一种荷丹片的质量检测方法与流程

文档序号:19226386发布日期:2019-11-26 02:35阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种荷丹片的质量检测方法,其特征在于,所述检测方法包括荷叶、补骨脂、丹参、山楂和番泻叶的薄层鉴别,

荷叶的薄层鉴别:

(1)取本品薄膜衣片,加氨试液溶解,加二氯甲烷振摇提取,二氯甲烷液浓缩,用盐酸溶液萃取,酸水液用浓氨试液调节ph值至9~10,再用二氯甲烷液振摇提取,二氯甲烷液蒸干,残渣加二氯甲烷溶解,作为供试品溶液,另取荷叶碱对照品,加二氯甲烷制成对照品溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,分别吸取上述两种供试品溶液,点于同一硅胶g薄层板上,以正丁醇:醋酸:水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以显色剂,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同顏色的斑点,

补骨脂的薄层鉴别:

(2)取本品薄膜衣片,加乙醇超声提取,放冷,滤过,蒸干,残渣加乙醇溶解作为供试品溶液,取补骨脂对照药材同法制得对照药材溶液,另取补骨脂素、异补骨脂素对照品,加乙醇制成混合溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取上述三种溶液分别点于同一硅胶g薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以显色剂,置紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同的两个荧光斑点,

丹参的薄层鉴别:

(3)取本品薄膜衣片,加乙醇超声提取,过滤,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯溶解作为供试品溶液,取丹参对照药材同法制得对照药材溶液,另取丹参酮ⅱa对照品,加乙醇制成对照品溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上,以石油醚:乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,在紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色荧光斑点,

山楂的薄层鉴别:

(4)取本品薄膜衣片,加甲醇加热回流,过滤,滤液挥干,残渣加水溶解,用乙酸乙酯振摇提取,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇溶解作为供试品溶液,另取山楂对照药材加水提取,滤过,浓缩,用乙酸乙酯振摇提取,同法制成对照药材溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取供试品溶液、对照药材溶液,分别点于同一硅胶g薄层板上,以环已烷:乙酸乙酯:甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以显色剂,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,

番泻叶的薄层鉴别:

(5)取本品薄膜衣片,加甲醇-乙酸乙酯混合溶液加热回流,过滤,滤液蒸干,残渣加甲醇溶解作为供试品溶液,取番泻叶对照药材加甲醇加热回流,滤过,滤液蒸干,残渣加水溶解,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取,二氯甲烷液用碳酸钠溶液振摇提取,碳酸钠溶液用盐酸调节ph值至2,再用二氯甲烷振摇提取,二氯甲烷溶液用水洗涤,蒸干,残渣加甲醇溶解作为对照药材溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取上述供试品溶液与对照药材溶液分别点于同一硅胶g薄层板上,以正己烷:乙酸乙酯:甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,置氨蒸气中熏后,斑点变成红色。

2.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,荷叶的薄层鉴别,步骤如下:

取本品薄膜衣片3g,研细,加氨试液20ml溶解,加二氯甲烷振摇提取3次,每次30ml,合并二氯甲烷液,浓缩至约10ml用0.01mol/l的盐酸溶液20ml萃取,弃去二氯甲烷液,酸水液用浓氨试液调节ph值至9~10,再用二氯甲烷液振摇提取3次,每次10ml,合并二氯甲烷液,蒸干,残渣加二氯甲烷lml使溶解,作为供试品溶液,另取荷叶碱对照品,加二氯甲烷制成每lml含0.3mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,分别吸取上述两种供试品溶液6μl、10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以正丁醇-醋酸-水(4:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同顏色的斑点。

3.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,补骨脂的薄层鉴别,步骤如下:

取本品薄膜衣片2g,研细,加乙醇10ml,超声15分钟,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液,取补骨脂对照药材粉末0.5g,同法制得对照药材溶液,另取补骨脂素、异补骨脂素对照品,加乙醇制成每1ml含2mg的混合溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取上述三种溶液各2~5μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%氢氧化钾乙醇溶液,置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同的两个荧光斑点。

4.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,丹参的薄层鉴别,步骤如下:

取本品薄膜衣片2g,研细,加乙醇10ml,超声15分钟,过滤,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,取丹参对照药材粉末0.5g,同法制得对照药材溶液,另取丹参酮ⅱa对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上,以石油醚(60~90℃)∶乙酸乙酯(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,在紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色荧光斑点。

5.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,山楂的薄层鉴别,步骤如下:

取本品薄膜衣片1.2g,研细,加甲醇50ml,加热回流30分钟,过滤,滤液挥干,残渣加水20ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取山楂对照药材4g,加水100ml,煎煮1小时,滤过,滤液浓缩至20ml,用稀盐酸调节ph值至1~2,用乙酸乙酯振摇提取2次,同法制成对照药材溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液20μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以环已烷-乙酸乙酯-甲酸(20:20:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铁乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。

6.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,番泻叶的薄层鉴别,步骤如下:

取本品薄膜衣片1.5g,研细,加甲醇-乙酸乙酯(1:1)的混合溶液15ml,加热回流15分钟,放冷,过滤,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液,取番泻叶对照药材0.5g,加甲醇15ml,加热回流15分钟,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加水15ml使溶解,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次15ml,合并二氯甲烷液,用5%碳酸钠溶液25ml振摇提取,弃去二氯甲烷液,碳酸钠溶液用盐酸调节ph值至2,再用二氯甲烷30ml振摇提取,分取二氯甲烷液,用水洗涤2次,每次30ml,二氯甲烷溶液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶h薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30:10:1)为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,置氨蒸气中熏后,斑点变成红色。

