一种甲泼尼龙中间体的分析方法与流程

1.本发明涉及医药检测分析领域，具体涉及甲泼尼龙中间体的检测分析方法。


背景技术：

2.甲泼尼龙为11β,17,21-三羟基-6α-甲基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮，是一种人工合成的糖皮质激素，属中效糖皮质激素，具有抗炎、免疫机制及抗过敏作用。甲泼尼龙能抑制结缔组织的增生，降低毛细血管壁和细胞膜的通透性，减少炎性渗出，并能抑制组胺及其它毒性物质的形成与释放。其水钠潴留及排钾作用比泼尼松小，抗炎及抗过敏作用较强，副作用较少，主要用于过敏性与炎症性疾病和器官移植以防排异，也可以作为危重疾病的急救用药，临床上应用十分广泛。
3.作为临床上应用广泛的糖皮质激素类药物，甲泼尼龙片于1957年10月24即在美国上市，临床上用于风湿性疾病、胶原疾病、皮肤疾病、过敏性疾病、眼部疾病、呼吸道疾病、血液病、肿瘤、水肿、胃肠道疾病、神经系统、器官移植、先天性肾上腺增生、非化脓性甲状腺炎等。
4.甲泼尼龙原料药开发的工艺路线：
[0005][0006]
在甲泼尼龙工艺生产中，甲波尼龙脱氢物通过碘化反应生成甲泼尼龙碘化物，而甲泼尼龙碘化物通常为不同比例混合的甲泼尼龙一碘化物(11β,17
–
二羟基-6α-甲基-21-碘代孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮)和甲泼尼龙二碘化物(11β,17
–
二羟基-6α-甲基-21-碘代孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮)，二者极性相近，难于分离，因此在生产中甲泼尼龙碘化物通常未经分析和分离直接进行下一步反应。到目前为止，没有任何有关文献报道甲泼尼龙碘化物中间体的分析方法。对于甲泼尼龙碘化物的控制，不仅能保证前一步物料甲泼尼龙脱氢
1.5ml/min，更佳地为1.0ml/min。
[0022]
所述分析方法中，检测波长较佳地为220-250nm，例如230nm、240nm、245nm、250nm。
[0023]
所述分析方法中，所述色谱柱所采用的条件为本领域常规条件，所述色谱柱的填料颗粒度较佳地为3-5μm，更佳地为5μm。
[0024]
所述分析方法中，较佳地，所述色谱柱为ymc，ods-a，其规格为：15cm*4.6mm，5μm。
[0025]
所述分析方法中，所述色谱柱的柱温为本领域常规，较佳地为20-40℃，例如20℃、30℃、35℃或40℃。
[0026]
所述分析方法中，所述色谱柱的进样体积较佳地为1-100μl，更佳地为20μl。
[0027]
所述分析方法中，所述的待测物在洗脱前可进行预处理，以符合进样标准。所述的预处理可为本领域常规的预处理，较佳地，所述预处理包括下述步骤：将所述待测物溶解于溶剂中。所述溶剂较佳地为甲醇。
[0028]
所述分析方法中，较佳地，所述待测物的进样浓度为0.4-0.6mg/ml，例如0.4mg/ml、0.5mg/ml或0.6mg/ml。
[0029]
所述分析方法中，较佳地，所述待测物还包含甲泼尼龙脱氢物，所述甲泼尼龙脱氢物为6α-甲基-11β,17α-二羟基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮，如式iii所示，
[0030][0031]
所述分析方法中，较佳地，所述待测物还包含甲泼尼龙(11β,17,21-三羟基-6α-甲基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮)，如式iv所示，
[0032][0033]
所述分析方法中，较佳地，所述待测物为甲泼尼龙脱氢物通过碘化反应得到的产物。更佳地，将氯化钙、碘和甲醇混合得到碘液，将甲醇、二氯甲烷、氯化钙、甲泼尼龙脱氢物和氧化钙混合，加入上述碘液进行碘化反应，反应后加入氯化铵水溶液，水洗，分离，即可。
[0034]
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0035]
本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0036]
本发明的积极进步效果在于：本发明的方法具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高等特点，其适用于甲泼尼龙碘化物中间体及其杂质有效地分析，或进一步用于监测甲泼尼龙合成反应工艺、终产品或原料药及制剂的质量。
具体实施方式
[0037]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0038]
下述实施例中，所使用的液相色谱仪的型号为岛津lc-20at。
[0039]
制备例1：待检测样品的制备
[0040]
在25ml单口瓶中加入0.1g氯化钙，10ml甲醇，溶解后加入1.7g碘，作为碘液备用。在25ml单口瓶中加入2g氯化铵和10ml水配置成氯化铵溶液，作为氯化铵溶液备用。在100ml三口烧瓶中加入20ml二氯甲烷、0.2g氯化钙、0.3g氧化钙、2g甲泼尼龙脱氢物以及10ml甲醇，滴加碘液，反应1h左右。将配置好的氯化铵溶液抽入该三口烧瓶中，反应2h左右；在搅拌下，在反应液中加入30ml水，过滤，用少量水洗涤，收集滤饼，即得甲泼尼龙碘化物。
[0041]
实施例1
[0042]
色谱条件：
[0043]
进样体积：20μl，检测波长：230nm，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ymc，ods-a，15cm*4.6mm，5μm)，流速：1ml/min，柱温：20℃，流动相：甲醇、水和三氟乙酸，体积比为62:38:0.01，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的甲醇溶解后，用流动相稀释至0.4mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的1.5倍，结果如下所示。
