨基酸，如精氨酸、组氨酸和赖氨酸；中性极性氨基酸，如甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；中性非极性(疏水)氨基酸，如丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和蛋氨酸；及其衍生物。在一些实施方案中，y是芳族氨基酸。在一些实施方案中，y具有正电荷。在其它实施方案中，y具有负电荷。在一些实施方案中，z选自近红外染料，包括但不限于，ls288ir800sp054s0121s2076s0456kodakird28和/或选自下组的染料在某些实施方案中，z是可变地带电荷的。在一些实施方案中，z具有正电荷。在其它实施方案中，z具有负电荷。在某些实施方案中，本发明的化合物具有以下形式：b-x-y-z其中b是psma靶向的化合物；x是接头；y是具有含硫侧链基团的氨基酸接头；和z是nir染料。在一些实施方案中，所述具有含硫侧基的氨基酸接头是半胱氨酸。在一些实施方案中，所述具有含硫侧基的氨基酸接头是蛋氨酸。在一些实施方案中，所述具有含硫侧基的氨基酸接头是含有苯硫酚部分的分子。在一些实施方案中，本发明的化合物具有以下形式：b-x-y-z其中b是psma靶向的化合物；x是接头；y是含有硫属元素的侧链基团的氨基酸接头；和z是nir染料。在一些实施方案中，本发明提供以下形式的化合物：b-x-y-z其中b是psma靶向的化合物；x是接头；y是选自酪氨酸、半胱氨酸、赖氨酸或其衍生物的氨基酸；和z是nir染料。在一些实施方案中，y包含酪氨酸或酪氨酸衍生物。在一些实施方案中，y包含酪氨酸，并且碳同位素在酪氨酸的芳环上。在一些实施方案中，y包含具有氢同位素的芳环的氨基酸。在一些实施方案中，本发明的化合物具有以下形式：b-x-y-z其中b是psma靶向的化合物；x是接头；z是nir染料；y包括选自下组的酪氨酸衍生物：或其外消旋混合物。在一些实施方案中，本发明包括化合物b-x-y-z，其中b包含dupa或其衍生物，x包含eaoa，y包含酪氨酸，z包含so456。在一些实施方案中，本发明的化合物具有下式：在一些实施方案中，本发明的化合物具有约500nm至约900nm的吸收和发射最大值。在一些实施方案中，本发明的化合物具有约600nm至800nm的吸收和发射最大值。在一些实施方案中，使本发明的化合物在其分布在组织细胞中后发荧光。在一些实施方案中，通过使化合物经受近红外波长的激发光，使本发明的化合物发荧光。在一些实施方案中，本发明的化合物对psma的结合亲和力类似于dupa的结合亲和力。在一些实施方案中，本发明的化合物对靶向肿瘤细胞具有高选择性。在某些实施方案中，将本发明的化合物给予有其需要的受试者，并且在一些实施方案中，除所述化合物外，给予的组合物还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。本发明的一些实施方案提供了表达psma的生物组织的光学成像方法，所述方法包括：(a)使生物组织与包含psma靶向的nir染料化合物的组合物接触，(b)留出时间使所述组合物中的化合物分布在生物靶点内；(c)用所述化合物可吸收的波长的激发光照射所述组织；和(d)检测由所述化合物发射的光信号。在一些实施方案中，这些方法用于检测与高psma表达相关的疾病。在一些实施方案中，还包括由(d)中发射的信号构建图像的步骤。在一些实施方案中，本发明提供前述方法，其中步骤(a)包括两种或更多种其信号性质可区分的荧光化合物与组织接触，并且任选地组织在受试者中。在一些实施方案中，本发明提供内窥镜、导管、断层摄影系统、手持光学成像系统、手术护目镜或术中显微镜用于照明和/或检测方法步骤的用途。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法用于治疗癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、肾癌、肉瘤、乳腺癌、脑癌、神经内分泌癌、结肠癌、睾丸癌或黑素瘤。在一些实施方案中，本发明的psma靶向的nir染料化合物用于psma表达细胞的成像。在某些实施方案中，这些细胞选自前列腺细胞、前列腺癌细胞、膀胱癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞、肉瘤细胞、乳腺癌细胞、脑癌细胞、神经内分泌癌细胞、结肠癌细胞、睾丸癌细胞或黑素瘤细胞。本发明还提供了靶向生物样品中细胞类型的方法，该方法包括：a)使生物样品与psma靶向的nir染料化合物接触一段时间，并且在允许所述化合物与至少一种靶细胞类型的细胞结合的条件下；b)光学检测生物样品中化合物的存在或不存在，其中在检测步骤c)中化合物的存在表明靶细胞类型存在于生物样品中。在一些实施方案中，本发明提供了用于光学检测表达psma的细胞的方法，该方法包括给予本发明的psma靶向nir染料化合物，并使所述化合物经受激发光源并检测来自所述化合物的荧光。在一些实施方案中，激发光源是近红外波长光。在一些实施方案中，激发光波长在约600至1000纳米范围内。在一些实施方案中，激发光波长在约670至850纳米范围内。在某些实施方案中，本发明提供了对受试者进行图像引导的手术的方法，该方法包括：a)在足以使所述化合物在给定手术部位积聚的条件下给予包含psma靶向nir染料化合物的组合物，持续足以使所述化合物在给定手术部位积聚的时间；b)用红外光照射所述化合物以使所述化合物可视化；和c)对红外光激发时发荧光的区域进行手术切除。在一些实施方案中，本发明的方法的红外光波长在约600至1000纳米范围内。在一些实施方案中，本发明的方法使用的红外光波长在约670至850纳米范围内。本发明的一些实施方案提供了诊断受试者的疾病的方法，该方法包括：a)向需要诊断的受试者给予一定量的psma靶向的nir染料化合物持续一段时间，并且是在允许所述化合物与至少一种表达psma的细胞或组织结合的条件下(psma也在大多数实体肿瘤的新血管系统中表达)；b)测量来自生物样品中存在的化合物的信号；c)将b)中测量的信号与至少一个对照数据组比较，其中所述至少一个对照数据组包含来自权利要求1的化合物的信号，所述化合物与不包含靶细胞类型的生物样品接触；和d)提供疾病诊断，其中步骤c)中的比较表明疾病的存在。