一种醒脾胶囊的检测方法与流程

1.本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种醒脾胶囊的检测方法。


背景技术：

2.醒脾胶囊，为贵州健兴药业有限公司的产品，是一种中成药制剂，功效是醒脾开胃，养血安神，固肠止泻，对治疗脾气虚引起的夜寐不安，食欲不振等症状效果较好。
3.醒脾胶囊收载于ws
‑
11534(zd
‑
1534)
‑
2002，标准中原有检测项目为：性状、显微鉴别、检查、浸出物，但在实际检测中存在以下缺陷：(1)一点红的薄层鉴别，斑点小而模糊，重现性差，斑点rf值偏小，影响检验结果的判断；(2)毛大丁草的薄层鉴别，主斑点较模糊、且出现拖尾现象，斑点rf值偏小，重现性差，影响检验结果的判断；(3)该检测方法未涉及蜘蛛香的薄层鉴别，不能有效控制醒脾胶囊成品的质量。
4.为了解决上述问题，有效的提高产品质量，提升醒脾胶囊的质量标准，本发明团队对醒脾胶囊原检测方法进行深入研发、考察，建立了一种用于醒脾胶囊的检测方法。该方法解决了一点红、毛大丁草的薄层鉴别斑点模糊，斑点rf值偏小、重现性差的等问题；增加了蜘蛛香薄层鉴别检测，提升质量检测标准，有效的控制产品的质量。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种醒脾胶囊的检测方法。
6.本发明所述醒脾胶囊的处方为：
7.一点红395g 毛大丁草380g 山栀茶125g 蜘蛛香93g
8.本发明所述醒脾胶囊的制法为：
9.以上四味药材，取一点红30g粉碎成细粉，过80目筛备用，剩余一点红与毛大丁草等三味加水浸泡20～40分钟，煎煮二次，第一次1.5～2.5小时，第二次1～2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度在80℃为1.17～1.20的清膏，加入一点红细粉，混匀，干燥，粉碎，过80目筛，加淀粉5～15g，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得；
10.本发明所述胶囊的检测方法为：对胶囊中栀子药材的薄层鉴别检查，对功劳木、黄柏，黄芩，栀子药材的含量测定。
11.本发明所述一点红的薄层鉴别方法为：取本品内容物4g，加水50～150m1，浸渍过夜，加热回流30～60分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至25～35m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取2～4次，每次15～25ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
12.优选的，
13.本发明所述一点红的薄层鉴别方法为：取本品内容物4g，加水80～120m1，浸渍过
夜，加热回流40～50分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至28～32m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取3次，每次18～22ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
14.进一步优选的，
15.本发明所述一点红的薄层鉴别方法为：取本品内容物4g，加水100m1，浸渍过夜，加热回流45分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至30m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
16.本发明所述毛大丁草的薄层鉴别方法为：取本品内容物3g，加三氯甲烷20～40m1，回流提取30～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
17.优选的，
18.本发明所述毛大丁草的薄层鉴别方法为：取本品内容物3g，加三氯甲烷25～35m1，回流提取40～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
19.进一步优选的，
20.本发明所述毛大丁草的薄层鉴别方法为：取本品内容物3g，加三氯甲烷30m1，回流提取45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
21.本发明所述蜘蛛香的薄层鉴别方法为：取本品内容物3g，加60～80％乙醇20～50ml，超声处理30～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品
色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
22.优选的，
23.本发明所述蜘蛛香的薄层鉴别方法为：取本品内容物3g，加65～75％乙醇30～40ml，超声处理40～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
24.进一步优选的，
25.本发明所述蜘蛛香的薄层鉴别方法为：取本品内容物3g，加70％乙醇35ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
26.有益效果：
27.1、该检测方法在原检测方法的基础上增加了蜘蛛香药材的薄层鉴别，优化了一点红和毛大丁草药材的薄层鉴别方法，通过方法学考察，该薄层鉴别方法具有专属性强、耐用性好、薄层展开后斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中等效果，能有效的控制产品的质量，提升了产品质量检测标准。
