氯胺类衍生化试剂在双键位置鉴定中的应用

1.本发明涉及分析化学领域，具体地，本发明涉及一种氯胺类衍生物用于质谱学手段精准鉴定双键数目及位置的方法。


背景技术：

2.脂质在生命过程中发挥着举足轻重的作用，如作为生物体内细胞膜的支撑载体、为生命活动储存和补充能量，作为信号传导过程中的第二信使前体来源等。越来越多的证据表明，脂质的组成、浓度以及空间分布情况可以作为重要的生物系统功能指标，在疾病标志物发现、代谢水平分析等方面有着重要作用。近期研究表明，脂质在双键水平上的结构、含量差异，能够影响脂质与细胞膜上胆固醇以及蛋白质的相互作用，在动脉粥样硬化、神经退行性疾病、癌症等疾病中有着重要的作用。因此，需要发展一些能快速鉴定脂质双键位置的方法。
3.质谱具有快速的数据采集和分析能力，随着电喷雾质谱技术的发展，利用基于碰撞诱导解离的二级质谱技术，将质谱应用在脂质双键水平的精细结构分析受到越来越多的重视。这种方法可以直接通过提取物直接进样分析，无需色谱分离，被称作鸟枪质谱脂质分析。目前已经有几类基于质谱的方法鉴定c＝c双键的位置，如臭氧化裂解(ozid)、环氧化、pb衍生化分析。尽管这些方法有强大的功能，但对于复杂生物基质中脂质双键的分析时，仍需要解决两个问题：其一，对于精准结构的组成分析，尤其是多双键的不饱和脂质双键数目及位置的精准鉴定。其二，负离子模式下的低电离效率和低灵敏度。
4.综上所述，本领域尚缺乏质谱响应好，灵敏度高的鉴定分子中双键位置的方法。


技术实现要素：

5.基于此，我们发明了一种氯胺类衍生化试剂在双键位置鉴定方面的新方法。该方法利用双键发生衍生化反应，将双键直接转化为氮杂环化合物。所述衍生化产物的产物质谱响应好，灵敏度高，二级质谱具有特征断裂，能够在质谱中诊断双键的位置，实现双键位置异构体的鉴定。
6.本发明的第一方面，提供了一种质谱法鉴定长链不饱和分子中双键位置的方法，所述的方法包括使用如下式i所示的化合物作为鉴定试剂：
[0007][0008]
其中，环y选自下组：苯基、萘基；
[0009]
r为一个或多个选自下组的取代基：氢、c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯氧基，c1-c4卤代烷基、卤原子；
[0010]
x选自下组：氢、氯、溴、碘；
[0011]
m选自下组：氢、金属离子、铵离子、烷基铵离子、吡啶阳离子。
[0012]
在另一优选例中，所述的式i化合物选自下组：n-氯-苯磺酰胺钠盐三水合物(氯胺b)、n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，较佳地为n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)。
[0013]
在另一优选例中，所述的方法包括步骤：
[0014]
(1)在惰性溶剂中，用待测底物、式i化合物和任选的卤化物混合进行衍生化反应，得到经衍生化的样品液；
[0015]
(2)对所述经衍生化的样品液在正离子模式下或负离子模式下进行质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据；
[0016]
(3)对所述经衍生化的样品液在正离子模式下或负离子模式下进行二级质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据；
[0017]
(4)根据一级的分子量、二级质谱特征的断裂方式，推导得到样品中待测物中分子所含有的双键数目及位置信息。
[0018]
在另一优选例中，所述的步骤(2)和/或(3)在正离子模式下进行。
[0019]
在另一优选例中，所述的步骤(3)中，二级质谱的碰撞能为15-35ev，较佳地，15-20ev，更佳地，20-30ev，最佳地，30-35ev。
[0020]
在另一优选例中，当所述式i化合物中的m或x为氢时，所述的步骤(1)在碱存在下进行，且所述的碱选自下组：醇钠、醇钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化钾、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(dbu)、胍、三甲基胍，或其组合。
[0021]
在另一优选例中，当所述式i化合物中的m或x为氢时，所述的步骤(1)在氧化剂存在下进行，且所述的氧化剂选自下组：次氯酸钠、次溴酸钠、次氯酸、次溴酸、氯、溴、碘苯二乙酸、碘苯二(三氟乙酸)。
[0022]
在另一优选例中，所述的卤化物选自下组：卤素单质、有机三卤化物、有机碘化物、金属卤化物。