本发明的一些实施方案提供了包含psma靶向nir染料化合物的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒用于表达psma的细胞或组织的成像。在一些实施方案中，所述表达psma的细胞是肿瘤细胞。在一些实施方案中，所述表达psma的细胞是非前列腺癌细胞。在某些实施方案中，所述表达psma的细胞是前列腺肿瘤细胞。在某些实施方案中，所述表达psma的细胞是癌细胞。在一些实施方案中，本发明用于检测转移性疾病。在一些实施方案中，本发明化合物用于改善手术切除和/或改善预后。在一些实施方案中，本发明的方法提供比非nir缀合的荧光染料更清洁的手术切缘。在一些实施方案中，本发明的psma靶向的nir染料化合物具有改善的肿瘤背景比。在其它实施方案中，本发明的化合物用于成像、诊断或检测非前列腺癌细胞，所述非前列腺癌细胞选自膀胱癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞、肉瘤细胞、乳腺癌细胞、脑癌细胞、神经内分泌癌细胞、结肠癌细胞、睾丸癌细胞或黑素瘤细胞。在其它实施方案中，被检测的细胞在皮肤下方超过5mm。在一些实施方案中，被检测的组织在皮肤下方超过5mm。在其它实施方案中，被检测的肿瘤在皮肤下方超过5mm。在一些实施方案中，被检测的细胞在受试者的皮肤下方超过6mm、7mm、8mm、9mm或10mm。在本发明的一些实施方案中，染料探针在可见光光谱外是可检测到的。在一些实施方案中，使用大于可见光光谱的染料探针。在一些实施方案中，本发明的化合物包含对650nm至900nm的波长敏感的染料探针。在一些实施方案中，本发明的psma靶向的nir染料化合物在约650nm至1000nm的近红外区域具有最大光吸收波长，例如在一个实施方案中，在约800nm的近红外区域具有最大光吸收波长。在所提供的方法的另一个实施方案中，所述非前列腺癌是膀胱癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、肾癌、肉瘤、乳腺癌、脑癌、神经内分泌癌、结肠癌、睾丸癌或黑色素瘤。在一些实施方案中，本发明的公开内容涉及与近红外(nir)染料缀合的前列腺特异性膜抗原(psma)靶向的化合物及用于其治疗和诊断用途的方法。更具体地，本发明的公开内容提供了用于诊断和治疗与表达前列腺特异性膜抗原(psma)的细胞相关的疾病，例如前列腺癌和相关疾病的化合物和方法。本发明的公开内容进一步描述了用于制备和使用所述化合物的方法和组合物、掺入所述化合物的方法、以及掺入所述化合物的试剂盒。已发现psma靶向的化合物，例如dupa或通过接头(l)将psma靶向配体与nir染料缀合，可用于前列腺癌和涉及表达或过表达psma的致病细胞群的相关疾病的成像、诊断和/或治疗。psma是一种细胞表面蛋白，其在类似于以细胞表面受体如维生素受体观察到的内吞作用的过程中被内化。psma还在大多数实体肿瘤的新血管系统中表达。因此，已经发现，包括具有预定长度和/或预定直径的接头和/或沿其长度的预选的官能团的某些缀合物可用于治疗、成像和/或诊断这样的疾病。在一个说明性实施方案中，所述接头l可以是可释放的或不可释放的接头。在一个方面，所述接头l的长度为至少约7个原子。在一个变型中，所述接头l的长度为至少约10个原子。在一个变型中，所述接头l的长度为至少约14个原子。在另一个变型中，所述接头l的长度为约7至约22个、约7至约24个、或约7至约20个原子。在另一个变型中，所述接头l的长度为约14至约31个、约14至约24个、或约14至约20个原子。在供选择的方面，所述接头l的长度为至少约10埃(a)。在一个变型中，所述接头l的长度为至少约15a。在另一个变型中，所述接头l的长度为至少约20a。在另一个变型中，所述接头l的长度范围为约10a至约30a。在供选择的方面，所述接头l的长度的至少一部分在连接到结合配体b的末端处的直径为约5a或更小。在一个变型中，所述接头l的长度的至少一部分在连接到结合配体b的末端处的直径为约4a或更小，或约3a或更小。应当理解，包括直径要求为约5a或更小、约4a或更小、或约3a或更小的说明性实施方案可以包括对所述接头的预定长度的要求，从而限定所述接头的圆柱形部分。说明性地，在另一个变型中，所述接头包括在连接到结合配体的末端处的圆柱形部分，其长度为至少约7a和直径为约5a或更小、约4a或更小、或约3a或更小。在另一个实施方案中，所述接头l包括能够与psma的一个或多个残基相互作用的一个或多个亲水接头，所述亲水接头包括具有亲水侧链的氨基酸，例如ser、thr、cys、arg、orn、lys、asp、glu、gin等残基。在另一个实施方案中，所述接头l包括能够与psma的一个或多个残基相互作用的一个或多个疏水接头，所述疏水接头包括具有疏水侧链的氨基酸，例如val、leu、phe、tyr、met等残基。应当理解，前述实施方案和方面可单独或彼此组合地包含在所述接头l中。例如，本文考虑和描述了长度为至少约7个原子且直径为约约或更小、或约或更小或更小的接头l，并且本文考虑和描述还包括能够与psma的一个或多个残基相互作用的一个或多个亲水接头，包括val、leu、phe、tyr、met等残基的接头l。在另一个实施方案中，接头的一端不是支链的并且包含碳、氧、氮和硫原子的链。在一个实施方案中，碳、氧、氮和硫原子的直链长度为至少5个原子。在一个变型中，直链的长度为至少7个原子，或至少10个原子。在另一个实施方案中，碳、氧、氮和硫原子链未被取代。在一个变型中，碳、氧、氮和硫原子的链的一部分用二价片段环化。例如，包含二肽phe-phe的接头(l)可以包括通过用乙烯片段环化两个氮的哌嗪-1,4-二基结构，或其取代的变型。在另一个实施方案中，本文描述了药物组合物，其中所述药物组合物以用于治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态、和/或成像与表达或过表达psma的致病细胞群相关的组织和/或细胞的有效量包含本文所述的缀合物。说明性地，所述药物组合物还包括一种或多种载体、稀释剂和/或赋形剂。