28.2、本发明对一点红、毛大丁草薄层鉴别中供试品的提取方法进行了筛选实验，得到了供试品处理的优选方案，并对一点红薄层鉴别方法进行了方法学考察，结果在专属性考察中，在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的主斑点，且斑点分离较好，阴性无干扰，表明此方法专属性强；在重现性考察中，10批样品检验结果一致，表明此方法的稳定性；在耐用性考察中，在不同薄层板、温度、湿度下考察，结果斑点分离好，无干扰，表明此方法耐用性好。
29.3、本发明增加了蜘蛛香薄层鉴别，根据蜘蛛香在药典薄层鉴别标准进行优化试验，进行提取溶剂的筛选、提取方式、提取时间和展开剂比例的筛选，得到了蜘蛛香薄层鉴别的优选方法。并对优选方法进行了方法学考察，结果表明不同湿度条件下，用高效薄层板和硅胶g商品板进行试验，蜘蛛香的薄层鉴别色谱图斑点清晰，分离符合要求，rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
具体实施方式
30.实施例1制备方法
31.【处方】一点红395g 毛大丁草380g 山栀茶125g 蜘蛛香93g
32.【制法】以上四味药材，取一点红30g粉碎成细粉，过80目筛备用，剩余一点红与毛大丁草等三味加水浸泡30分钟，煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度在80℃为1.17～1.20的清膏，加入一点红细粉，混匀，干燥，粉碎，过80目筛，加淀粉10g，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
33.实施例2制备方法
34.【处方】一点红395g 毛大丁草380g 山栀茶125g 蜘蛛香93g
35.【制法】以上四味药材，取一点红30g粉碎成细粉，过80目筛备用，剩余一点红与毛大丁草等三味加水浸泡20分钟，煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度在80℃为1.17～1.20的清膏，加入一点红细粉，混匀，干燥，粉碎，过80目筛，加淀粉5g，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得；
36.实施例3制备方法
37.【处方】一点红395g 毛大丁草380g 山栀茶125g 蜘蛛香93g
38.【制法】以上四味药材，取一点红30g粉碎成细粉，过80目筛备用，剩余一点红与毛大丁草等三味加水浸泡40分钟，煎煮二次，第一次2.5小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度在80℃为1.17～1.20的清膏，加入一点红细粉，混匀，干燥，粉碎，过80目筛，加淀粉15g，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得；
39.检测方法
40.实施例4～10用于检测实施1～3制备的醒脾胶囊
41.实施例4
42.【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色至棕色的粉末或颗粒，味微苦。
43.【鉴别】
44.一点红的薄层鉴别：取本品内容物4g，加水100m1，浸渍过夜，加热回流45分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至30m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
45.毛大丁草的薄层鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷30m1，回流提取45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
46.蜘蛛香的薄层鉴别：取本品内容物3g，加70％乙醇35ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
47.【检查】应符合胶剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录il)。
48.【浸出物】取本品内容物48，精密称定，用稀乙醇100m1作溶剂，依法(中国药典2010年版一部附录xa醇溶性出物测定法一热浸法)测定。本品含醇溶性浸出物不得少于10.0％。
49.【功能与主治】苗医:宕芳夯珞，怡象仃网停，纠迭挡渣:久代阿套穷，底加嘎仰溪秀
切，然雅。
50.【用法与用量】口服，一次5粒，一日2次，儿童酌减。
51.【注意】适用于实热火毒者，三焦热盛之证，虚寒者慎用；虚寒重症者禁用。
52.【规格】每粒装0.3g
53.【贮藏】密封
54.实施例5
55.【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色至棕色的粉末或颗粒，味微苦。
56.【鉴别】
57.一点红的薄层鉴别：取本品内容物4g，加水50m1，浸渍过夜，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至25m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
58.毛大丁草的薄层鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷20m1，回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
59.蜘蛛香的薄层鉴别：取本品内容物3g，加60％乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
60.【检查】应符合胶剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录il)。