[0023]
在另一优选例中，所述的有机三卤化物选自下组：吡啶三溴化氢、苄基三甲基三溴化铵、四丁基三溴化铵、四甲基三溴化铵、苯基三甲基三溴化铵、三碘化钠、三碘化钾，较佳地，吡啶三溴化氢，更佳地，苯基三甲基三溴化铵，最佳地，苄基三甲基三溴化铵。
[0024]
在另一优选例中，所述的有机碘化物选自下组：碘苯二乙酸、碘苯二(三氟乙酸)，较佳地，碘苯二乙酸。
[0025]
在另一优选例中，所述的金属卤化物选自下组：碘化钠、碘化钾、溴化钠、溴化钾。较佳地，溴化钠，更佳地，碘化钾，最佳地，碘化钠。
[0026]
在另一优选例中，所述的卤化物选自下组：苯基三甲基三溴化铵、苄基三甲基三溴化铵、吡啶三溴化氢、苄基三甲基三溴化铵。
[0027]
在另一优选例中，所述的惰性溶剂选自下组：乙腈、丙酮、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、氯仿、水或其组合。
[0028]
在另一优选例中，所述的步骤(1)中，所述的待测底物、式i化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:0.8-1.5:0-0.5。
[0029]
在另一优选例中，所述的待测底物、式i化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:0.8-1.5:0.05-0.5。
[0030]
在另一优选例中，所述的待测底物为多双键底物时，增加或不增加式i化合物和任选的卤化物用量不影响反应结果，所述的待测底物、式i化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:0.8-10:0.05-0.5。
[0031]
在另一优选例中，任选的卤化物选自下组：碘单质、碘化物、多碘化物。
[0032]
在另一优选例中，足够量的式i化合物和任选的卤化物用量不影响反应结果。
[0033]
在另一优选例中，所述的待测底物、式i化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:10-10000:1-10000。
[0034]
在另一优选例中，所述的长链不饱和分子为选自下组的分子：不饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸酯、不饱和脂肪醇、不饱和脂肪酰胺、不饱和脂肪醛、不饱和甘油酯、不饱和磷脂、非极性烯烃。
[0035]
在另一优选例中，所述的长链不饱和分子为碳原子数为8-30的长链不饱和分子。
[0036]
在另一优选例中，所述的长链不饱和分子含有多个不饱和度，较佳地，具有1-4个不饱和度。
[0037]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0038]
除特地说明，所有谱图和谱峰均在正离子模式的质谱条件下获得。
[0039]
图1为本发明实施例1，芥酸22:1(n-9)，油酸乙酯18:1(n-9)，油酸酰胺18:1(n-9)，反油醇18:1(n-9)，叶醇6:1(n-3)，亚油酸18:2(n-6)得到的低分辨质谱图。
[0040]
图2-a为本发明实施例2不饱和脂肪酸脂肪酸，油酸18:1(n-9)衍生化得到的低分辨质谱图；2-b为其二级质谱图以及特征断裂方式，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。
[0041]
图3-a为本发明实施例3不饱和脂肪酸酯，油酸乙酯18:1(n-9)衍生化得到的低分辨质谱图；3-b为其二级质谱图以及特征断裂方式，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。
[0042]
图4-a为本发明实施例4不饱和脂肪酰胺，油酸酰胺18:1(n-9)衍生化得到的低分辨质谱图；4-b为其二级质谱图以及特征断裂方式，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。
[0043]
图5-a为本发明实施例5不饱和脂肪酸酯，双键位置在c13位的芥酸22:1(n-9)衍生化得到的低分辨质谱图；5-b为其二级质谱图以及特征断裂方式，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。
[0044]
图6-a为本发明实施例6不饱和脂肪醇叶醇6:1(n-3)、反叶醇6:1(n-3)混合物衍生化得到的低分辨质谱图；6-b为其二级质谱图以及特征断裂方式，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。