7.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,对番泻叶中的大黄酸进行了限量测定,

其中大黄酸限量测定方法如下:

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%甲酸水溶液(31:69)为流动相;检测波长为254nm,理论板数按大黄酸峰计算应不低于5000,

对照品溶液的制备取大黄酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含1μg的溶液,即得,

供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片,研细,取约0.5g,精密称定,置于25ml容量瓶中,加甲醇适量,超声处理20分钟,取出,放至室温,并定容至刻度,摇匀,14000rpm离心10分钟,取上清液,即得,

测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入超高效液相色谱仪,测定,即得,

本品每片含番泻叶以大黄酸(c15h18o6)计,不得过0.10mg。

8.根据权利要求7所述的质量检测方法,其特征在于,还包括对补骨脂中的补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂苷、异补骨脂苷进行了含量测定:

(1)补骨脂素、异补骨脂素

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(20:80)为流动相;检测波长为246nm,柱温60℃,流速0.3ml/min,理论板数按补骨脂素、异补骨脂素峰计算应不低于5000,

对照品溶液的制备取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每1ml各含5μg的混合对照品溶液,即得,

供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片,研细,取约0.5g,精密称定,置于25ml容量瓶中,加甲醇适量,超声处理15分钟,取出,放至室温,并定容至刻度,摇匀,14000rpm离心10分钟,取上清液,即得,

测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入超高效液相色谱仪,测定,即得,

(2)补骨脂苷、异补骨脂苷

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%甲酸水溶液(15.7:84.3)为流动相;检测波长为246nm,柱温50℃,流速0.3ml/min,理论板数按补骨脂苷计算应不低于5000,

对照品溶液的制备取补骨脂苷、异补骨脂苷对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成每1ml分别含12μg、8μg的混合对照品溶液,即得,

供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片,研细,取约0.5g,精密称定,置于25ml容量瓶中,加甲醇适量,超声处理20分钟,取出,放至室温,并定容至刻度,摇匀,取5ml置10ml容量瓶中,用10%甲醇定容至刻度,摇匀,14000rpm离心10分钟,取上清液,即得,

测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入超高效液相色谱仪,测定,即得,

本品每片含盐补骨脂以游离型补骨脂素(c11h6o3)和异补骨脂素(c11h6o3)总量计,薄膜衣片每片不得少于0.21mg;本品每片含盐补骨脂以游离型和结合型补骨脂素(c11h6o3)和异补骨脂素(c11h6o3)(补骨脂苷、异补骨脂苷与补骨脂素、异补骨脂素的折算系数0.5082)总量计,薄膜衣片每片不得多于3.38mg。

9.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,还包括对丹参中的有效成分丹酚酸b进行了含量测定,

其中丹酚酸b含量测定方法如下:

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%甲酸水溶液(18:82)为流动相;检测波长为286nm,柱温50℃,流速0.3ml/min,理论板数按丹酚酸b峰计算应不低于5000,

对照品溶液的制备取丹酚酸b对照品适量,精密称定,加75%甲醇制成每1ml含29μg的溶液,即得,

供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片,研细,取约0.5g,精密称定,置于50ml容量瓶中,加75%甲醇适量,超声处理20分钟,取出,放置室温,并定容至刻度,摇匀,取5ml置10ml容量瓶中50%甲醇定容至刻度,混匀,14000rpm离心10分钟,取上清液,即得,

测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入超高效液相色谱仪,测定,即得,

本品每片含丹参以丹酚酸b(c36h30o16)计,薄膜衣片每片不得少于1.37mg。

10.根据权利要求9所述的质量检测方法,其特征在于,荷叶中的有效成分荷叶碱的含量测定方法如下:

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78)为流动相;检测波长为270nm,理论板数按荷叶碱峰计算应不低于2000,

对照品溶液的制备取荷叶碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含16μg的溶液,即得,

供试品溶液的制备取本品薄膜衣片24片,研细,取约0.4g,精密称定,用加浓氨试液5ml湿润,加三氯甲烷60ml,加热回流3小时,放冷,移至分液漏斗中,分取三氯甲烷层,余留物再用三氯甲烷25ml分3次振摇提取,合并三氯甲烷液,回收三氯甲烷至干,残渣用乙醇溶解,转移至10ml量瓶中,加乙醇至刻度,滤过,取续滤液,即得,

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得,

本品每片含荷叶以荷叶碱(c19h21no3)计,薄膜衣片每片不得少于0.25mg。


技术总结
本发明涉及荷丹片的质量检测方法。本发明所述检测方法包括荷叶、补骨脂、丹参、山楂和番泻叶的薄层鉴别,其中,荷叶的薄层鉴别:取本品薄膜衣片,加氨试液溶解,加二氯甲烷振摇提取,二氯甲烷液浓缩,用盐酸溶液萃取,酸水液用浓氨试液调节pH值,再用二氯甲烷液振摇提取,二氯甲烷液蒸干,残渣加二氯甲烷溶解,作为供试品溶液,另取荷叶碱对照品,加二氯甲烷制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,分别吸取上述两种供试品溶液,点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇:醋酸:水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以显色剂,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同顏色的斑点。

技术研发人员:王跃飞;丁佳敏;王丹妮;曾英姿;安少凯;赵磊
受保护的技术使用者:南昌济顺制药有限公司
技术研发日:2019.09.20
技术公布日:2019.11.22
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