61.【浸出物】取本品内容物48，精密称定，用稀乙醇100m1作溶剂，依法(中国药典2010年版一部附录xa醇溶性出物测定法一热浸法)测定。本品含醇溶性浸出物不得少于10.0％。
62.【功能与主治】苗医:宕芳夯珞，怡象仃网停，纠迭挡渣:久代阿套穷，底加嘎仰溪秀切，然雅。
63.【用法与用量】口服，一次5粒，一日2次，儿童酌减。
64.【注意】适用于实热火毒者，三焦热盛之证，虚寒者慎用；虚寒重症者禁用。
65.【规格】每粒装0.3g
66.【贮藏】密封
67.实施例6
68.【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色至棕色的粉末或颗粒，味微苦。
69.【鉴别】
70.一点红的薄层鉴别：取本品内容物4g，加水150m1，浸渍过夜，加热回流60分钟，放
冷，滤过，滤液浓缩至35m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取4次，每次25ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
71.毛大丁草的薄层鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷40m1，回流提取60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
72.蜘蛛香的薄层鉴别：取本品内容物3g，加80％乙醇50ml，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
73.【检查】应符合胶剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录il)。
74.【浸出物】取本品内容物48，精密称定，用稀乙醇100m1作溶剂，依法(中国药典2010年版一部附录xa醇溶性出物测定法一热浸法)测定。本品含醇溶性浸出物不得少于10.0％。
75.【功能与主治】苗医:宕芳夯珞，怡象仃网停，纠迭挡渣:久代阿套穷，底加嘎仰溪秀切，然雅。
76.【用法与用量】口服，一次5粒，一日2次，儿童酌减。
77.【注意】适用于实热火毒者，三焦热盛之证，虚寒者慎用；虚寒重症者禁用。
78.【规格】每粒装0.3g
79.【贮藏】密封
80.实施例7
81.【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色至棕色的粉末或颗粒，味微苦。
82.【鉴别】
83.一点红的薄层鉴别：取本品内容物4g，加水80m1，浸渍过夜，加热回流40分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至28m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取3次，每次18ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
84.毛大丁草的薄层鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷25m1，回流提取40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例
为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
85.蜘蛛香的薄层鉴别：取本品内容物3g，加65％乙醇30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
86.【检查】应符合胶剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录il)。
87.【浸出物】取本品内容物48，精密称定，用稀乙醇100m1作溶剂，依法(中国药典2010年版一部附录xa醇溶性出物测定法一热浸法)测定。本品含醇溶性浸出物不得少于10.0％。
88.【功能与主治】苗医:宕芳夯珞，怡象仃网停，纠迭挡渣:久代阿套穷，底加嘎仰溪秀切，然雅。
89.【用法与用量】口服，一次5粒，一日2次，儿童酌减。
90.【注意】适用于实热火毒者，三焦热盛之证，虚寒者慎用；虚寒重症者禁用。
91.【规格】每粒装0.3g
92.【贮藏】密封
93.实施例8
94.【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色至棕色的粉末或颗粒，味微苦。
95.【鉴别】
96.一点红的薄层鉴别：取本品内容物4g，加水120m1，浸渍过夜，加热回流50分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至32m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取3次，每次22ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
97.毛大丁草的薄层鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷35m1，回流提取50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
98.蜘蛛香的薄层鉴别：取本品内容物3g，加72％乙醇40ml，超声处理50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
99.【检查】应符合胶剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录il)。
100.【浸出物】取本品内容物48，精密称定，用稀乙醇100m1作溶剂，依法(中国药典2010年版一部附录xa醇溶性出物测定法一热浸法)测定。本品含醇溶性浸出物不得少于10.0％。