[0045]
图7-a为本发明实施例7不饱和脂肪酸脂肪酸，亚油酸18:2(n-6)衍生化得到的低分辨质谱图；7-b为其二级质谱图以及特征断裂方式，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号，能特异性识别多不饱和化合物双键的不同位置。
[0046]
图8-a为本发明实施例8不饱和脂肪酸脂肪酸，亚麻酸18:3(n-3)衍生化得到的低分辨质谱图；8-b为其二级质谱图以及特征断裂方式，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号，能特异性识别多不饱和化合物双键的不同位置。
具体实施方式
[0047]
本发明人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选和测试，首次将式i所示的化合物作为应用于鸟枪质谱法鉴定双键的应用方面。该方法利用双键发生衍生化反应，将双键直接转化为氮杂环化合物。利用该方法能对分子的精准结构进行分析，尤其是多双键的不饱和脂质双键数目及位置的精准鉴定，同时，可以实现、正离子模式下的检测，具有较高的电离效率和灵敏度。所述衍生化产物的产物质谱响应好，二级质谱具有特征断裂，能够在质谱中诊断双键的位置，实现双键位置异构体的鉴定。在此基础上完成了本应用发明。
[0048]
术语
[0049]
除非另有定义，否则本文中所用的全部技术术语和科学术语均具有如本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。
[0050]
如本文所用，术语“c1-c4烷基”包括含有1-4个碳原子的直链或支链的烷基。例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。
[0051]
如本文所用，术语“c1-c4烷氧基”指“c1-c4烷基”与氧原子直接相连，包括含有1-4个碳原子的直链或支链的烷基与氧原子直接相连。例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基。
[0052]
如本文所用，术语“卤原子”包括氟、氯、溴、碘。
[0053]
如本文所用，术语“卤代”包括单卤取代和多卤取代。例如单氯取代、单溴取代、二氟代取、三氟取代、全氟取代。
[0054]
如本文所用，术语“c1-c4卤代烷基”指“c1-c4烷基”进行卤代，包括含有1-4个碳原子的直链或支链的烷基进行单卤代、多卤代，以及不同位点卤代的所形成的卤代烷基。例如，氯甲基、三氟甲基、1,2-二溴乙基、全氟丁基等。
[0055]
如本文所用，术语“不饱和脂肪酸”包括直链或支链脂肪酸，且所述不饱和脂肪酸可具有1-4个不饱和度，例如丁烯酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、芥酸等。
[0056]
如本文所用，术语“不饱和脂肪醇”包括直链或支链脂肪醇，且所述不饱和脂肪醇可具有1-4个不饱和度，例如叶醇、反叶醇、油醇、反油醇等。
[0057]
如本文所用，术语“不饱和脂肪酸酯”包括直链或支链脂肪酸与不同醇形成的不饱和脂肪酸酯，且所述不饱和脂肪酸酯可具有1-4个不饱和度，例如油酸甲酯、亚油酸甲酯、油酸乙酯等。
[0058]
如本文所用，术语“不饱和脂肪酰胺”包括直链或支链脂肪酸与不同氨基形成的不饱和脂肪酰胺，且所述不饱和脂肪酰胺可具有1-4个不饱和度，例如油酸酰胺、神经酰胺等。
[0059]
如本文所用，术语“不饱和脂肪醛”包括直链或支链脂肪醛，且所述不饱和脂肪醛，例如油醛、反油醛等。
[0060]
如本文所用，术语“不饱和甘油酯”包括直链或支链的不饱和脂肪酸所形成的甘油单酯、甘油二酯，甘油三脂、单糖甘油酯，例如，单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、三油酸甘油酯等。
[0061]
如本文所用，术语“不饱和磷脂”包括直链或支链的不饱和脂肪酸所形成的磷脂，例如，卵磷脂等。
[0062]
如本文所用，术语“非极性普通烯烃”包括主链或环上含有双键的，无强极性取代基的烯烃例如，环己烯、苯乙烯等。
[0063]
衍生化试剂及其应用
[0064]
本发明第一方面提供了一种鸟枪质谱法鉴定双键位置和数目的方法，式i化合物作为双键衍生化试剂的用途，式ii作为卤化剂，将i单独的或者与ii联用能与双键衍生化，其衍生化产物二级质谱具有特征断裂，能够在质谱中诊断双键的位置，实现双键位置异构体的鉴定。
[0065][0066]