在另一个实施方案中，本文描述了用于治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态和/或成像与表达或过表达psma的致病细胞群相关的组织和/或细胞的方法。这样的方法包括以有效治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态、和/或成像与表达或过表达psma的致病细胞群相关的组织和/或细胞的量给予本文所述缀合物和/或含有本文所述缀合物的药物组合物的步骤。在一些实施方案中，本文显示这样的psma靶向的nir染料缀合物与组织内表达psma的肿瘤细胞结合。此外，荧光的强度大于用其它近红外染料先前观察到的强度，所述用其它近红外染料用叶酸靶向叶酸受体阳性肿瘤。这种增加的强度实现了从被监测的组织靶向并清楚地识别较小区域的生物样品(例如，较小的肿瘤)。此外，本发明的化合物的增加的强度提供了额外的优点，即可以给予较低剂量/量的染料并仍然产生有意义的结果。因此，本发明的化合物导致更经济的成像技术。此外，额外的优点还有与常规成像化合物相比，较低剂量的本发明的化合物使与向身体给予外来物质相伴随的毒性和其它副作用最小化。此外，对小肿瘤的识别将导致更准确和更有效地切除原发肿瘤，以产生阴性切缘，以及准确识别和去除含有转移癌细胞的淋巴结，并识别卫星疾病。这些优点中的每一个都与所治疗的患者更好的临床结果正相关。在具体的实施方案中，预期除了酪氨酸和酪氨酸衍生物之外，近红外染料与半胱氨酸或半胱氨酸衍生物的psma靶向的缀合物也可以是有用的。此外，考虑到psma靶向的部分与染料的直接连接或染料通过胺接头与dupa或psma靶向的配体的连接也产生来自缀合物的荧光强度的损失，而作为之间的连接部分的酪氨酸或酪氨酸衍生物的存在增强了缀合的化合物的荧光，因为本发明的基于酪氨酸的化合物不需要额外的胺接头与so456缀合，并且还因为通过酪氨酸的酚部分的缀合导致增强的荧光。所述化合物可与荧光介导的分子断层成像系统，例如设计用于检测深层组织中的近红外荧光激活的那些一起使用。所述化合物提供分子和组织特异性，产生高荧光对比度、更亮的荧光信号，并减少背景自发荧光，实现体内患病组织(例如，癌症)的早期检测和分子靶评估的改善。所述化合物可用于深层组织三维成像、靶向手术和定量生物样品中靶细胞类型的量的方法。在具体的实施方案中，所述接头少于10个原子。在其它实施方案中，所述接头少于20个原子。在一些实施方案中，所述接头小于30个原子。在一些实施方案中，所述接头由分隔psma靶向的化合物和nir染料的原子的数量限定。在另一个实施方案中，所述接头具有至少7个原子的链长。在一些实施方案中，所述接头具有至少14个原子的链长。在另一个实施方案中，所述接头具有范围为7个原子至20个原子的链长。在另一个实施方案中，所述接头具有范围为14个原子至24个原子的链长。适合用于本发明的psma靶向化合物可以例如基于以下标准选择，所述标准无意要成为排它性的：结合至表达psma的活细胞；结合至表达psma的新血管系统；与psma结合的高亲和力；结合至psma上的独特表位(以消除组合使用时具有互补活性的抗体将竞争与相同表位结合的可能性)；表达psma的细胞的调理作用；在效应细胞存在下调节生长抑制、吞噬和/或杀死表达psma的细胞；调节(抑制或增强)naaladase、叶酸水解酶、二肽基肽酶iv和/或γ-谷氨酰水解酶活性；在不存在效应细胞的情况下生长抑制、细胞周期停滞和/或细胞毒性；psma的内化；结合至psma上的构象表位；与不表达psma的细胞或组织的最小交叉反应性；和优先结合至psma的二聚体形式而不是psma的单体形式。本文提供的psma靶向化合物、psma抗体及其抗原结合片段通常满足一个或多个前述标准，并且在一些情况下，满足前述标准中的五个以上。在一些实施方案中，本发明的psma靶向化合物满足六个或更多个前述标准。在一些实施方案中，本发明的psma靶向化合物满足七个或更多个前述标准。在一些实施方案中，本发明的psma靶向化合物满足八个或更多个前述标准。在一些实施方案中，本发明的psma靶向化合物满足九个或更多个前述标准。在一些实施方案中，本发明的psma靶向化合物满足十个或更多个前述标准。在一些实施方案中，本发明的psma靶向化合物满足所有前述标准。可以用本文提供的本发明的psma靶向的化合物(例如，psma靶向的nir染料缀合物)成像的肿瘤的实例包括表达psma的任何肿瘤，例如，前列腺癌，膀胱癌，胰腺癌，肺癌，结肠癌，肾癌，黑色素瘤和肉瘤。表达psma的肿瘤包括具有表达psma的新血管系统的肿瘤。在一些实施方案中，psma靶向的分子与psma结合并被细胞上表达的psma内化。因此，psma配体缀合物包含被在细胞上表达的psma内化的。发生这种内化的机制对于本发明的实施并不重要。在一些实施方案中，psma靶向化合物结合至psma分子的细胞外结构域内的构象表位。在其它实施方案中，psma靶向化合物结合至psma上的二聚体特异性表位。通常，结合至二聚体特异性表位的化合物优先结合psma二聚体而不是psma单体。在本发明的一些实施方案中，psma靶向化合物优先结合至psma二聚体。在本发明的一些实施方案中，psma靶向化合物对单体psma蛋白具有低亲和力。在一些实施方案中，psma靶向化合物是配体。在一些实施方案中，psma靶向化合物是2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)。在一些实施方案中，psma靶向化合物是dupa或dupa的衍生物、配体、抑制剂或结合至表达psma的活细胞的拮抗剂。本发明的psma靶向nir染料产生的肿瘤背景信号比高于与非nir染料或非靶向nir染料缀合的psma靶向化合物的肿瘤背景信号比。在一些实施方案中，改善是10倍。在一些实施方案中，肿瘤背景信号比是至少4倍的改善。在一些实施方案中，肿瘤背景比增加至少1.5倍。