101.【功能与主治】苗医:宕芳夯珞，怡象仃网停，纠迭挡渣:久代阿套穷，底加嘎仰溪秀切，然雅。
102.【用法与用量】口服，一次5粒，一日2次，儿童酌减。
103.【注意】适用于实热火毒者，三焦热盛之证，虚寒者慎用；虚寒重症者禁用。
104.【规格】每粒装0.3g
105.【贮藏】密封
106.实施例9
107.【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色至棕色的粉末或颗粒，味微苦。
108.【鉴别】
109.一点红的薄层鉴别：取本品内容物4g，加水70m1，浸渍过夜，加热回流35分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至28m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取3次，每次24ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
110.毛大丁草的薄层鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷28m1，回流提取35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
111.蜘蛛香的薄层鉴别：取本品内容物3g，加68％乙醇25ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
112.【检查】应符合胶剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录il)。
113.【浸出物】取本品内容物48，精密称定，用稀乙醇100m1作溶剂，依法(中国药典2010年版一部附录xa醇溶性出物测定法一热浸法)测定。本品含醇溶性浸出物不得少于10.0％。
114.【功能与主治】苗医:宕芳夯珞，怡象仃网停，纠迭挡渣:久代阿套穷，底加嘎仰溪秀切，然雅。
115.【用法与用量】口服，一次5粒，一日2次，儿童酌减。
116.【注意】适用于实热火毒者，三焦热盛之证，虚寒者慎用；虚寒重症者禁用。
117.【规格】每粒装0.3g
118.【贮藏】密封
119.实施例10
120.【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色至棕色的粉末或颗粒，味微苦。
121.【鉴别】
122.一点红的薄层鉴别：取本品内容物4g，加水110m1，浸渍过夜，加热回流55分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至33m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取3次，每次24ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
123.毛大丁草的薄层鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷22m1，回流提取55分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
124.蜘蛛香的薄层鉴别：取本品内容物3g，加72％乙醇45ml，超声处理55分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
125.【检查】应符合胶剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录il)。
126.【浸出物】取本品内容物48，精密称定，用稀乙醇100m1作溶剂，依法(中国药典2010年版一部附录xa醇溶性出物测定法一热浸法)测定。本品含醇溶性浸出物不得少于10.0％。
127.【功能与主治】苗医:宕芳夯珞，怡象仃网停，纠迭挡渣:久代阿套穷，底加嘎仰溪秀切，然雅。
128.【用法与用量】口服，一次5粒，一日2次，儿童酌减。
129.【注意】适用于实热火毒者，三焦热盛之证，虚寒者慎用；虚寒重症者禁用。
130.【规格】每粒装0.3g。
131.【贮藏】密封。
132.为了进一步验证本发明的有效性，发明人进行了一系列的验证试验，摘录部分如下：实验例
133.1材料、设备、试剂及对照品
134.1.1材料
[0135][0136]
1.2设备
[0137][0138][0139]
1.3试剂
[0140][0141]
1.4对照品
[0142][0143]
2检测方法修订的来源
[0144]
原醒脾胶囊收载于ws
‑
11534(zd
‑
1534)
‑
2002，标准中原有检测项目为：性状、显微鉴别、检查、浸出物，但在实际检测中存在以下缺陷：(1)一点红的薄层鉴别，斑点小而模糊，重现性差，斑点rf值偏小，影响检验结果的判断；(2)毛大丁草的薄层鉴别，主斑点较模糊、且出现拖尾现象，斑点rf值偏小，重现性差，影响检验结果的判断；(3)该检测方法未涉及蜘蛛香的薄层鉴别，不能有效控制醒脾胶囊成品的质量。根据提高质量标准要求，拟对原标准检测项目进行修订及增加蜘蛛香薄层鉴别检测。经实验研究对本品质量标准提出增修订草
案，增修订内容实验依据如下。
[0145]
3检测方法修定内容
[0146]
3.1一点红薄层鉴别的修定
[0147]
原标准收载方中一点红的薄层鉴别，供试品的处理为回流提取，浓缩，再用乙酸乙酯振摇提取，结果薄层鉴别斑点模糊，斑点rf值偏小，重现性差，影响检验结果的判断，故在此，对一点红药材的鉴别进行了修订。
[0148]
3.1.1样品：醒脾胶囊，批号20200301，贵州健兴药业有限公司生产。
[0149]
3.1.2供试品提取方法筛选
[0150]
