一种少腹逐瘀丸的质量检测方法与流程

本发明涉及一种中成药少腹逐瘀丸（小蜜丸）及其质量检测方法，属于中药制剂分析领域。

背景技术：

少腹逐瘀丸（小蜜丸）的主要成分和含量如下：

当归300g蒲黄300g

五灵脂（醋炒）200g赤芍200g

小茴香（盐炒）100g延胡索（醋制）100g

没药（炒）100g川芎100g

肉桂100g炮姜20g

其制备方法为：以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜100～110g制成小蜜丸，即得。

中国药典收载的少腹逐瘀丸（大蜜丸），质量标准中只以显微鉴别法鉴别处方中当归、蒲黄、赤芍、肉桂、小茴香和延胡索，以薄层色谱法鉴别赤芍中芍药苷，无含量测定，质量控制方法不足以全面控制少腹逐瘀丸（大蜜丸）的产品质量。中国专利cn201610912764.7公开了一种中药复方中姜的鉴别备方法，公开了少腹逐瘀丸中炮姜的tlc鉴别方法。但现有技术中，尚没有比较全面的质量控制方法反映少腹逐瘀丸（小蜜丸）的质量状况，因而无法对少腹逐瘀丸（小蜜丸）的生产过程和产品质量进行有效地控制，不能较好的保证其药物疗效。

高效液相色谱(hplc)具有快速、灵敏、分离效能高等优点，在中药定性和定量分析中，采用hplc法分离特征成分后，用检测器进行检测分析，是全面评价中药组合物质量的有效方法。为了克服上述现有技术的不足，提高少腹逐瘀丸（小蜜丸）质量控制方法，本发明人在将少腹逐瘀丸（大蜜丸）改为小蜜丸的基础上，增加了薄层色谱法鉴别处方中当归、川芎，蒲黄，延胡索，同时采用hplc测定制剂中赤芍中芍药苷的含量，提高质量检测方法，更好的控制产品质量，该方法专属性好、耐用性强，稳定性好，能够有效保证产品质量的稳定性和可控性。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种少腹逐瘀丸（小蜜丸）的质量检测方法，该方法能够较为全面、准确地分析药物活性组分，有利于产品有效成分的质量控制，保证其临床疗效。

本发明的目的通过以下技术方案实现：一种少腹逐瘀丸（小蜜丸）的质量检测方法，其特征在于，包括显微鉴别、薄层色谱定性鉴别和芍药苷的含量检测；

本发明所要解决的技术问题是为了对产品质量进行全面检测，有效控制质量质量，发明人经过大量试验，对制剂中药材及药材有效成分进行了定性和定量检测，建立了中药少腹逐瘀丸（小蜜丸）新的质量检测方法。所述少腹逐瘀丸（小蜜丸）是当归、蒲黄、五灵脂（醋炒）、赤芍、小茴香（盐炒）、延胡索（醋制）、没药（炒）、川芎、肉桂和炮姜十味中药组成，加炼蜜制成的小蜜丸。该质量检测方法是以显微鉴别法鉴别制剂中当归、蒲黄、赤芍、肉桂、小茴香和延胡索；以薄层色谱法鉴别制剂中赤芍，当归、川芎，蒲黄，延胡索；同时采用hplc测定制剂中赤芍中芍药苷的含量，从而实现对少腹逐瘀丸（小蜜丸）质量进行全面地评价和控制，为少腹逐瘀丸（小蜜丸）的真伪鉴别和内在质量检测提供全面、可靠的依据，保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性、有效性。

本发明技术方案以显微鉴别法鉴别制剂中当归、蒲黄、赤芍、肉桂、小茴香和延胡索；以薄层色谱鉴别少腹逐瘀丸（小蜜丸）中赤芍，当归、川芎，蒲黄，延胡索，具体包括下列步骤：