在一些实施方案中，psma靶向的nir染料背景信号是与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的一半，所述荧光染料对波长小于600nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的一半，所述荧光染料对波长小于600nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的一半，所述荧光染料对波长小于500nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的三分之一，所述荧光染料对波长小于600nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的三分之一，所述荧光染料对波长小于500nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的四分之一，所述荧光染料对波长小于600nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的四分之一，所述荧光染料对波长小于500nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的五分之一，所述荧光染料对波长小于600nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的五分之一，所述荧光染料对波长小于500nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的八分之一，所述荧光染料对波长小于600nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的八分之一，所述荧光染料对波长小于500nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的十分之一，所述荧光染料对波长小于600nm的光具有反应性。在本发明的一些实施方案中，在活细胞上使用psma靶向的nir染料的方法产生的背景信号小于与荧光染料缀合的psma靶向的化合物的背景信号的十分之一，所述荧光染料对波长小于500nm的光具有反应性。在一些实施方案中，psma靶向化合物是特异性结合psma的小分子配体。这样的小分子配体可以以其天然构象结合至psma的酶促位点。而且，这样的小分子配体可具有psma抗体配体的任何一种或多种特征。本发明的公开内容还提供了用于合成氨基酸连接基团的方法，所述氨基酸连接基团与用于psma表达细胞、组织或肿瘤的靶向成像的psma靶向化合物缀合。在某些实施方案中，本发明的公开内容涉及包含psma靶向化合物、连接基团和nir染料的化合物或其盐衍生物。在某些实施方案中，所述连接基团可以是氨基酸、其异构体、衍生物或外消旋混合物。在一些方面，所述染料选自ls288ir800sp054s0121s2076s0456kodakird28和/或选自以下的染料在一些方面，本发明的公开内容提供了将氨基酸连接基团与nir染料缀合的方法，其中所述氨基酸可以是酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、其异构体及衍生物。在某些实施方案中，氨基酸、其异构体或衍生物含有-oh，-nh2或-sh官能团，其在加入稍微摩尔过量的荧光染料时产生荧光基团与氨基酸、其异构体或衍生物的缀合。在其它实施方案中，氨基酸、其异构体或衍生物含有-oh官能团，其在合成时与染料产生醚键，所述染料增加化合物的亮度和检测。在一些实施方案中，本发明的公开内容涉及氨基酸连接基团与nir染料的缀合，其中氨基酸、其异构体或衍生物含有-sh，-seh，-poh或-teh官能团，其在合成时与染料产生c-s，c-se，c-po或c-te键。在一些方面，本发明的公开内容涉及氨基酸连接基团与染料的缀合，所述染料具有约500nm至约900nm的吸收和发射最大值。在其它方面，所述氨基酸连接基团与荧光染料缀合，所述荧光染料具有约600nm至约800nm的吸收和发射最大值。在另外的实施方案中，本发明的公开内容提供了用于将氨基酸连接基团与psma配体缀合的方法，其中所述氨基酸连接基团是酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、其异构体或衍生物，并通过二肽键与叶酸缀合。在另外的方面，本发明的公开内容提供了将连接基团与叶酸配体缀合的方法，其中所述连接基团是酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、其异构体或衍生物。在其它实施方案中，本发明的公开内容涉及将蝶酰基配体与氨基酸连接基团缀合的方法，其中所述连接基团是酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、其异构体或衍生物。在某些方面，所述连接基团的羧酸与任何氨基酸的α碳结合，因此增加了化合物对靶向受体的特异性。在一些实施方案中，接头的电荷有助于对化合物的特异性，其中观察到的化合物对靶向受体的结合亲和力为至少15nm。在其它实施方案中，本发明的公开内容涉及命名为dupa-eaoa-tyr-s0456的化合物的用途，其中eaoa是八氨基辛酸，用于图像引导的手术、肿瘤成像、前列腺成像、表达psma的组织成像、表达psma的肿瘤成像、感染疾病或法医学应用。在其它方面，所述化合物是dupa-eaoa-tyr-s0456衍生物，选自dupa-eaoa-(d)tyr-s0456、dupa-eaoa-homotyr-s0456、dupa-eaoa-beta-homo-tyr-s0456、dupa-eaoa-(nme)-tyr-s0456、dupa-eaoa-tyr(ome)-s0456、dupa-eaoa-tyr(obn)-s0456、dupa-eaoa-nhnh-tyr-oac-s0456、其盐及衍生物。在一些实施方案中，本发明的psma靶向的化合物是psma的小分子配体。