方法一(优化前)：取本品内容物4g，加水100m1，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约30m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30m1，合并乙酸乙酯液，用4％碳酸氢钠溶液20m1洗涤，弃去洗液，再用水10m1洗涤，弃去水洗液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1m1使溶解，作为供试品溶液。另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液。照层色谱法(中国药典2010年版一部附录
ⅵ
b)试验，吸取上述两种溶液各101，分别点于同一硅胶g层板上，以甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液(20:20:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。
[0151]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法一”处理10个样品，结果10个供试品色谱中，其中4个供试品与对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点，但斑点模糊、rf值偏小；其中6个供试品未在对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点，证明重现性差，表明有效成分的提取不稳定，故以下考察从提取方法加以考虑。
[0152]
方法二：在供试品回流前增加“浸渍过夜”，其余处理同“方法一”。
[0153]
结果：通过在“方法一”检测方法的基础上，在提取前增加“浸渍过夜”，结果10个供试品色谱中，其中8个供试品与对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点，但斑点模糊、rf值偏小；其中2个供试品未在对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点。故供试品提取前经“浸渍过夜”，有效成分提取相对较高，薄层结果重现性较“方法一”高。以下试验再次考虑改变第2、3次提取溶剂，有助于提高有效成分的提取。
[0154]
方法三：在“方法二”的基础上把第2、3次提取溶剂“乙酸乙酯”优化为“三氯甲烷”，其余处理同“方法二”。
[0155]
结果：通过改变第2、3次的提取溶剂，结果10个供试品色谱中，10个供试品与对照药材色谱相应的位置上均有相应的斑点，且斑点均清晰、重现性好，rf值均适中，故“方法三”为优选，即为：取本品内容物4g，加水100m1，浸渍过夜，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约30m1，加乙醇30m1，搅匀，滤过，滤液蒸至无醇味，用三氯甲烷振摇提取2次，每次30m1，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液。照层色谱法(中国药典2010年版一部附录
ⅵ
b)试验，吸取上述两种溶液各101，分别点于同一硅胶g层板上，以甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液(20:20:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。
[0156]
3.1.3对“方法三”再次筛选
[0157]
3.1.3.1提取溶剂水的用量确定
[0158]
取醒脾胶囊(20200301)，各4份，分别按“3.1.2”项下“方法三”进行薄层鉴别，水作溶剂用量分别为50m1、100m1、150m1，结果见表1。
[0159]
表1提取溶剂水用量考察表
[0160][0161]
结果，加水量为100m1和150m1时，薄层结果均为斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故加水量“100m1”为优选。
[0162]
3.1.3.2回流时间的确定
[0163]
取醒脾胶囊(20200301)，各取5份，分别按“3.1.2”项下“方法三”进行薄层鉴别，加水量为“100m1”浸渍过夜，回流时间分别为30分钟、40分钟、45分钟、50分钟、60分钟，结果见表2。
[0164]
表2回流提取时间考察表
[0165][0166]
结果，回流提取时间为45分钟、50分钟、60钟时，薄层结果均显示斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故回流时间为“45分钟”为优选。
[0167]
3.1.3.3三氯甲烷振摇提取次数确定
[0168]
取醒脾胶囊(20200301)，各取5份，分别按“3.1.2”项下“方法三”进行薄层鉴别，加水量为“100m1”浸渍过夜，回流时间分别为“45分钟”，三氯甲烷振摇提取分别为1次、2次、3次、4次、5次，结果见表3。
[0169]
表3振摇提取次数考察表
[0170][0171]
结果，三氯甲烷振摇提取为3次、4次、5次时，薄层结果均显示斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故振摇提取次数“3次”为优选。
[0172]
3.1.3.4三氯甲烷用量确定
[0173]
取醒脾胶囊(20200301)，各取5份，分别按“3.1.2”项下“方法三”进行薄层鉴别，加水量为“100m1”浸渍过夜，回流时间分别为“45分钟”，三氯甲烷振摇提取“3次”，三氯甲烷振摇提取的用量分别为10m1、15m1、20m1、25m1、30m1，结果见表4。
[0174]
表4三氯甲烷用量考察表
[0175][0176]