其中，所述结构i中的芳香结构y为苯基、萘基；所述结构i中r为氢、c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯氧基，c1-c4卤代烷基、卤原子；所述结构i中x为氢、氯、溴、碘；所述结构i中m为氢、金属离子、铵离子、烷基铵离子、吡啶阳离子。
[0067]
所述结构i可以单独的与双键发生衍生化；也可以在卤素单质溴、碘，金属卤化物和三卤化物，包括碘化钠、碘化钾、溴化钠、溴化钾、三溴化吡啶、苄基三甲基三溴化铵、四丁基三溴化铵、四甲基三溴化铵、苯基三甲基三溴化铵、三碘化钠、三碘化钾，三溴化吡啶，苯基三甲基三溴化铵；以及有机碘化物碘苯二乙酸、碘苯二(三氟乙酸)的作用下，与双键发生高效的衍生化，实现双键位置异构体的鉴定。
[0068]
对于所述应用，包含一个双键或者多个双键的不饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸酯、不饱和脂肪醇、不饱和脂肪酰胺、不饱和脂肪醛、不饱和甘油酯、不饱和磷脂、非极性普通烯烃类化合物。
[0069]
在一优选例中，所述结构i选自：n-氯-苯磺酰胺钠盐三水合物(氯胺b)、n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，较佳地，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)。
[0070]
在另一优选例中，所述结构i与卤素单质共同作用与双键衍生化，所述卤素单质选自：碘。
[0071]
在另一优选例中，所述结构i与三卤化物共同作用与双键衍生化：三溴化吡啶、苄基三甲基三溴化铵、四丁基三溴化铵、四甲基三溴化铵、苯基三甲基三溴化铵、三碘化钠、三碘化钾，较佳地，三溴化吡啶，更佳地，苯基三甲基三溴化铵，最佳地，苄基三甲基三溴化铵。
[0072]
在另一优选例中，所述结构i与有机碘化物共同作用与双键衍生化，所述有机碘化物选自：碘苯二乙酸、碘苯二(三氟乙酸)，较佳地，碘苯二乙酸。
[0073]
在另一优选例中，所诉结构i与金属卤化物共同作用与双键衍生化，所述金属卤化物选自：碘化钠、碘化钾、溴化钠、溴化钾。较佳地，溴化钠，更佳地，碘化钾，最佳地，碘化钠。
[0074]
在另一优选例中，所述不饱和化合物选自含一个双键的不饱和化合物：不饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸酯、不饱和脂肪醇、不饱和脂肪酰胺、不饱和脂肪醛、不饱和甘油酯、不饱和磷脂、非极性普通烯烃，或其组合。较佳的，不饱和脂肪酸，更佳地，不饱和脂肪酸酯，最
佳地，不饱和脂肪酰胺。
[0075]
在另一优选例中，所述不饱和化合物具有1-4个不饱和度，较佳地，不饱和度为4，更佳地，不饱和度为2-3，最佳地，不饱和度为1。
[0076]
在另一优选例中，所述脂肪酸具有0-8个不饱和度，较佳地，0-6。
[0077]
在另一优选例中，衍生化产物二级质谱的碰撞能为15-35ev，较佳地，15-20ev，更佳地，20-30ev，最佳地，30-35ev。
[0078]
鉴定待测样品中双键数目以及位置的质谱检测方法
[0079]
本发明提供了一种衍生化效率高，产物质谱响应好，灵敏度高的方法，用于质谱学手段精准鉴定双键数目及位置。所述方法包括步骤：
[0080]
(1)样品预处理：样品进行衍生化反应，得到经衍生化的样品液。
[0081]
(2)对所述经衍生化的样品液在正离子模式以及负离子模式下进行质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据。
[0082]
(3)对所述经衍生化的样品液在正离子以及负离子模式下进行二级质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据。
[0083]
(4)对得到的谱峰数据进行分析，根据双键位置衍生化后特征断裂方式，进行逆向推断双键的位置。
[0084]
本发明的主要优点包括：
[0085]
1.本发明首次将式i化合物应用于鸟枪质谱法鉴定双键，该试剂衍对含双键的化合物具有很好的衍生化效率，产物质谱响应好，灵敏度高。其产物在基于碰撞诱导解离的二级质谱中有特征的断裂方式，能够特征地识别双键的位置。衍生化法在检测双键时，能够同时采用正离子或者负离子模式，能对精准结构的组成进行分析，尤其是多双键的不饱和脂质双键数目及位置的精准鉴定，同时相对于已知报道，正离子模式下的电离效率和灵敏度明显提高。因此有效的提高了质谱对低浓度样品的检测能力，有利于保证方法的准确性。
[0086]