一些实施方案包括用于合成下式的化合物或其外消旋混合物的方法：其中：r1选自：和其外消旋混合物：和r2由下式表示：该方法包括以下步骤：(a)使式i的化合物与下式的化合物或在氩气下、在极性有机溶剂、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐和n,n-二异丙基乙胺的存在下反应，以提供下式的化合物：或或其外消旋混合物；(b)使下式的化合物或其外消旋混合物，与碳酸钠和下式的染料化合物反应：(c)分离下式的化合物：其中n为0、1、2、3或4。在一些实施方案中，所述极性有机溶剂选自二甲基亚砜、二甲基甲酰胺和水。另一个实施方案包括用于合成下式的化合物的方法：该方法包括如下步骤：(a)使式i的化合物与下式的化合物：在氩气下、在极性有机溶剂、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化六氟磷酸盐和n,n-二异丙基乙胺的存在下反应，以提供下式的化合物：(b)使下式的化合物与碳酸钠和下式的染料化合物反应：(c)分离下式的化合物其中n为0、1、2、3或4，和其中：r3、r4、r5、r6、r7、r8和r9独立地选自h+、na+、k+和nh4+。另一个实施方案包括用于合成下式的化合物的同位素形式的方法：其中所述同位素形式包含一个或多个选自h2、h3、c13和c14的碳和/或氢同位素，并且进一步地，其中r3、r4、r5、r6、r7、r8和r9独立地选自h+、na+、k+和nh4+；该方法包括以下步骤：(a)使下式的化合物的同位素形式：其中所述同位素形式包含一个或多个选自h2、h3、c13和c14的碳和/或氢同位素，与下式的化合物的同位素形式：其中所述同位素形式包含一个或多个选自h2、h3、c13和c14的碳和/或氢同位素，在氩气下、在极性有机溶剂、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化六氟磷酸盐和n,n-二异丙基乙胺的存在下反应，以提供下式的化合物的同位素形式：其中所述同位素形式包含一个或多个选自h2、h3、c13和c14的碳和/或氢同位素，(b)使下式的化合物的同位素形式：与碳酸钠和下式的染料化合物的同位素形式反应：其中所述同位素形式包含一个或多个选自h2、h3、c13和c14的碳和/或氢同位素，(c)分离下式的化合物的同位素形式：其中n为0、1、2、3或4，和其中：r3、r4、r5、r6、r7、r8和r9独立地选自h+、na+、k+和nh4+。psma靶向的nir染料缀合物及其合成以下方案显示了本发明的psma靶向的nir染料缀合物的合成。方案1：试剂和条件：(a)(i)三光气，tea/dcm，-78℃；(ii)h-l-glu(obn)-otbu·hcl；(b)h2；pd-c/dcm(a)固相合成方案2：试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/dmf，室温，10min；(ii)fmoc-phe-oh，hatu，dmf/dipea，2h；(b)(i)20％哌啶/dmf，室温，10min；(ii)fmoc-八氨基辛酸-oh，hatu，dmf/dipea，2h；(c)(i)20％哌啶/dmf，室温，10min；(ii)4，hatu，dmf/dipea，2h；d)tfa：h2o：tips(95：2.5：2.5)，1h；(e)(i)h2o，naoh水溶液/ph＝9.5，室温；(ii)s0456，h2o，100℃，15min。(b)溶液相合成接下来的实施例仅用于说明本发明的公开内容的特定实施方案的目的而提供，并不意图限制所附权利要求的范围。如本文所讨论的，所公开的化合物和方法的特定特征可以以各种方式进行修改，所述各种方式为对它们提供的可操作性或优点不是必需的。例如，化合物可以掺入多种氨基酸和氨基酸衍生物以及靶向配体，这取决于所述化合物将被使用的具体用途。本领域技术人员将理解，这样的修改包含在所附权利要求的范围内。实施例通用方法：使用rpmi培养基(gibco，ny)10％热灭活的胎牛血清(atlantabiological，ga)和1％青霉素链霉素(gibco，ny)在5％二氧化碳：95％湿空气的气氛中在37℃下至少进行六次传代(passage)，22rv1细胞(人前列腺癌细胞)生长为单层，然后将其用于检测。无胸腺雄性裸(nu/nu)小鼠(7周龄，18-20g)购自envigo(indianapolis，in)并维持正常的啮齿动物饮食(teklad，wi)。以5只/笼将动物饲养在带栅栏(barrier)、无病原体的有遮盖的笼架(cloakedrack)中。根据需要给予高压蒸汽处理的自来水和食物。在研究期间，以标准的12小时光亮-黑暗循环将动物安置在无菌环境中。通过耳朵打孔逐一识别小鼠。所有动物程序均经普渡动物保护和使用委员会(purdueanimalcareandusecommittee批准)。根据国家和国际动物人道待遇准则进行动物护理和研究。体外结合和特异性：将22rv1细胞接种到t75烧瓶中并使其在24小时内形成单层。胰蛋白酶消化后，将释放细胞转移到离心管(1×106个细胞/管)中并离心。在存在或不存在100倍过量配体—高亲和力psma抑制剂的情况下，用含有升高浓度的所需的1：otl78染料化合物的新鲜培养基置换培养基，并在37℃孵育1小时。用新鲜培养基(2×1.0ml)和pbs(1×1.0ml)冲洗后，将细胞重悬于pbs(1.0ml)中，并使用荧光计(cary，agilent)分析细胞结合荧光(100000个细胞/样本)。使用graphpadprism4，以细胞结合荧光百分比相对测试物品的对数浓度的图来计算相对结合亲和力。全身成像：在7周龄雄性nu/nu小鼠肩部皮下接种22rv1细胞(5.0×106/小鼠，在rpmi培养基中的50％高浓度基质胶中)。使用卡尺每2天在垂直方向上测量肿瘤的生长(按照相同的时间表监测体重)，并且肿瘤的体积计算为0.5×l×w2(l＝最长轴，且w＝垂直于l的轴，以毫米为单位)。一旦肿瘤体积达到400mm3，给动物(5只小鼠/组)静脉内注射10nmol所需的1：otl78的磷酸盐缓冲盐水溶液(100μl)。为了全身成像和生物分布研究，在给予感兴趣的化合物2小时后通过co2窒息对动物实施安乐死。然后使用具有livingimage4.0软件的caliperivisluminaiiimagingstation(perkinelmerinc，ma)进行全身成像(完整肿瘤)实验。