技术特征：
1.一种测定甘胆酸的试剂盒，包括试剂r1以及试剂r2，其特征在于：所述试剂r1包括的成分及相应的含量为：缓冲液50
‑
200mm，酶激活剂10
‑
25mm，保护剂5.0
‑
30g/l，葡萄糖六磷酸盐2.0
‑
8.0g/l，表面活性剂0.5
‑
1.5g/l，甘胆酸
‑
葡萄糖六磷酸脱氢酶偶联物1.0
‑
4.0ul/l；所述甘胆酸
‑
葡萄糖六磷酸脱氢酶偶联物的制备过程中，甘胆酸与葡萄糖六磷酸脱氢酶的标记时间为2
‑
4h，且标记结束后加入终止液终止反应。2.根据权利要求1所述的一种测定甘胆酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂r2包括的成分及相应的含量为：缓冲液30
‑
200mm，保护剂5.0
‑
25g/l，nad 0.5
‑
4.0g/l，nadh 0.01
‑
0.1g/l，抗甘胆酸抗体10
‑
30mg/l。3.根据权利要求2所述的一种测定甘胆酸的试剂盒，其特征在于，所述终止液选自甘氨酸、酪蛋白或bsa中的至少一种，优选为甘氨酸。4.根据权利要求3所述的一种测定甘胆酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂r1还包括：离子螯合剂5.0
‑
20mm，盐离子20
‑
100mm，防腐剂0.5
‑
1.5g/l；所述试剂r2还包括：盐离子10
‑
40g/l，防腐剂0.5
‑
1.5g/l。5.根据权利要求4所述的一种测定甘胆酸的试剂盒，其特征在于，在所述试剂r1中：所述缓冲液选自咪唑、ches、apmso或tris
‑
hcl中的至少一种；所述离子螯合剂选自egta或edta中的至少一种；所述酶激活剂选自氯化镁或氯化钙中的至少一种；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述保护剂选自bsa或酪蛋白中的至少一种；所述表面活性剂选自tx
‑
100、brj
‑
58、tx
‑
305或tx
‑
405中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或proclin
‑
300中的至少一种；在所述试剂r2中：所述缓冲液选自mes、甘氨酸或hepes中的至少一种；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述保护剂选自bsa或酪蛋白中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或proclin
‑
300中的至少一种。6.一种如权利要求1
‑
5任一项所述的一种测定甘胆酸试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)葡萄糖六磷酸脱氢酶溶液的制备按照下述配方进行配制：缓冲液50
‑
200mm，葡萄糖六磷酸脱氢酶20
‑
50ku，六水合氯化镁1.0
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10mm，盐离子100
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200mm，nadh 10
‑
30g/l，葡萄糖六磷酸盐5.0
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20g/l，二乙二醇乙醚10
‑
100ml/l，二甲亚砜20
‑
50ml/l；所述缓冲液选自咪唑、ches、apmso或tris
‑
hcl中的至少一种，所述盐离子选自氯化钠或氯化钙中的至少一种；(2)甘胆酸的活化按照下述配方进行配制：甘氨酸5.0
‑
30g/l，n
‑
n二甲基甲酰胺0.5
‑
20ml，1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐5.0
‑
20g/l，n
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺5.0
‑
20g/l；冰水浴搅拌条件下将甘胆酸用n
‑
n
‑
二甲基甲酰胺溶解，随后加入羧基活化剂(1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐)进行活化处理40
‑
50min；
(3)甘胆酸
‑
葡萄糖六磷酸脱氢酶标记将活化的甘胆酸溶液加入葡萄糖六磷酸脱氢酶溶液中，在冰水浴条件下反应，加入终止液，浓缩提纯。7.根据权利要求6所述的一种测定甘胆酸试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述甘胆酸
‑
葡萄糖六磷酸脱氢酶的标记时间为2
‑
4h。8.根据权利要求6所述的一种测定甘胆酸试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述终止液选自甘氨酸、bsa或酪蛋白中的至少一种，优选为甘氨酸。9.根据权利要求8所述的一种测定甘胆酸试剂盒的制备方法，其特征在于：还包括步骤(4)试剂r1的制备以及步骤(5)试剂r2的制备：(4)试剂r1的制备试剂r1按照下述配方进行配制：缓冲液50
‑
200mm，离子螯合剂5.0
‑
20mm，酶激活剂10
‑
25mm，盐离子20
‑
100mm，保护剂5.0
‑
30g/l，葡萄糖六磷酸盐2.0
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8.0g/l，表面活性剂0.5
‑
1.5g/l，防腐剂0.5
‑
1.5g/l，甘胆酸
‑
葡萄糖六磷酸脱氢酶偶联物1.0
‑
4.0ul/l；所述缓冲液选自咪唑、ches、apmso或tris
‑
hcl中的至少一种；所述离子螯合剂选自egta或edta中的至少一种；所述酶激活剂选自氯化镁或氯化钙中的至少一种；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述保护剂选自bsa或酪蛋白中的至少一种；所述表面活性剂选自tx
‑
100、brj
‑
58、tx
‑
305或tx
‑
405中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或proclin
‑
300中的至少一种；(5)试剂r2的制备试剂r2按照下述配方进行配制：缓冲液30
‑
200mm，盐离子10
‑
40g/l，保护剂5.0
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25g/l，nad 0.5
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4.0g/l，nadh 0.01
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0.1g/l，抗甘胆酸抗体10
‑
30mg/l，防腐剂0.5
‑
1.5g/l；所述缓冲液选自mes、甘氨酸或hepes中的至少一种；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述保护剂选自bsa或酪蛋白中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或proclin
‑
300中的至少一种。10.根据权利要求9所述的一种测定甘胆酸试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述浓缩提纯为：以tris
‑
hcl缓冲液作为洗脱液，使用超滤浓缩管6000
‑
9000rpm，4
‑
10℃条件下离心10
‑
20min，离心洗脱4
‑
6次。
技术总结
本发明公开了一种测定甘胆酸的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1以及试剂R2，其中试剂R1包括缓冲液50
技术研发人员：李元丽 刘霖 杨焜诚
受保护的技术使用者：重庆中元汇吉生物技术有限公司
技术研发日：2021.07.08
技术公布日：2021/10/28