以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器及其制备方法和应用与流程

文档序号:21772832发布日期:2020-08-07 19:20阅读:来源:国知局

技术特征:

1.以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,包括:

fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物;

aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物。

2.根据权利要求1所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,所述fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物由fe3o4、食源性病原菌特异性核酸适配体、pbs缓冲液、氯化钙溶液制成;所述fe3o4的体积为40μl、浓度为50mg/ml;所述食源性病原菌特异性核酸适配体的体积为8μl、浓度为10μm;所述pbs的体积为800μl、浓度为10mm、ph7.4;所述氯化钙溶液的体积为20μl、浓度为100mm。

3.根据权利要求2所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,所述aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物由乙醛脱氢酶、食源性病原菌特异性核酸适配体、pbs缓冲液、氯化钙溶液制成;所述乙醛脱氢酶的体积为80μl、浓度为5mg/ml;所述食源性病原菌特异性核酸适配体的体积为20μl、浓度为10μm;所述pbs的体积为800μl、浓度为10mm、ph8.5;所述氯化钙溶液的体积为20μl、浓度为100mm。

4.根据权利要求3所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,所述fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物中的食源性病原菌特异性核酸适配体与aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物中的食源性病原菌特异性核酸适配体相同。

5.如权利要求4所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤一、合成fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物:

(1)将fe3o4和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到pbs缓冲液中;

(2)加入氯化钙溶液,用超纯水定容,震荡混匀,室温下孵育15~21h;

(3)用磁铁吸附黑色产物,pbs洗涤,去除上清,即得fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物;

步骤二、合成aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物:

(1)将kcl和β-巯基乙醇加入到pbs缓冲液中;

(2)将乙醛脱氢酶和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到步骤(1)所得溶液中;

(3)加入氯化钙溶液,用超纯水定,混合均匀,室温下孵育9~15h;

(4)经离心后产生白色沉淀物,纯水洗涤,去除上清,即得aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤二(1)中,所述kcl的体积为50μl、浓度为100mm;所述β-巯基乙醇的体积为10μl、浓度为1m。

7.如权利要求4所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤一、合成fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物:

(1)将fe3o4和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到pbs缓冲液中;

(2)加入氯化钙溶液,用超纯水定容,震荡混匀,室温下孵育15~21h;

(3)用磁铁吸附黑色产物,pbs洗涤,去除上清,即得fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物;

步骤二、合成aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物:

(1)将kcl和β-巯基乙醇加入到pbs缓冲液中;

(2)将乙醛脱氢酶和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到步骤(1)所得溶液中;

(3)加入氯化钙溶液,用超纯水定,混合均匀,室温下孵育9~15h;

(4)经离心后产生白色沉淀物,纯水洗涤,去除上清,即得aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物;

步骤三、将待测样品加入pbs缓冲液中,加入fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物和aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物混合均匀,经孵育后形成三明治夹心免疫复合物;用pbs洗涤,磁铁分离以除去未结合的靶标;加入100μl的反应底物进行反应,测量反应液上清的ph,计算ph变化量对应的食源性病原菌的浓度,所述反应底物包括2mm的乙醛、10mm的β-巯基乙醇、500mm的氯化钾、10mm的nadh。

8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,步骤三中,所述待测样品、fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物和aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物的体积比为10:1:4。

9.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,步骤三中,所述反应底物中,乙醛浓度为2mm,β-巯基乙醇浓度为10mm,氯化钾浓度为100mm。


技术总结
以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器及其制备方法和应用,涉及食源性病原菌检测领域,本发明包括:将Fe3O4和Aptamer加入PBS缓冲液中;加入氯化钙溶液;吸附黑色产物洗涤除上清即得Fe3O4@Aptamer磷酸钙纳米复合物;将KCl和β‑巯基乙醇加入PBS缓冲液中;再加入乙醛脱氢酶和Aptamer;加入氯化钙溶液;白色沉淀物洗涤除上清,即得ALDH@Aptamer磷酸钙纳米复合物;将待测样品加入PBS缓冲液中,加入上述复合物形成三明治夹心免疫复合物;加入反应底物;测量上清pH;计算pH变化量对应的食源性病原菌的浓度。本发明检测时间短、成本低、灵敏性高、特异性强。

技术研发人员:万家余;张文广;李泽鸿;卜胜君
受保护的技术使用者:军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
技术研发日:2020.05.07
技术公布日:2020.08.07
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