2.利用本发明的鸟枪质谱法能同时检测复杂组成样本中的双键，节省了操作时间，降低了操作难度和检测成本。
[0087]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0088]
实施例1芥酸22:1(n-9)，油酸乙酯18:1(n-9)，油酸酰胺18:1(n-9)，反油醇18:1(n-9)，叶醇6:1(n-3)，亚油酸18:2(n-6)混合底物的质谱法鉴定
[0089]
将混合底物，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，苯基三甲基三溴化铵以摩尔比1:2.4:0.2混合在乙腈中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0090]
对混合物进行产物的一级质谱确认。
[0091]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，产物计算值，叶醇6:1(n-3)292，反油醇18:1(n-9)460，亚油酸18:2(n-6)472，油酸酰胺18:1(n-9)473，油酸乙酯18:1(n-9)502，芥酸22:1(n-9)530，测量值：274，460，472，473，502，530图1为所述混合底物经衍生化后的低分辨质谱图。结果显示，通过不同的质谱峰位置，可以看出衍生化产物的分子量，用于鉴定化合物的生成。
[0092]
实施例2油酸18:1(n-9)底物的质谱法鉴定
[0093]
将油酸18:1(n-9)底物，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，苄基三甲基三溴化铵以摩尔比1:1.2:0.1混合在丙酮中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0094]
对产物进行产物的一级质谱确认和串联质谱双键位置指认，高分辨数据确认元素组成。
[0095]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，474，测量值：474.
[0096]
低分辨串联质谱数据：tsq-ms/ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，348，测量值，348.
[0097]
图2-a为油酸18:1(n-9)底物经衍生化后的正离子模式下低分辨质谱图。
[0098]
图2-b为油酸18:1(n-9)底物经衍生化后的正离子模式下低分辨二级质谱图，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。结合低分辨质谱图和低分辨二级质谱图可知分子中双键的数目及位置。
[0099]
实施例3油酸乙酯18:1(n-9)底物的质谱法鉴定
[0100]
将油酸乙酯18:1(n-9)底物，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，吡啶三溴化氢以摩尔比1:1.2:0.1混合在乙腈中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0101]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，474，测量值：474.
[0102]
低分辨串联质谱数据：tsq-ms/ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，376，测量值，376.
[0103]
图3-a为油酸乙酯18:1(n-9)底物经衍生化后的低分辨质谱图。
[0104]
图3-b为油酸乙酯18:1(n-9)底物经衍生化后的低分辨二级质谱图，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。结合低分辨质谱图和低分辨二级质谱图可知分子中双键的数目及位置。
[0105]
实施例4油酸酰胺18:1(n-9)底物的质谱法鉴定
[0106]
将油酸酰胺18:1(n-9)底物，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，苄基三甲基三溴化铵以摩尔比1:1.2:0.1混合在乙腈中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0107]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，473，测量值：473.