结果，三氯甲烷用量为20m1、25m1、30m1时，薄层结果均显示斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故三氯甲烷用量“20m1”为优选。
[0177]
3.1.4结论
[0178]
根据上述筛选结果，修定后一点红的薄层鉴别方法为：取本品内容物4g，加水100m1，浸渍过夜，加热回流45分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至30m1，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，分取三氯甲烷液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取一点红对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0179]
3.1.5方法学验证
[0180]
3.1.5.1专属性
[0181]
取醒脾胶囊、一点红对照药材及缺一点红阴性样品，按“3.1.4”项下所述方法制得供试品溶液、对照药材溶液及阴性供试品溶液，点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫
外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点分离较好，阴性无干扰。
[0182]
3.1.5.2重现性
[0183]
取按“实施例1”制备的醒脾胶囊10批，分别按“3.1.4”项下一点红药材的薄层鉴别修定的方法展开，结果见表5。
[0184]
表5试验方法、条件及重现性试验结果
[0185][0186]
3.1.5.3耐用性
[0187]
3.1.5.3.1不同薄层板的比较
[0188]
取按“实施例1”制备的醒脾胶囊10批，分别按“3.1.4”项下一点红药材的薄层鉴别修定的方法展开，比较青岛海洋化工厂分厂硅胶g商品板和高效硅胶g商品板的薄层，结果见表6。
[0189]
表6不同薄层板耐用性结果表
[0190]
[0191]
结果：高效硅胶板商品板斑点清晰，分离符合要求，rf值适中；硅胶g商品板斑点清晰，分离达到要求,rf值适中，故本方法耐用性好。
[0192]
3.1.5.3.2不同湿度的比较
[0193]
比较了低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果，结果见表7。
[0194]
表7低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果表
[0195][0196][0197]
结果：斑点清晰，分离符合要求，rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
[0198]
经上述方法学验证试验，结果表明不同湿度条件下，用高效薄层板和硅胶g商品板进行试验，一点红的薄层鉴别色谱图斑点清晰，分离符合要求，rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
[0199]
3.2毛大丁草薄层鉴别的修定
[0200]
原标准收载方中毛大丁草的薄层鉴别，供试品的处理为超声提取，提取剂为甲醇，结果薄层鉴别斑点模糊，斑点rf值偏小，重现性差，影响检验结果的判断，故在此，对毛大丁草药材的鉴别进行了修订。
[0201]
3.2.1样品：醒脾胶囊，批号20200301，贵州健兴药业有限公司生产。
[0202]
3.2.2薄层鉴别方法筛选
[0203]
方法一(优化前)：取本品内容物3g，加甲醇30m1，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液。另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照层色法(中国药典2010年版一部附录
ⅵ
b)试验，吸取上述两种溶液各5～10p1，分别点于同一硅胶g层板上，以三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水(30:10:0.4)为展开剂，展开，取出，晾干干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
[0204]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法一”处理10个样品，结果10个供试品色谱中，其中5个供试品与对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点，但斑点模糊、rf值偏小；其中5个供试品未在对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点，证明重现性差，表明有效成分的提取不完全，故以下考察从提取方法加以考虑。
[0205]
方法二：改变提取溶剂，分别以乙醇、乙酸乙脂、三氯甲烷代替甲醇，其余处理同
“
方法一”。
[0206]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法二”处理10个样品，结果以“三氯甲烷”作溶剂，供试品与对照药材色谱相应的位置上均有相应的斑点，且斑点相对较清晰，rf值相对适中，重现性好；故“三氯甲烷”作溶剂为优选，以下再从提取方法加以优化。
[0207]
方法三：在“方法一”的基础上，以“三氯甲烷”作溶剂，以回流提取替换超声提取，其余处理同“方法一”。
[0208]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法三”处理10个样品，结果“回流提取”的薄层，10个供试品与对照药材色谱相应的位置上均有相应的斑点，且斑点清晰、重现性好，rf值均适中，故“回流提取”为优选，在色谱图中，其中有2个样品斑点稍有拖尾现象，故以下以展开剂比例加以优化。