1、取本品，置显微镜下观察：薄壁细胞纺锤形，壁略厚，有极微细的斜向交错纹理（当归）。花粉粒黄色，类圆形或椭圆形，直径约30μm，外壁有网状雕纹（蒲黄）。草酸钙簇晶直径7～41μm，存在于薄壁细胞中，常排列成行或一个细胞中含有数个簇晶（赤芍）。纤维单个散在，长梭形，直径24～50μm，壁厚，木化（肉桂）。草酸钙簇晶细小，直径约5μm，一个细胞含有多个簇晶（小茴香）。糊化淀粉粒团块淡黄色（延胡索）。

2、赤芍鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品9g，剪碎，加硅藻土10g，研匀，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次15ml，正丁醇液蒸干，残渣用乙醇20ml溶解，加活性炭2.5g，水浴加热2分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液；

2）对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品，加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液5～10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3、当归和川芎鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品6g，剪碎，加乙醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。

2）对照品溶液的制备：取当归对照药材与川芎对照药材各0.5g，同法制成对照药材溶液。

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

4、蒲黄鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品10g，剪碎，加乙醚20ml，超声处理20分钟，弃去乙醚液，残渣挥干，加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2）对照品溶液的制备：另取蒲黄对照药材1g，加水30ml，煮沸15分钟，放冷，滤过，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5、延胡索鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品30g，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。

2）对照品溶液的制备：另取延胡索对照药材lg，同法制成对照药材溶液。

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶g薄层板上，以甲苯-丙酮（9∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽薄层板上吸附的碘后，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明同时采用高效液相色谱法测定少腹逐瘀丸（小蜜丸）中赤芍的赤芍苷含量，包括下列步骤：

1）供试品溶液的制备：取装量差异项下少腹逐瘀丸（小蜜丸）适量，剪碎，混匀，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，待完全溶散后，超声处理（功率100w，频率40khz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2）对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含60μg的溶液，即得；

3）hplc色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（14∶86）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000；

4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注人液相色谱仪，按照步骤3）所述色谱条件，测定，即得；

本发明具有以下优点：

本发明一种少腹逐瘀丸（小蜜丸）的质量检测方法，采用显微鉴别法鉴别制剂中当归、蒲黄、赤芍、肉桂、小茴香和延胡索；以薄层色谱鉴别少腹逐瘀丸（小蜜丸）中赤芍，当归、川芎，蒲黄，延胡索，其中薄层色谱通过一个方法可一次性鉴定当归和川芎2种中药，准确性高、实用性强；采用超高效液相色谱可统一测定少腹逐瘀丸（小蜜丸）中芍药苷含量，经过方法学考察，本发明含量测定方法精密度高、稳定性好、重复性优秀，并且显著的减少了分析检测的时间，该检测方法具有较强的专属性、耐用性，其准确性、重现性、稳定性均能达到科研和生产的要求，能够有效保证产品质量的稳定性和可控性，对少腹逐瘀丸（小蜜丸）质量标准的制定具有重要的意义。

附图说明

图1为少腹逐瘀丸（小蜜丸）芍药苷紫外扫描图；

图2为少腹逐瘀丸（小蜜丸）芍药苷hplc图，从上至下依次为赤芍药材色谱图、不含赤芍的阴性色谱图、供试品色谱图、芍药苷对照品色谱图；

图3为少腹逐瘀丸（小蜜丸）芍药苷峰面积值与浓度线性关系图；

图4为少腹逐瘀丸（小蜜丸）当归显微鉴别图；

图5为少腹逐瘀丸（小蜜丸）蒲黄显微鉴别图；

图6为少腹逐瘀丸（小蜜丸）赤芍显微鉴别图；

图7为少腹逐瘀丸（小蜜丸）肉桂显微鉴别图；

图8为少腹逐瘀丸（小蜜丸）小茴香显微鉴别图；

图9为少腹逐瘀丸（小蜜丸）延胡索显微鉴别图；

图10为少腹逐瘀丸（小蜜丸）赤芍tlc色谱图，按从左至右依次为阴性供试品、芍药苷对照品、20190401批样品、20190402批样品和20190403批样品；

图11为少腹逐瘀丸（小蜜丸）当归、川芎tlc色谱图，按从左至右依次为阴性供试品、当归对照药材、川芎对照药材、20190401批样品，20190402批样品和20190403批样品；

