一种人ABO血型反定型快速检测试条的制作方法

本实用新型具体涉及一种人abo血型反定型快速检测试条。

背景技术：

abo血型系统是根据红细胞上a及b凝集原的不同，将血型分为o、a、b及ab血型。a型血红细胞上含a抗原，血清中含抗b抗体；b型血红细胞上含b抗原，血清中含抗a抗体；o型血红细胞上则没有a及b抗原，血清中含抗a及抗b抗体；ab型血红细胞上含a及b两种抗原，血清中则不含抗a及抗b抗体。a抗原和抗a抗体，b抗原和抗b抗体会发生免疫结合反应，使红细胞发生凝聚。abo血型是由红细胞表面抗原和血清中的抗体两者共同决定的。利用标准的抗a、抗b抗体检测红细胞抗原，称之为正定型；用标准的a及b抗原检测血清中的抗体，称之为反定型。正反定型同时检测，才能正确判断abo血型。

正确的血型鉴定是保证临床输血安全和抢救生命的重要工作，abo血型检测是常规的输血前血型血清学检测项目之一，为了保证正确的血型鉴定，卫生部在2000年发文(卫医法[2000]184号)明确规定：每位供血及受血的个体均要进行abo血型正反定型。目前临床实验室最常用的abo血型反定型的鉴定方法是血凝试验，用到的标准a型、b型和o型红细胞，保存期短，一般为2-8℃条件下保存3个月，且容易发生微生物污染及溶血现象，如果是用血单位自行配制，因没有统一的标准，各单位的制备方法也不一样，操作繁琐，红细胞保存液成分及理化性质均有差异，导致反定型红细胞试剂的质量极其不稳定，且体外保存期短，反应时还需要离心设备或借助玻片，操作繁琐，结果判读困难，容易导致血型鉴定出差错，甚至出现严重输血事故。

cn103033632a公开了一种abo血型反定型胶体金试剂盒及制备方法，通过制备红细胞膜血型抗原提取物，然后进行胶体金标记，解决了新鲜红细胞保存期短的问题。其原理是将红细胞表面血型抗原包被到微粒表面，从而使微粒具有abo血型抗原性，能够与血清中的相应抗体发生特异性免疫反应，在轻微振荡之后，如果出现凝集，说明有特异性抗体抗原复合物产生，为阳性反应；如果没有出现凝集则说明没有形成抗原抗体复合物，为阴性反应。因为其使用的血型抗原只是初步破碎的红细胞膜碎片，并未经过提纯，资料显示红细胞膜血型抗原多达200多种，因此无法保证特异性检测抗-a和抗-b来鉴定abo血型的反定型，而且其需要借助辅助设备进行振荡反应。

cn107290520a公开的技术方案也是免疫层析法检测反定型，将标记的抗人igm抗体和抗人igg抗体固定于玻纤，将a和b抗原偶合物分别包被在纤维素膜上制备成两条检测线，然后组装成试条检测样本中的血型抗体，如抗a、抗b，即：标记的抗人igm抗体和抗人igg抗体+待检抗体(抗a、抗b)+包被抗原(a和b抗原偶合物)，其特点是抗人igm抗体和抗人igg抗体的会与样本中的所有igm和igg类型的抗体结合，而人血液中的抗体是非常复杂和繁多的，其中血型抗a和抗b只是其中的一小部分，因此很容易造成非特异性结合，并使得灵敏度偏低。同时其血型抗原为人工合成抗原，目前人工合成抗原还没有被实际运用的报道，同时人工合成的抗原也存在与人体内血型抗体亲和力不足的可能，同样容易导致检测的灵敏度达不到要求。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种人abo血型反定型快速检测试条。

本实用新型的技术方案如下：

一种人abo血型反定型快速检测试条，包括：

一试条本体，包括一基板和设于该基板上的一加样垫、一抗原垫、一反应膜和一吸水垫，反应膜设于该基板的中部，加样垫的一端接触抗原垫的另一端，抗原垫的一端接触反应膜的另一端，反应膜的一端接触吸水垫的另一端；

抗原垫上通过物理吸附固定有经提纯并经示踪粒子标记的的红细胞血型a抗原和b抗原，

反应膜上设有一检测区，该检测区从反应膜的另一端到一端依次设有一第一检测线、一第二检测线和一对照线，第一检测线上包被固化抗-抗a抗体，第二检测线上包被固化抗-抗b抗体，对照线上包被固化抗rbc抗体。

在本实用新型的一个优选实施方中，所述抗原垫的另一端搭接于所述加样垫的一端之上。

在本实用新型的一个优选实施方中，所述抗原垫的一端搭接于所述反应膜的另一端之上。

在本实用新型的一个优选实施方中，所述吸水垫的另一端搭接于所述反应膜的一端之上。

在本实用新型的一个优选实施方中，所述示踪粒子为胶体金。

在本实用新型的一个优选实施方中，还包括一上壳体，该上壳体设于所述基板之上并覆盖所述加样垫、抗原垫、反应膜和吸水垫，该上壳体具有一对应加样垫的加样孔和一对应反应膜的检测区的观察窗。

本实用新型的有益效果是：

1、本实用新型使得血型反定型检测更便捷，快速，且灵敏度更高，特异性更好，有效解决临床单位血型反定型检测复杂、困难等问题。

2、本实用新型的抗原垫上通过物理吸附固定有经提纯并经示踪粒子标记的的红细胞血型a抗原和b抗原能够特异性的与相应的抗a/b血型抗体发生免疫结合，特异性更好；因为是人体内天然存在的抗原，因此与人体内血型抗体的亲和性更好，抗原抗体结合的灵敏度更高。

