技术特征：
1.一种乙酰半胱氨酸的检测方法，为一种液质联用测定血浆中乙酰半氨酸浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，其特征在于，包括以下步骤：s1、血浆样品预处理；s2、试样测定：取测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中乙酰半胱氨酸和内标乙酰半胱氨酸-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的乙酰半胱氨酸浓度；其中：所述色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相a：水/甲酸＝100/0.1(v/v)；流动相b：甲醇/甲酸＝100/0.1(v/v)；洗液：乙腈/水＝50/50(v/v)；自动进样器温度为4℃；梯度洗脱；流速：0.4ml/min；进样量为5μl；分析时间为3min。2.根据权利要求1所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，步骤s1的具体步骤为：以k2edta为抗凝剂，以乙酰半胱氨酸-d3为内标；于96深孔板中精密加入40μl的血浆样品，混匀后加入40μl的内标乙酰半胱氨酸-d3溶液，混匀后加入40μl新鲜配置的1
w/v
％dtt溶液混合，混合均匀后加入200μl100％甲醇于96深孔板中，涡旋混合10min；于4℃以3000rpm离心10min.，取上层清液100μl至装有100μl水的96深孔板中，涡旋混匀，于4℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测。3.根据权利要求1所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，步骤s2液相色谱测定过程中，色谱柱选自gl sciences inc.,inertsustain aq-c18 hp，3μm，柱规格为50
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2.1mm，色谱柱温为40℃。4.根据权利要求1所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，步骤s2中梯度洗脱程序为：总时间(min)流动相a(％)流动相b(％)09281.2085151.2101002.0001002.019283.009285.根据权利要求1所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，步骤s2质谱测定条件为：离子源采用电喷雾离子源，喷雾电压为4500v，加热块温度为400℃，喷雾气流量为3l/
min，加热气流量为10l/min，接口温度伟300℃，q1 pre偏差电压分别为-17ev的乙酰半胱氨酸和乙酰半胱氨酸-d3；碰撞电压分别为-13ev的乙酰半胱氨酸和乙酰半胱氨酸-d3；q1 pre偏差电压分别为-18ev的乙酰半胱氨酸和乙酰半胱氨酸-d3；正离子方式检测；扫描方式为多重反应检测。6.根据权利要求5所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，步骤s2质谱测定条件为：用于定量分析的离子反应分别为：m/z164.0
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m/122.0，其为乙酰半胱氨酸；和m/z167.0
→
m/z123.0，其为乙酰半胱氨酸-d3。7.根据权利要求1所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，步骤s2中试样测定步骤为：采用内标法，以乙酰半胱氨酸和内标乙酰半胱氨酸-d3的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样品中的乙酰半胱氨酸的浓度。8.根据权利要求7所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，取5μl标准样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中的乙酰半胱氨酸和内标乙酰半胱氨酸-d3的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的乙酰半胱氨酸的浓度。9.根据权利要求8所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，标准样品的制备方法为：取190μl替代血浆10份置于1.5ml离心管中，以储备液的形式添加10μl浓度分别为200ng/ml、400ng/ml、1000ng/ml、2000ng/ml、8000ng/ml、30000ng/ml、80000ng/ml、100000ng/ml的乙酰半胱氨酸溶液至最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样本中，混匀后分别向最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样本、零浓度样本加入40μl的内标乙酰半胱氨酸-d3溶液，向空白样本中加入40μl的体积比为5％dtt甲醇水溶液，混匀后分别向10份样本中加入200μl的甲醇于96深孔板中，涡旋混合1min，于4℃以3000rpm离心10min，分别取上层清液100μl至装有100μl水的96深孔板中，涡旋混匀，于4℃以3000rpm离心5min后作为10份标准样品待检测。10.根据权利要求9所述的一种乙酰半胱氨酸的检测方法，其特征在于，所述替代血浆的制备方法为：使用磷酸盐缓冲溶液稀释血浆100倍而制得。
技术总结
本发明公开了一种乙酰半胱氨酸的检测方法，为一种液质联用测定血浆中乙酰半氨酸浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，包括以下步骤：S1、血浆样品预处理；S2、试样测定：取测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中乙酰半胱氨酸和内标乙酰半胱氨酸-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的乙酰半胱氨酸浓度。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为乙酰半胱氨酸的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为10～5000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于
技术研发人员：黄启宽 祝永琴 胡海俊 金莹莹
受保护的技术使用者：上海精翰生物科技有限公司
技术研发日：2022.04.08
技术公布日：2022/6/24