[0108]
低分辨串联质谱数据：tsq-ms/ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，347，测量值，347.
[0109]
图4-a为油酸酰胺18:1(n-9)底物经衍生化后的低分辨质谱图。
[0110]
图4-b为油酸酰胺18:1(n-9)底物经衍生化后的低分辨二级质谱图，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。结合低分辨质谱图和低分辨二级质谱图可知分子中双键的数目及位置。
[0111]
实施例5芥酸22:1(n-9)底物的质谱法鉴定
[0112]
将芥酸22:1(n-9)底物，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，苄基三甲基三溴化铵以摩尔比1:1.2:0.1混合在丙酮中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0113]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，530，测量值：530.
[0114]
低分辨串联质谱数据：tsq-ms/ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，404，测量值，404.
[0115]
图5-a为芥酸22:1(n-9)底物经衍生化后的低分辨质谱图。
[0116]
图5-b为芥酸22:1(n-9)底物经衍生化后的低分辨二级质谱图，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。结合低分辨质谱图和低分辨二级质谱图可知分子中双键的数目及位置。
[0117]
实施例6叶醇6:1(n-3)，反叶醇6:1(n-3)混合底物的质谱法鉴定
[0118]
将叶醇6:1(n-3)，反叶醇6:1(n-3)，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，苯基三甲
基三溴化铵以摩尔比1:1:2.4:0.2混合在乙腈中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0119]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，292，测量值：292.
[0120]
低分辨串联质谱数据：tsq-ms/ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，292，测量值，250。
[0121]
图6-a为叶醇6:1(n-3)，反叶醇6:1(n-3)混合底物经衍生化后的低分辨质谱图。
[0122]
图6-b为叶醇6:1(n-3)，反叶醇6:1(n-3)混合底物经衍生化后的低分辨二级质谱图，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号。结合低分辨质谱图和低分辨二级质谱图可知分子中双键的数目及位置。
[0123]
实施例7亚油酸18:2(n-6)底物的质谱法鉴定
[0124]
将亚油酸18:2(n-6)，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，苄基三甲基三溴化铵以摩尔比1:1.2:0.1混合在丙酮中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0125]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，472，测量值：472.
[0126]
低分辨串联质谱数据：tsq-ms/ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，348，388，测量值，348，388.
[0127]
图7-a为亚油酸18:2(n-6)底物经衍生化后的低分辨质谱图。
[0128]
图7-b为亚油酸18:2(n-6)底物经衍生化后的低分辨二级质谱图，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号，能特异性识别多不饱和化合物双键的不同位置。结合低分辨质谱图和低分辨二级质谱图可知分子中双键的数目及位置。
[0129]
实施例8亚麻酸18:3(n-3)底物的质谱法鉴定
[0130]
将亚麻酸18:3(n-3)，n-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺t)，苄基三甲基三溴化铵以摩尔比1:1.2:0.1混合在丙酮中室温下搅拌30分钟，经稀释送入质谱中进行分析。
[0131]
低分辨质谱数据：tsq-ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，470，测量值：470。
[0132]
低分辨串联质谱数据：tsq-ms/ms，[m+na]
+
，m/z，计算值，348，388，428，测量值，348，388，428。
[0133]
图8-a为亚麻酸18:3(n-3)底物经衍生化后的低分辨质谱图。
[0134]
图8-b为亚麻酸18:3(n-3)底物经衍生化后的低分辨二级质谱图，颜色部分给出特征诊断双键位置的二级质谱信号，能特异性识别多不饱和化合物双键的不同位置。结合低分辨质谱图和低分辨二级质谱图可知分子中双键的数目及位置。
[0135]
综上，本发明的衍生化试剂能直接对双键衍生化，极大程度的提高了含双键的不饱和化合物在质谱检测中的灵敏度，提高了质谱对低浓度样品的检测能力，有利于保证检测的准确度，在正离子模式下质谱响应好，能产生特征的二级质谱碎片，从而使得能用质谱对含双键的化合物进行直接鉴定，节省了操作时间，降低了操作难度和检测成本。
[0136]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。