[0209]
方法四：在“方法一”的基础上，以“三氯甲烷”作溶剂，回流提取，以三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水(30:20:0.4)作展开剂展开，其余处理同“方法一”。
[0210]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法四”处理10个样品，结果10个供试品与对照药材色谱相应的位置上均有相应的斑点，且斑点清晰、重现性好，rf值均适中，且斑点无拖尾现象，故展开剂比例“30:20:0.4”为优选。
[0211]
3.2.3对“方法四”再次筛选
[0212]
3.2.3.1提取溶剂用量的确定
[0213]
取醒脾胶囊(20200301)，各5份，分别按“3.2.2”项下“方法四”进行薄层鉴别，三氯甲烷作溶剂用量分别为20m1、30m1、40m1、50m1，结果见表8。
[0214]
表8提取溶剂水用量考察表
[0215][0216]
结果，三氯甲烷为30m1、40m1和50m1时，薄层结果均为斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故三氯甲烷为“30m1”为优选。
[0217]
3.2.3.2回流时间的确定
[0218]
取醒脾胶囊(20200301)，各取5份，分别按“3.2.2”项下“方法四”进行薄层鉴别，三氯甲烷为“30m1”，回流时间分别为30分钟、40分钟、45分钟、50分钟、60分钟，结果见表9。
[0219]
表9回流提取时间考察表
[0220][0221]
结果，回流提取时间为45分钟、50分钟、60钟时，薄层结果均显示斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故回流时间为“45分钟”为优选。
[0222]
3.2.4结论
[0223]
根据上述筛选结果，修定后毛大丁草的薄层鉴别方法为：取本品内容物3g，加三氯甲烷30m1，回流提取45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m使溶解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照层色法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g层板上，以比例为30:20:0.4的三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光班点。
[0224]
3.2.5方法学验证
[0225]
3.2.5.1专属性
[0226]
取醒脾胶囊、毛大丁草对照药材及缺毛大丁草阴性样品，按“3.2.4”项下所述方法制得供试品溶液、对照药材溶液及阴性供试品溶液，点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点分离较好，阴性无干扰。
[0227]
3.2.5.2重现性
[0228]
取按“实施例1”制备的醒脾胶囊10批，分别按“3.2.4”项下毛大丁草药材的薄层鉴别修定的方法展开，结果见表10。
[0229]
表10试验方法、条件及重现性试验结果
[0230]
[0231][0232]
3.2.5.3耐用性
[0233]
3.2.5.3.1不同薄层板的比较
[0234]
取按“实施例1”制备的醒脾胶囊10批，分别按“3.2.4”项下毛大丁草药材的薄层鉴别修定的方法展开，比较青岛海洋化工厂分厂硅胶g商品板和高效硅胶g商品板的薄层，结果见表11。
[0235]
表11不同薄层板耐用性结果表
[0236][0237]
结果：高效硅胶板商品板斑点清晰，分离符合要求，rf值适中；硅胶g商品板斑点清晰，分离达到要求,rf值适中，故本方法耐用性好。
[0238]
3.2.5.3.2不同湿度的比较
[0239]
比较了低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果，结果见表12。
[0240]
表12低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果表
[0241][0242]
结果：斑点清晰，分离符合要求，rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
[0243]
经上述方法学验证试验，结果表明不同湿度条件下，用高效薄层板和硅胶g商品板进行试验，毛大丁草的薄层鉴别色谱图斑点清晰，分离符合要求，rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
[0244]
3.3蜘蛛香薄层鉴别方法在确定
[0245]
原标准收载方中无蜘蛛香的薄层鉴别，为了更好的控制产品质量，提升质量标准，根据2020版药典中收载的蜘蛛香药材的薄层鉴别方法，结合醒脾胶囊实际检测情况作研究。
[0246]
3.3.1样品：醒脾胶囊，批号20200301，贵州健兴药业有限公司生产。
[0247]
3.3.2薄层鉴别方法筛选
[0248]
方法一(药典标准)：取本品细粉3g，加氯仿10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取蜘蛛香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部附录
ⅵ
b)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以正己烷
‑