图12为少腹逐瘀丸（小蜜丸）蒲黄tlc色谱图，按从左至右依次为阴性供试品、蒲黄对照药材、20190401批样品，20190402批样品和20190403批样品；

图13为少腹逐瘀丸（小蜜丸）延胡索tlc色谱图，按从左至右依次为阴性供试品、延胡索对照药材、20190401批样品，20190402批样品和20190403批样品。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1

赤芍苷的hplc方法学研究

1、色谱条件

仪器：ag135型电子分析天平（瑞士mettler），岛津高效液相色谱仪lc-15c型泵，spd-15c检测器，岛津shim-packvp-odsc18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；乙腈-0.1%磷酸（14∶86）为流动相；检测波长为230nm；流速为1.0ml/min。

对照品：芍药苷（中国食品药品检定研究院，20mg，110736-201842，纯度为97.4%）；芍药苷（中国食品药品检定研究院，20mg，110736-201716，纯度为99.3%）。

试剂：乙腈、磷酸为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2、色谱条件的选择

2.1检测波长选择：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，照紫外分光光度法（中国药典2015年版通则0401），在波长200～400nm的范围内扫描，结果波长为230nm、317nm时芍药苷有最大吸收。

2.2流动相的确定：参考药典芍药苷测定方法及参考文献，确定乙腈-0.1%磷酸（14∶86）为流动相。

3、提取方法选择：

3.1提取方法选择试验：

对照品溶液制备：取芍药苷对照品（110753-201842，纯度：97.4%）9.17mg置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液，精密量取对照品贮备液3ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液制备：取同一份少腹逐瘀丸（小蜜丸）（批号：20190401），剪碎，混匀，分别取6份，每份约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70%甲醇50ml，称定重量，待完全溶散后，其中2份超声处理（100w，40khz）30分钟，2份回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

表1芍药苷含量测定提取方法选择结果表

结果：超声提取和回流提取对含量无影响，超声提取更为简便，故选用超声提取。

3.2提取时间选择试验：

对照品溶液制备：取“3.1提取方法选择试验”项下对照品贮备液3ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液制备：取同一份少腹逐瘀丸（小蜜丸）（批号：20190401），剪碎，混匀，分别取6份，每份约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70%甲醇50ml，称定重量，待完全溶散后，其中2份超声处理（100w，40khz）20分钟，2份超声处理（100w，40khz）30分钟，2份超声处理（100w，40khz）40分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

表2芍药苷含量测定提取时间选择结果表

结果：超声提取20分钟、30分钟、40分钟含量一致，为保证提取充分，确定超声处理时间为30分钟。

3.3提取溶剂选择试验：

对照品溶液制备：取“3.1提取方法选择试验”项下对照品贮备液3ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液制备：取同一份少腹逐瘀丸（小蜜丸）（批号：20190401），剪碎，混匀，分别取6份，每份约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，两份精密加人60%甲醇50ml，两份精密加人70%甲醇50ml，两份精密加人甲醇50ml，称定重量，待完全溶散后，超声处理（100w，40khz）30分钟，放冷，再称定重量，分别用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

表3芍药苷含量测定提取溶剂选择结果表

结果：60%甲醇提取与70%甲醇提取含量无差别，用甲醇提取样品不能充分溶散，提取不充分，故选用原标准70%甲醇提取。

3.4溶剂用量选择试验：

供试品溶液制备：取同一份少腹逐瘀丸（小蜜丸）（批号：20190401），剪碎，混匀，分别取6份，每份约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，两份精密加入70%甲醇40ml，两份精密加入70%甲醇50ml，两份精密加入70%甲醇75ml，称定重量，待完全溶散后，分别超声处理（100w，40khz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

表4芍药苷含量测定溶剂用量选择结果表

结果：提取溶剂为40ml、50ml、75ml时含量变化不大，为便于试验，确定溶剂用量为50ml。

3.4供试品溶液制备：

取少腹逐瘀丸（小蜜丸），剪碎，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，待完全溶散后，超声处理（功率：100w，频率：40khz）30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4、稳定性试验：