成像设置：-灯级：中等；激发：745nm；发射：icg(830nm)；落射照射(epiillumination)；合并(binning)：4(m)，fov＝12.5；f-stop＝2；采集时间＝1s。为了时间依赖性研究，使用异氟醚在麻醉下对动物进行成像。然后使用具有livingimage4.0软件的caliperivisluminaiiimagingstation(perkinelmerinc，ma)进行全身成像(完整肿瘤)实验。组织生物分布：在全身成像后，解剖动物并如前使用ivis成像仪分析所选组织(心脏、肺、肝、脾、肾、胃、小肠、大肠、肌肉、皮肤和肿瘤)的荧光活性。成像设置：-灯级：中等；激发：745nm；发射：icg；落射照射(epiillumination)；合并(binning)：4(m)，fov＝12.5；f-stop＝2；采集时间＝1s。实施例(1)：psma靶向的nir染料缀合物的临床前评估，其中配体和nir染料之间的接头/间隔基的长度随机变化。结论：化合物1：otl78在776nm激发并在796nm发射(图1)，证明20nm斯托克斯位移，具有很好的nir性质。由研究得到的解离常数(kd)5计算为1nm(图2)，表明对psma的非常高的亲和力。携带22rv1肿瘤异种移植物的小鼠的全身成像(图3)和它们的离体组织生物分布(图4)表明化合物1：otl78仅在psma阳性肿瘤中被摄取，而在其它组织中没有积聚，显示出非常高的肿瘤背景比。如图5a和5b中所见，otl78不在psma阴性的pc3前列腺肿瘤中积聚，表明对psma的非常高的特异性。时间依赖性全身成像研究(图6)证明otl78在2小时内在psma阳性的肿瘤中饱和并且在肿瘤中保留超过24小时。实施例(2)：dupa_peg2_phe_tyr-s0456(1：otl78)的一般合成步骤i：用于步骤i的反应物：向50ml圆底烧瓶中装入搅拌棒、在胺上具有羧基苄基(cbz)保护基的(l)苯丙氨酸((l)-cbznh-phe-oh[(6)，1.0g，3.34mmol，1当量)]、在羧基和苯基氧上具有叔丁基保护基团的(l)-酪氨酸((l)-nh2-tyr(-otbu)-otbu·hcl[(7)，1.156g，3.51mmol，1.05当量)]，以及hatu(1.334g，3.51mmol，1.05当量)。然后，将dmso(10ml)加入圆底烧瓶，以得到悬浮液[悬浮液i-a]。hatu是1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化六氟磷酸盐。dipea是n,n-二异丙基乙胺。dmso是二甲基亚砜。将dipea(1.454ml，8.35mmol，2.5当量)在23℃下，在5分钟内缓慢加到悬浮液i-a，以形成澄清溶液。将反应混合物在23℃下搅拌2小时。通过lcms监测反应进程。将反应混合物滴加到搅拌的60ml冷的5％柠檬酸-1nnacl溶液(通过向100ml5％柠檬酸溶液加入5.85gnacl制备)，以得到粗品化合物8((cbznh-(l)phe-nh-(l)tyr(-otbu)-otbu)·hcl的沉淀物。过滤沉淀物并溶解在etoac(75ml)中。用水(25ml)洗涤etoac层，然后用盐水(25ml)洗涤，用无水na2so4干燥。过滤干燥的etoac层并在真空下浓缩。通过lc/ms分析粗品化合物8(图7a-7d)，并且不经进一步纯化用于下一步。分离粗品化合物8，产率95为％。用于粗品化合物8的lc/ms方法：仪器：acquityuplc，waters柱：behc18，1.7μm，2.1×50mm。按照表1中所示的梯度程序，在7分钟内，洗脱液为95％-5％-95％的20mm醋酸铵水溶液对应5％-95％-5％的乙腈。流速为0.35ml/min。检测器选自220nmuv检测器(图7a)、263nmuv检测器(图7b)、二极管阵列(图7c)。表1：洗脱液a：20mm醋酸铵(nh4oac)水溶液；洗脱液b：乙腈(acn)。时间流速ml/min％a％b00.359552.20.3525752.80.355954.00.355954.60.3595570.359557.010955步骤ii：羧基苄基(cbz)脱保护用于步骤ii的反应物向50ml圆底烧瓶中装入搅拌棒、cbznh-phe-tyr-(otbu)-otbu[(8)，1.5g，2.61mmol]和dcm(9ml)。溶解反应混合物后，将pd/c(10％pd基，20％wt/wt，300mg)按份加入圆底烧瓶，然后加入无水meoh(18ml)。将反应混合物脱气三次，并在室温下搅拌下将h2气体鼓泡通过反应混合物3小时。用于粗品化合物9的lc/ms方法与用于粗化合物8的lc/ms方法相同。检测器选自220nmuv检测器(图8a)、263nmuv检测器(图8b)、二极管阵列(图8c)和质谱仪(图8d)。将反应混合物通过硅藻土塞过滤，用甲醇(meoh)洗涤，并将滤液真空浓缩，以得到粗品化合物9。通过lc/ms分析粗品化合物9，并且不经进一步纯化用于下一步骤。分离化合物9，产率为92％。纯化化合物9后的lc/ms方法与用于粗品化合物9的lc/ms方法相同。检测器选自220nmuv检测器(图9a)、263nmuv检测器(图9b)、二极管阵列(图9c)和质谱仪(图9d)。步骤iii：添加peg2用于步骤iii的反应物：在50ml圆底烧瓶中装入搅拌棒、在胺上具有羧基苄基(cbz)保护基团的聚乙二醇反应物(cbz-nh-peg2-co2h[(10)3.10g，9.96mmol，1当量)、nh2-phe-tyr(otbu)-otbu(9，4.39g，9.96mmol，1.0当量)和hatu(4.0g，10.46mmol，1.05当量)。然后在氩气下将dmso(20ml)加入圆底烧瓶并搅拌至溶解。在23℃，5分钟内将dipea(3.48ml，19.92mmol，2.0当量)缓慢加至反应混合物。将反应在23℃下搅拌2小时，并通过lc/ms监测反应进程。检测器选自220nmuv检测器(图10a)、263nmuv检测器(图10b)、二极管阵列(图10c)和质谱仪(图10d)。将反应混合物滴加到搅拌的120ml冷的5％柠檬酸-1nnacl溶液(通过向1000ml的5％柠檬酸溶液加入58.5gnacl制备)以沉淀为胶状固体。