[0044][0045]
备注:杂质a为甲泼尼龙，杂质b为甲泼尼龙脱氢物，杂质c为rrt≈0.94的未知杂质，杂质d为rrt≈1.59的未知杂质。
[0046]
实施例2
[0047]
色谱条件：
[0048]
进样体积：20μl，检测波长：240nm，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ymc，ods-a，15cm*4.6mm，5μm)，流速：1ml/min，柱温：30℃，流动相：甲醇、水和三氟乙酸，体积比为62:38:0.01，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的甲醇溶解后，用流动相稀释至0.5mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的2倍，结果如下所示。
[0049][0050]
实施例3
[0051]
色谱条件：
[0052]
进样体积：20μl，检测波长：250nm，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ymc，ods-a，15cm*4.6mm，5μm)，流速：1ml/min，柱温：35℃，流动相：甲醇、水和三氟乙酸，体积比为62:38:0.01，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的甲醇溶解后，用流动相稀释至0.6mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的3倍，结果如下所示。
[0053][0054][0055]
实施例4
[0056]
色谱条件：
[0057]
进样体积：20μl，检测波长：245nm，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ymc，ods-a，15cm*4.6mm，5μm)，流速：1ml/min，柱温：40℃，流动相：甲醇、水和三氟乙酸，体积比为62:38:0.01，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的甲醇溶解后，用流动相稀释至0.5mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的3.5倍，结果如下所示。
[0058][0059]
实施例5
[0060]
色谱条件：
[0061]
进样体积：20μl，检测波长：240nm，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ymc，ods-a，15cm*4.6mm，5μm)，流速：1ml/min，柱温：20℃，流动相：甲醇、水和三氟乙酸，体积比为54:46:0.01，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的甲醇溶解后，用流动相稀释至0.5mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的3倍，结果如下所示。
[0062][0063][0064]
实施例6
[0065]
色谱条件：
[0066]
进样体积：20μl，检测波长：230nm，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ymc，ods-a，15cm*4.6mm，5μm)，流速：1ml/min，柱温：20℃，流动相：甲醇、水和三氟乙酸，体积比为62:38:0.02，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的甲醇溶解后，用流动相稀释至0.4mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的3倍，结果如下所示。
[0067][0068]
对比例1
[0069]
色谱条件：
[0070]
进样体积：20μl，检测波长：230nm，色谱柱：辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(agilent，eclipse plus c8 5μm，4.6*150mm)，流速：1ml/min，柱温：20℃，流动相：甲醇、水和三氟乙酸，体积比为62:38:0.01，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的甲醇溶解后，用流动相稀释至0.4mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的1.5倍，结果如下所示。
[0071][0072]
结果显示，该方法无法实现甲泼尼龙一碘化物和二碘化物的有效分离。
[0073]
对比例2
[0074]
色谱条件：
[0075]
进样体积：20μl，检测波长：230nm，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ymc，ods-a，15cm*4.6mm，5μm)，流速：1ml/min，柱温：30℃，流动相：乙腈、水，体积比为60:40，样品配置：取检测的样品适量，精密称定，用适量的乙腈溶解后，用流动相稀释至0.4mg/ml浓度的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱至主峰保留时间的3倍，结果如下所示。
[0076][0077]
结果显示，该方法无法实现甲泼尼龙杂质b、杂质c、一碘化物和二碘化物的有效分离。