供试品溶液制备：取少腹逐瘀丸（小蜜丸）（批号：20190401）1.5g，按“3.4供试品溶液制备”项下方法处理，分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时，18小时进样，结果见表5。

对照品溶液制备：取芍药苷对照品（110736-201716；纯度：99.3%）20.05mg置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液，精密量取对照品贮备液3ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时进样。

表5芍药苷含量测定稳定性试验结果表

结果表明：供试品溶液在18小时内峰面积rsd为0.52%，对照品在8小时内峰面积积分值rsd为0.75%，证明芍药苷供试品溶液和对照品溶液稳定性良好。

5、精密度试验：

对照品溶液制备：精密量取“稳定性试验”项下对照品贮备液3ml，用甲醇稀释至10ml，即得。

精密吸取芍药苷对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，并记录色谱图（附图）。连续进样6次，计算峰面积积分值的rsd

表6芍药苷含量测定精密度试验结果表

结果表明：对照品rsd为1.56%，证明仪器精密度良好。

6、线性关系考察：取芍药苷对照品9.17mg（110736-201842；纯度97.4%）置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液，精密量取对照品贮液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液各10μl进样，注入液相色谱仪，测定。以芍药苷浓度（mg/ml）为横坐标，峰面积（a）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：a=13189906.8c-38468.2，r=0.9996。

表7芍药苷含量测定线性范围测定结果表

以上结果表明：0.0357mg/ml～0.1250mg/ml范围内，芍药苷峰面积值与浓度线性关系良好。

7、重复性试验：

对照品溶液制备：取芍药苷对照品（110736-201842；纯度97.4%）17.35mg置100ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为对照品贮备液，精密量取对照品贮备液3ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液：取同一批号（批号：20190401）的少腹逐瘀丸（小蜜丸）6份，分别按“3.4供试品溶液制备”项下方法制备，测定芍药苷的含量。

表8芍药苷含量测定重复性试验结果表

结果：试验方法的重现性良好。

8、加样回收率试验：

对照品溶液制备：精密量取“重复性试验”项下对照品贮备液3ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备：取同一批（批号：20190401）已知含量的少腹逐瘀丸（小蜜丸）（含量2.86mg/g），剪碎，分别取6份，每份约1.5g，精密称定，均加入芍药苷对照品溶液（浓度168.989μg/ml）10ml，按3.4供试品溶液制备项下方法处理，测定含量，以下式计算回收率。

回收率＝（实测值－样品含量）／对照品加入量×100%

表9芍药苷含量测定加样回收率试验结果表

结果：试验方法的回收率良好。

9、专属性：

供试品溶液制备：取少腹逐瘀丸（小蜜丸）（批号：20190401）1.5g，精密称定，按“3.4供试品溶液制备”处理，即得。

对照品溶液制备：取精密度项下对照品溶液，即得。

赤芍药材溶液制备：取赤芍药材约0.1g，精密称定，按“3.4供试品溶液制备”方法制备，即得。

阴性供试品溶液制备：取不含赤芍的阴性样品1.5g，精密称定，按“3.4供试品溶液制备”方法制备，即得。

分别精密吸取赤芍药材溶液、阴性供试品溶液、供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，并记录色谱图。