在倾析水之后过滤胶状残余物并将其溶解在etoac(150ml)中。用水(100ml)洗涤etoac层，然后用盐水(100ml)洗涤，然后用无水na2so4干燥。过滤干燥的etoac层并在真空下将其浓缩。使用dcm：etoac作为流动相，使用硅胶柱纯化粗产物。将产物用20-40％etoac的dcm溶液洗脱。将合并的纯组分在真空下浓缩并用于下一步骤(结晶方法以避免进程中硅胶柱色谱)。分离纯化的化合物11，产率为86％(进程中反应优化以提高产率)。纯化化合物11后的lc/ms方法与用于粗品化合物9的lc/ms方法相同。检测器选自220nmuv检测器(图11a)、263nmuv检测器(图11b)、二极管阵列(图11c)和质谱仪(图11d)。步骤iv：羧基苄基(cbz)脱保护用于步骤iv的反应物向50ml圆底烧瓶中装入搅拌棒、cbznh-peg2-phe-tyr(otbu)-otbu[(11)，0.80g，1.09mmol)和dcm(3ml)。溶解反应混合物后，按份加入pd/c(10％wt/wt，0.08g)，然后加入无水甲醇(7ml)。将反应混合物脱气三次，并在室温搅拌下将氢气鼓泡通过反应混合物3小时。通过lc/ms监测反应进程。检测器选自220nmuv检测器(图12a)、263nmuv检测器(图12b)、二极管阵列(图12c)和质谱仪(图12d)。将反应混合物通过硅藻土塞过滤，用meoh洗涤，并在真空下浓缩，以得到化合物12。未经进一步纯化，粗产物用于下一步骤。以定量产率分离化合物12。步骤v：添加dupa用于步骤v的反应物：在50ml圆底烧瓶中装入搅拌棒、在四个羧基中的三个上具有叔丁基保护基团的4,2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)(dupa-(otbu)3-oh[0.46g，0.95mmol，1当量]反应物、化合物12(nh2-peg2-phe-tyr-(otbu)-otbu[0.60g，1.0mmol，1.05当量]和hatu(0.38g，1.0mmol，1.05当量)。然后在氩气下向反应烧瓶加入dmso(3ml)。在23℃，5分钟内将dipea(0.33ml，1.9mmol，2.0当量)缓慢加入反应混合物。将反应在23℃下搅拌2小时。通过lc/ms确认产物形成。检测器选自220nmuv检测器(图13a)、263nmuv检测器(图13b)、二极管阵列(图13c)和质谱仪(图13d)。将反应混合物滴加至搅拌的18ml冷的5％柠檬酸-1nnacl溶液(通过向100ml的5％柠檬酸溶液加入5.85gnacl制备)以形成胶状固体。过滤残余胶状物，将其溶于乙酸乙酯(20ml)中，用水(15ml)洗涤，然后用盐水(15ml)洗涤，用无水na2so4干燥，过滤并浓缩。使用60-80％etoac的二氯甲烷(dcm)溶液、然后使用5％甲醇的dcm溶液通过硅胶柱色谱法纯化粗产物。分离纯化的化合物13，产率为75％。检测器选自220nmuv检测器(图14a)、263nmuv检测器(图14b)、二极管阵列(图14c)和质谱仪(图14d)。步骤vi：叔丁基脱保护用于步骤vi的反应物向25ml圆底烧瓶中装入搅拌棒和化合物13(dupa-(otbu)3-peg2-phe-tyr-(otbu)-otbu[0.50g，0.56mmol，1当量])。在室温下将tfa：tips：h2o(95：2.5：2.5，3.0ml)的溶液加入反应烧瓶。将反应混合物在室温下搅拌1小时，并通过lc/ms监测反应进程。在真空下(旋转蒸发仪)蒸发反应混合物，并将浓缩的反应混合物滴添至搅拌的冷醚(30ml)，以得到化合物5(dupa_peg2_phe_tyr-s0456)的白色沉淀。将沉淀的产物离心，用冷醚(2×20ml)洗涤，并在高真空下干燥，以得到化合物5，为白色固体。以定量产率分离化合物10。检测器选自220nmuv检测器(图15a)、263nmuv检测器(图15b)、二极管阵列(图15c)和质谱仪(图15d)。化合物5的纯化样品制备：将2克粗品化合物5悬浮在磷酸钠缓冲液(ph7.1，30ml)中，并在搅拌下使用饱和nahco3水溶液将ph调节至7.5，以形成澄清的浅黄色溶液。在注入hplc之前，将溶液通过2μm过滤器过滤。用于化合物10纯化的lc/ms方法：仪器：acquityuplc，waters柱：behc18，10μm，250×50mm。按照表2所示的梯度程序，在45分钟内，40％-98％的包含磷酸二氢钠一水合物(0.051％)+磷酸氢二钠七水合物(0.169％)的ph7.1的10mm的磷酸钠水溶液对应2％-60％的乙腈。流速为50ml/min。检测器选自220nmuv检测器(图7a)、275nmuv检测器(图7b)、二极管阵列(图7c)。表2：洗脱液a：包含磷酸二氢钠一水合物(0.051％)+磷酸氢二钠七水合物(0.169％)的ph7.1的10mm磷酸钠水溶液；洗脱液b：乙腈：时间流速ml/min％a％b0509821550752522504060305040604550982555098255.0150982通过hplc的14的脱盐方法用于化合物10纯化的lc/ms方法：仪器：acquityuplc，waters柱：behc18，10μm，250×50mm。按照表3中所示的梯度程序，在45分钟内，10％-99％的水对应1％-90％的乙腈。流速为50ml/min。检测器选自220nmuv检测器(图13a)、275nmuv检测器(图16b)、二极管阵列(图16c)、质谱仪(图16d)和二极管阵列(图16e)。表3：洗脱液a：水；洗脱液b：乙腈：时间流速ml/min％a％b050991155099125501090285010903550991455099145.0150991在真空下(在37℃水浴温度下的旋转蒸发仪上)蒸发14的合并的纯组分以蒸发乙腈并使总体积达到50ml并注射到hplc上以除去磷酸盐。将纯组分在真空下(在37℃水浴温度下的旋转蒸发仪上)浓缩，冷冻后冻干，以得到白色固体化合物10。步骤vii：添加s0456用于步骤vii的反应物*1.0mna2co3水溶液+水，加一起使得就14而言，浓度为0.1m。