丙酮(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0249]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法一”处理10个样品，结果10个供试品色谱中，其中7个供试品与对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点，但斑点模糊、rf值偏小；其中2个供试品未在对照药材色谱相应的位置上有相应的斑点，证明重现性差，表明有效成分的提取不完全，故以下考察从提取溶剂加以优化。
[0250]
方法二：取本品5份，分别称取细粉3g，分别加入乙酸乙脂、丙酮、乙醚、甲醇、乙醇各10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。分别以乙醇、乙酸乙脂、三氯甲烷代替甲醇，其余处理同“方法一”。
[0251]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法二”中各溶剂处理10个样品，结果只有以“乙醇”作溶剂时，供试品与对照药材色谱相应的位置上均有相应的斑点，且斑点清晰，rf值相对适中，重现性好，但斑点有拖尾现象；故“乙醇”作溶剂为优选，以下再展开剂加以优
化。
[0252]
方法三：在“方法二”以乙醇作溶剂的基础上，以展开剂为“正己烷
‑
丙酮”，展开剂比例分别为：“1：1”、“2：1”、“3：1”、“4：3”、“5：2”分别展开，其余处理同“方法一”。
[0253]
结果：取醒脾胶囊(20200301)，分别按“方法三”各展开剂比例分别处理10个样品，结果以正己烷
‑
丙酮(3:1)为展开剂时，10个供试品与对照药材色谱相应的位置上均有相应的斑点，且斑点清晰、重现性好，rf值均适中，故以展开剂“正己烷
‑
丙酮(3:1)”为优选。
[0254]
3.3.3对“方法三”再次筛选
[0255]
3.3.3.1乙醇浓度的确定
[0256]
取醒脾胶囊(20200301)，各5份，分别按“3.3.2”项下“方法三”进行薄层鉴别，分别加浓度为50％、60％、70％、80％的乙醇，超声处理30分钟，结果见表13。
[0257]
表13乙醇浓度考察表
[0258][0259]
结果，60％、70％和80％的乙醇，薄层结果均为斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故“60％”为优选。
[0260]
3.3.3.2超声时间的确定
[0261]
取醒脾胶囊(20200301)，各取5份，分别按“3.3.2”项下“方法三”进行薄层鉴别，乙醇为“60％m”，超声时间分别为30分钟、40分钟、45分钟、50分钟、60分钟，结果见表14。
[0262]
表14超声提取时间考察表
[0263][0264]
结果，超声提取时间为45分钟、50分钟、60钟时，薄层结果均显示斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，考虑成本问题，故超声时间为“45分钟”为优选。
[0265]
3.3.4结论
[0266]
根据上述筛选结果，修定后蜘蛛香的薄层鉴别方法为：10、取本品内容物3g，70％乙醇35ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蜘蛛香对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，
分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以比例为3:1的正己烷
‑
丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0267]
3.3.5方法学验证
[0268]
3.3.5.1专属性
[0269]
取醒脾胶囊、蜘蛛香对照药材及缺蜘蛛香阴性样品，按“3.3.4”项下所述方法制得供试品溶液、对照药材溶液及阴性供试品溶液，点于同一硅胶g层板上，以比例为20:20:3:1的甲苯
‑
丙酮
‑
乙醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点分离较好，阴性无干扰。
[0270]
3.2.5.2重现性
[0271]
取按“实施例1”制备的醒脾胶囊10批，分别按“3.3.4”项下蜘蛛香药材的薄层鉴别修定的方法展开，结果见表15。
[0272]
表15试验方法、条件及重现性试验结果
[0273][0274]
3.3.5.3耐用性
[0275]
3.2.5.3.1不同薄层板的比较
[0276]
取按“实施例1”制备的醒脾胶囊10批，分别按“3.3.4”项下蜘蛛香药材的薄层鉴别修定的方法展开，比较青岛海洋化工厂分厂硅胶g商品板和高效硅胶g商品板的薄层，结果见表16。
[0277]
表16不同薄层板耐用性结果表
[0278][0279][0280]
结果：高效硅胶板商品板斑点清晰，分离符合要求，rf值适中；硅胶g商品板斑点清晰，分离达到要求,rf值适中，故本方法耐用性好。
[0281]
3.3.5.3.2不同湿度的比较
[0282]
比较了低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果，结果见表17。
[0283]
表17低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果表
[0284][0285]
结果：斑点清晰，分离符合要求，rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
[0286]
经上述方法学验证试验，结果表明不同湿度条件下，用高效薄层板和硅胶g商品板进行试验，蜘蛛香的薄层鉴别色谱图斑点清晰，分离符合要求，rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
[0287]
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。