结果表明：芍药苷可有效检出，且阴性供试品溶液无干扰。

10、样品含量测定：取样品按正文方法测定，芍药苷含量测定结果如下。

表10少腹逐瘀丸（小蜜丸）样品中芍药苷含量测定结果表

本品3批样品以高效液相法芍药苷的平均含量为2.84mg/g。

根据上述试验结果，考虑药材来源，以及制剂生产、贮藏等因素，故暂定本品每g含赤芍以芍药苷（c23h28o11）计，不得少于0.8mg。

实施例2少腹逐瘀丸（小蜜丸）中当归、蒲黄、赤芍、肉桂、小茴香和延胡索显微鉴别

1）薄壁细胞纺锤形，壁略厚，有极微细的斜向交错纹理（当归）。

2）花粉粒黄色，类圆形或椭圆形，直径约3μm，外壁有网状雕纹（蒲黄）。

3）草酸钙簇晶直径7～41μm，存在于薄壁细胞中，常排列成行或一个细胞中含有数个簇晶（赤芍）。

4）纤维单个散在，长梭形，直24～50μm，壁厚，木化（肉桂）。

5）草酸钙簇晶细小，直径约5μm，一个细胞含有多个簇晶（小茴香）。

6）糊化淀粉粒团块淡色（延胡索）。

结果：图4～9为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中当归、蒲黄、赤芍、肉桂、小茴香和延胡索显微鉴别图，结果表明显微鉴别方法简便，专属性强，阴性无干扰，显微特征突出，可以作为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中的质量检测方法。

实施例3少腹逐瘀丸（小蜜丸）中赤芍鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品9g，剪碎，加硅藻土10g，研匀，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次15ml，正丁醇液蒸干，残渣用乙醇20ml溶解，加活性炭2.5g，水浴加热2分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液；

2）对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品，加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液5～10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。；

4)结果：图10为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中赤芍的薄层色谱图，结果表明：含有赤芍的样品在与芍药苷对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点。色谱分离良好，紫花地丁的特征斑点突出，斑点清晰，方法简便，专属性强，除去赤芍的阴性对照无干扰，建立的tlc方法可以作为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中赤芍的质量检测方法。

实施例4少腹逐瘀丸（小蜜丸）中当归和川芎鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品6g，剪碎，加乙醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。

2）对照品溶液的制备：取当归对照药材与川芎对照药材各0.5g，同法制成对照药材溶液。

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

4)结果：图11为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中当归、川芎的薄层色谱图，结果表明：含有当归、川芎的样品在与当归、川芎对照药材色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点。色谱分离良好，紫花地丁的特征斑点突出，斑点清晰，方法简便，专属性强，除去当归、川芎的阴性对照无干扰，建立的tlc方法可以作为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中当归、川芎的质量检测方法。

实施例5少腹逐瘀丸（小蜜丸）中蒲黄鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品10g，剪碎，加乙醚20ml，超声处理20分钟，弃去乙醚液，残渣挥干，加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2）对照品溶液的制备：另取蒲黄对照药材1g，加水30ml，煮沸15分钟，放冷，滤过，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4)结果：图12为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中蒲黄的薄层色谱图，结果表明：含有蒲黄的样品在与蒲黄对照药材色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点。显相同颜色的斑点斑点清晰，方法简便，专属性强，除去蒲黄的阴性对照无干扰，色谱分离良好，蒲黄的特征斑点突出，建立的tlc方法可以作为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中蒲黄的质量检测方法。

实施例6少腹逐瘀丸（小蜜丸）中延胡索鉴别

1）供试品溶液的制备：取本品30g，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。

2）对照品溶液的制备：另取延胡索对照药材lg，同法制成对照药材溶液。

3）点样、展开：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶g薄层板上，以甲苯-丙酮（9∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽薄层板上吸附的碘后，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

4)结果：图13为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中延胡索的薄层色谱图，结果表明：含有延胡索的样品在与延胡索对照药材色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点。色谱分离良好，延胡索的特征斑点突出，显相同颜色的荧光斑点。斑点清晰，方法简便，专属性强，除去延胡索的阴性对照无干扰，建立的tlc方法可以作为少腹逐瘀丸（小蜜丸）中延胡索的质量检测方法。

实施例7高效液相色谱法测定少腹逐瘀丸（小蜜丸）中赤芍的芍药苷

1）供试品溶液的制备：取装量差异项下少腹逐瘀丸（小蜜丸）适量，剪碎，混匀，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，待完全溶散后，超声处理（功率100w，频率40khz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2）对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含60μg的溶液，即得；

3）hplc色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（14∶86）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000；

4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照步骤3）所述色谱条件，测定，即得；

以上所述仅为本发明的优选实施例，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理及构思的前提下，还可以做出若干修饰和改进，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。