向200ml圆底烧瓶中装入搅拌棒和化合物14(dupa_peg2_phe_tyr-oh[5.0g，5.697mmol，1当量])。将水(50.73ml)加入圆底烧瓶和搅拌悬浮液，以得到澄清的无色溶液，溶液vii-a。将新制备的1.0mna2co3水溶液(6.27ml，6.697mmol，1.1当量)在23℃下在5分钟内缓慢加至溶液vii-a以达到ph10.4。使用ph计记录溶液的ph。将s0456的钠盐(5,431g，5.697mmol，1.0当量)加至溶液vii-b，并搅拌内容物直至形成均匀的绿色悬浮液，悬浮液vii-c。将含有悬浮液vii-c的烧瓶与冷凝器组装在一起，浸入70℃油浴中，并搅拌4小时。每小时通过lc/ms在775nm下监测反应，直至转化率>98％(otl0078的形成与s0456的消耗相比)。使用水浴将反应混合物冷却至室温。向1l烧杯中加入60g硅胶，并将来自步骤5的反应混合物转移到硅胶中。用刮刀混合反应混合物直至硅胶得到均匀的深绿色。向丙酮(250ml)加入深绿色硅胶并用刮刀搅拌。使硅胶沉降并倾析上清液。用另外250ml丙酮重复该步骤，然后用250ml10％水+90％丙酮混合物重复该步骤。使用丙酮(600ml)中的60g硅胶填充柱，并加压至丙酮水平刚好高于硅胶。将来自步骤7的绿色硅胶混合物(～60g)通过将其悬浮在10％水+90％丙酮混合物中而添加到填充的硅胶床的顶部。绿色硅胶床上覆盖一些沙子以防止损坏硅胶床。用10％水+90％丙酮混合物(15l)，然后用10％水+90％乙腈(12l)洗涤柱床(60g硅胶和～60g硅胶+来自步骤7的绿色反应混合物)。然后用30％水+70％乙腈(2l)洗涤柱，直至所有绿色物质从硅胶柱洗脱并收集成组分。在通过lc/ms评估组分的纯度后，将纯组分合并在一起。将合并的组分通过0.2微米过滤器过滤以除去痕量硅胶颗粒(如果存在)，并在真空下(在37℃水浴温度下的旋转蒸发仪上)浓缩以除去乙腈。冷冻含水残余物后，将其冷冻干燥48小时。检测器选自220nm二极管阵列(图17a)、490nm二极管阵列(图17b)、550nm二极管阵列(图17c)、775nm二极管阵列(图17d)。在使用lc/ms重新评估物质的纯度之后，将干燥的绿色固体储存在琥珀色瓶中。分离纯化的化合物1(otl78)，产率为72.3％(7.4g)。表4包括可能的杂质：用于化合物1纯化的使用hplc柱的uplc/ms方法：仪器：acquityuplc，waters柱：silicappfnec，3μm，4.6×150mm。按照表5中所示的梯度程序，在45分钟内，30％-97％的包含磷酸二氢钠一水合物(0.051％)+磷酸氢二钠七水合物(0.169％)的ph7.1的10mm磷酸钠水溶液对应于3％-70％的乙腈。流速为0.4ml/min。检测器选自220nmuv检测器(图7a)、275nmuv检测器(图7b)、二极管阵列(图7c)。表5：洗脱液a：ph7.1的包含磷酸二氢钠一水合物(0.051％)+磷酸氢二钠七水合物(0.169％)的10mm磷酸钠水溶液；洗脱液b：乙腈：图19a-d说明了在步骤viilc/ms方法硅胶柱纯化和冻干之后，在220nm(图19a)、490nm(图19b)、550nm(图19c)和775nm(图19d)波长下的化合物1检测。图20a-d说明在uplc/ms方法硅胶柱纯化和冻干后，在490nm(图20a)、550nm(图20b)、775nm(图20c)和265nm(图20d)波长下的化合物1检测。图21a-c说明hplc纯化后在490nm(图21a)、550nm(图21b)和775nm(图21c)波长下的化合物1检测。图22a-c分别是图21a-c的放大视图。图23a-d说明在hplc纯化后使用hplc柱的uplc之后，在490nm(图23a)、550nm(图23b)、775nm(图23c)和265nm(图20d)波长下的化合物1检测。图24a-c分别是图23a-c的放大视图。步骤viii(s)-5-苄基-1-叔丁基2-(3-((s)-1,5-二叔丁氧基-1,5-二氧戊-2-基)脲基)戊二酸酯(15)的合成在氩气氛下，向500ml圆底烧瓶中装入化合物2、在每个羧酸基团的每个羟基上具有叔丁基保护基团的谷氨酸(6.0g，20.28mmol，1当量)和三光气(1.805g，6.69mmol，0.333当量)。在惰性气氛下加入约210ml二氯甲烷，以得到澄清溶液，并在干冰/丙酮浴(悬浮液viii-a)中冷却至-78℃。在10分钟内将三乙胺(9.9ml，8.19mmol，3.5当量)滴加到反应混合物(悬浮液viii-a)，以形成浓稠的白色悬浮液。将反应混合物(悬浮液viii-a)温热至室温并在室温下搅拌3小时。向另一个100ml圆底烧瓶中加入化合物15，在α-羧酸基团的羟基上具有叔丁基保护基团和在侧链羧酸的羟基上具有苄基的谷氨酸(6.69g，20.28mmol，1.0当量)，并溶于40mldcm(溶液viii-b)中。在2分钟内将三乙胺(5.65ml，40.56mmol，2.0当量)加至悬浮液viii-b，然后在30分钟的时间内通过套管滴加悬浮液viii-b至悬浮液viii-a，以得到白色悬浮液。将反应在23℃下搅拌12小时。向反应加入400ml1mhcl水溶液并再搅拌1小时。使用etoac萃取反应混合物三次，得200ml萃取物。将合并的有机萃取液用100ml水洗涤两次，然后用100ml盐水洗涤，用无水na2so4干燥，过滤，并在真空下浓缩，以得到化合物3，为透明稠油状物(14.10g)，其无需进一步纯化而进行下一步。(s)-5-(叔丁氧基)-4-(3-((s)-1,5-二叔丁氧基-1,5-二氧戊-2-基)脲基)-5-氧代戊酸(化合物4，dupa)的合成在500ml圆底烧瓶中，将14.1克化合物3溶解在200mldcm中。在氩气氛下加入6克10％pd/c。将反应混合物在大气氢压下搅拌7小时。通过tlc监测反应。反应完成后，就通过硅藻土垫过滤除去pd/c，然后用dcm洗涤，并浓缩滤液。使用快速色谱法(己烷：etoac，40：60)纯化粗产物，以得到化合物4，为无色油状物。使用己烷：dcm结晶，得到白色固体(8.01g，两步收率为80％)。当前第1页12