3、本实用新型的检测区从反应膜的另一端到一端依次设有一第一检测线、一第二检测线和一对照线，第一检测线上包被固化抗-抗a抗体，第二检测线上包被固化抗-抗b抗体，对照线上包被固化抗rbc抗体，能够保证特异性的与相应的人血型抗体发生免疫结合，有效屏蔽样本中其它非抗a、抗b抗体的干扰，灵敏度更高。

附图说明

图1为本实用新型实施例1的结构示意图。

图2为本实用新型实施例1的上壳体的结构示意图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式对本实用新型的技术方案进行进一步的说明和描述。

实施例1

一种人abo血型反定型快速检测试条，包括一试条本体1和一上壳体2。

如图1所示，试条本体1包括一基板10和设于该基板10上的一加样垫11、一抗原垫12、一反应膜13和一吸水垫14，反应膜13设于该基板10的中部，抗原垫12的另一端搭接于加样垫11的一端之上，抗原垫12的一端搭接于反应膜13的另一端之上，吸水垫14的另一端搭接于反应膜13的一端之上；

抗原垫12上通过物理吸附固定有经胶体金进行标记并提纯的红细胞血型a抗原和b抗原，该a抗原和b抗原的制备方法为：

人红细胞破碎法提取膜抗原，采用低渗溶胀破碎，所采用的低渗裂解液的成分为0.1％(g/l)cacl2，0.1％(g/l)tritonx-100，0.1％(g/l)sds及0.1％(g/l)edta2k的ph＝7.4溶液，具体包括如下步骤：

(1)洗涤：生理盐水洗涤新鲜人红细胞，离心2000rpm3min后去上清，重复三遍，收集红细胞；

(2)破碎：洗涤后红细胞与裂解液按体积比4∶1比例加入裂解液，混匀后立即加入1mm的二甲基亚砜，二甲基亚砜与红细胞的体积比为95∶4，混匀后静置30min；

(3)收集：离心15000rpm10min后取上清，a、b血型抗原已经溶解在上清中；

(4)吸收：含a抗原的溶液中加入抗a单克隆抗体，含b抗原的溶液中加入抗b单克隆抗体，抗原抗体发生细小免疫絮凝反应，混匀后静置30min；离心10000rpm5min，收集沉淀；

(5)放散：收集的沉淀按体积比1∶10的比例超纯水，混匀，置56℃水浴10min，期间不断振摇，超滤浓缩，收集膜抗原。即得到纯净的红细胞膜a抗原和b抗原；

胶体金的标记方法参见cn103033632a；

反应膜13上设有一检测区，该检测区从反应膜13的另一端到一端依次设有一第一检测线131、一第二检测线132和一对照线133，第一检测线131上包被固化抗-抗a抗体，第二检测线132上包被固化抗-抗b抗体，对照线133上包被固化抗rbc抗体；

优选的，上述抗-抗a抗体和抗-抗b抗体为多克隆抗体，其制备包括：根据现有技术，以去除fc片段(可采用酶切法去除)的抗a/b抗体，即抗a/b抗体的fab片段作为免疫抗原分多次免疫小鼠，抽血检测血清中二抗的效价和特异性，要求效价不低于1∶4096，特异性100％。达到标准时收集免疫后小鼠静脉全血，收集血清，再经纯化得到抗-抗a抗体或抗-抗b抗体；

优选的，上述抗-抗a抗体和抗-抗b抗体为单克隆抗体，其制备包括：根据现有技术，以去除fc片段(可采用酶切法去除)的抗a/b抗体，即抗a/b抗体的fab片段作为免疫抗原分多次免疫小鼠，取小鼠脾脏细胞与肿瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞株；杂交瘤细胞株筛选，方法同上，筛选得靶标细胞株，进一步培养所述靶标细胞株，其通过分泌得到抗a/b抗体特异性二抗，或将所述靶标细胞株注射入动物获得腹水，再经纯化得到抗-抗a抗体或抗-抗b抗体。

如图2所示，上壳体2设于所述基板10之上并覆盖所述加样垫11、抗原垫12、反应膜13和吸水垫14，该上壳体2具有一对应加样垫11的加样孔21和一对应反应膜13的检测区的观察窗22。

本实用新型采用免疫层析检测技术，定性检测人血清(浆)样本中的abo血型系统抗a/b抗体。检测时，样本中的血型抗a/b抗体可与标记后的相应红细胞血型a抗原和b抗原结合形成抗原抗体复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过第一检测线131和第二检测线132时与预包被的抗-抗a抗体和抗-抗b抗体结合形成“a/b抗原+抗a/b抗体+抗-抗a/b抗体”夹心物而凝聚显色。游离的红细胞膜抗原则在对照线133与预包被的抗rbc抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线133处显色。

优选的，基板10的材质为聚酯板；加样垫11的材质为多孔高分子材料，具有导水性、亲水性，可以是玻璃纤维；抗原垫12的材质为多孔高分子材料；反应膜13为多孔膜，可以是硝酸纤维素膜；吸水垫14的材质为棉浆纸；上壳体2的材质为ps，abs，pet等塑料材质。

本实用新型的具体使用方法如下：100ul血清(浆)样本滴加在加样孔21，样本在层析作用下沿纸条向前移动，等待5-10min后在观察窗22判读结果。判读方式为：第一检测线131显色，血液中有抗a抗体，第一检测线131不显色，血液中无抗a抗体，第二检测线132显色，血液中有抗b抗体，第二检测线132不显色，血液中无抗b抗体，然后通过第一检测线131和第二检测线132是否显色判断对应血型类型。

以上所述，仅为本实用新型的较佳实施例而已，故不能依此限定本实用新型实施的范围，即依本实用新型专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本实用新型涵盖的范围内。